Effect of coexpression of interleukin-2 by recombinant respiratory syncytial virus on virus replication, immunogenicity, and production of other cytokines

doi:10.1128/jvi.74.15.7151-7157.2000

.2000年8月；74(15):7151-7.

doi:10.1128/jvi.74.15.7151-7157.2000。

重组呼吸道合胞病毒共表达白细胞介素-2对病毒复制、免疫原性和其他细胞因子产生的影响

巴克利夫¹, S S怀特黑德, C刺客, B R墨菲, P L柯林斯

附属公司

PMID： 10888656
预防性维修识别码：项目经理112234
内政部： 10.1128/jvi.74.15.7151-7157.2000

重组呼吸道合胞病毒共表达白细胞介素-2对病毒复制、免疫原性和其他细胞因子产生的影响

巴克利夫等。 J维罗尔. 2000年8月.

.2000年8月；74(15):7151-7.

doi:10.1128/jvi.74.15.7151-7157.2000。

作者

巴克利夫¹, S S怀特黑德, C刺客, B R墨菲, P L柯林斯

附属

¹美国马里兰州贝塞斯达国家过敏和传染病研究所传染病实验室。

PMID： 10888656
预防性维修识别码：项目经理112234
内政部： 10.1128/jvi.74.15.7151-7157.2000

摘要

我们在插入G-F基因间区的转录盒中构建了rRSV/mIL-2，这是一种含有小鼠白细胞介素-2（mIL-2）编码序列的重组呼吸道合胞病毒（rRSV）。回收的病毒（rRSV/mIL-2）在细胞培养中表达高水平的mIL-2（高达2.8微克/毫升）。rRSV/mIL-2的体外复制比野生型rRSV减少了13.6倍，这是由于存在外来插入物，但不是mIL-2特有的。rRSV/mIL-2病毒在BALB/c小鼠上下呼吸道的复制减少了6.3倍，这是mIL-2特有的效果。抗体反应，包括RSV特异性血清免疫球蛋白G1（IgG1）、IgG2a、IgA和总IgG水平，以及对wt-RSV攻击的保护效力水平与wt-rRSV没有显著差异。对rRSV/mIL-2感染后1天和4天分离的总肺细胞因子mRNA的分析显示，与wtrRSV相比，IL-2、γ干扰素（IFN-gamma）、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13和IL-12 p40的mRNA水平升高。感染rRSV/mIL-2后10天分离的总肺单核细胞流式细胞术显示，与wt rRSV相比，表达IFN-gamma或IL-4的CD4（+）T淋巴细胞水平升高在第28天用wt RSV攻击后，没有观察到相对于wt rRSV引发的动物的细胞的细胞。因此，rRSV的mIL-2表达与体内病毒生长适度减弱、血清抗体诱导水平与wt rRSV相当、Th1和Th2 CD4（+）淋巴细胞和细胞因子mRNA与wt r RSV相比瞬时增加有关。

PubMed免责声明

数字

图1
rRSV/mIL-2基因图谱。mIL-2 ORF的一个cDNA，其翻译停止和启动密码子为粗体，经PCR修饰后，两侧有RSV特异性基因启动子和基因编码转录信号（装箱）和*圣诞节*I站点（下划线）。将产生的mIL-2转录盒插入G和F基因之间的基因间区域，使用*圣诞节*I先前放置在那里的场地（1）。le，先导区；tr，拖车区域。

图2
在BALB/c小鼠的上呼吸道（鼻甲）和下呼吸道（肺）中复制rRSV/mIL-2、rRSV/CAT和wt-rRSV。每只动物鼻内感染10只⁶指示病毒的PFU。在指定的日期，每组五只动物被处死，采集鼻甲和肺部，并通过菌斑试验测定病毒滴度。数据显示为病毒的平均浓度（log₁₀PFU/g组织）和标准偏差。Student的rRSV/mIL-2与wt rRSV相比滴度降低的统计意义t吨测试：鼻甲，第3天，*P（P）*< 0.01; 第4天，*P（P）*< 0.02; 以及第5天，*P（P）*< 0.1; 对于肺部，第3天，*P（P）*< 0.05; 第4天，*P（P）*< 0.05; 第5天，*P（P）*< 0.001.

图3
感染10只小鼠的IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13和IL-12 p40的肺mRNA积累⁶每只动物或单独接受培养基的rRSV/mIL-2或wt rRSV的PFU（模拟）。在第1天和第4天，每组处死4或5只小鼠，通过前面描述的RNase保护试验（2），使用RiboQuant多探针RNase保护试验系统（PharMinen）和两个不同的探针模板集，即mCK-1和mCK-2B，分离并分析总肺RNA。对每只小鼠分别进行分析，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到的每种受保护物种通过磷成像进行定量，并计算为同一样本中L-32看家基因mRNA数量的百分比。显示了各组每天的平均值和标准偏差。请注意，每个年轴具有不同的比例。

图4
显示CD4流式细胞术分析的点图⁺表达IL-4（IL4-PE）或IFN-γ（IFN-γFITC）的淋巴细胞。小鼠感染了10只⁶wt rRSV或rRSV/mIL-2或模拟感染的PFU。10天后处死动物，并处死肺CD4⁺收集细胞并进行流式细胞术分析。CD4的百分比⁺每个图显示三个象限中的单元格。每个图表示单个鼠标的单元格。

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[5] Collins P L、Hill M G、Camargo E、Grosfeld H、Chanock R M、Murphy B R。从克隆的cDNA中生产感染性人类呼吸道合胞病毒证实了M2 mRNA 5′近端开放阅读框中转录延伸因子在基因表达中的重要作用，并为疫苗开发提供了能力。美国国家科学院院刊1995；92:11563–11567.-项目管理咨询公司-公共医学

[6] Collins P L、Hill M G、Camargo E、Grosfeld H、Chanock R M、Murphy B R。从克隆的cDNA中生产感染性人类呼吸道合胞病毒证实了M2 mRNA 5′近端开放阅读框中转录延伸因子在基因表达中的重要作用，并为疫苗开发提供了能力。美国国家科学院院刊1995；92:11563–11567.-项目管理咨询公司-公共医学

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[8] Collins P L、McIntosh K、Chanock R M.呼吸道合胞病毒。收录：Fields B N、Knipe D M、Howley P M、Chanock R M、Melnick J L、Monath T P、Roizman B、Straus S E编辑。菲尔德病毒学。第3版，第2卷。宾夕法尼亚州费城：Lippincott-Raven；1996年，第1313-1352页。

[9] Collins P L、Whitehead S S、Bukreyev A、Fearns R、Teng M N、Juhasz K、Chanock R M、Murphy B R。通过反向遗传学合理设计人呼吸道合胞病毒活性减毒重组疫苗病毒。高级病毒研究1999；54:423–451.-公共医学

[10] Collins P L、Whitehead S S、Bukreyev A、Fearns R、Teng M N、Juhasz K、Chanock R M、Murphy B R。通过反向遗传学合理设计人呼吸道合胞病毒活性减毒重组疫苗病毒。高级病毒研究1999；54:423–451.-公共医学

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