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.2000年6月20日;272(1):225-34.
doi:10.1006/viro.2000.0372。

人类副流感病毒3型HN和L蛋白编码区之间的长核苷酸插入产生具有温度敏感性和衰减表型的病毒

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人类副流感病毒3型HN和L蛋白编码区之间的长核苷酸插入产生具有温度敏感性和衰减表型的病毒

M H Skiadopoulos先生等。 病毒学. .
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摘要

重组副流感病毒3(rPIV3)正被开发成一种载体,以表达外源基因作为二价或多价减毒活病毒疫苗。在本研究中,我们检测了插入的外源序列在体外和体内对病毒复制的影响,重点是插入长度参数。在一种构造类型中,长度增加的外源序列两侧有PIV3转录信号,并作为一个额外的基因单位(GU插入)插入HN和L基因之间,从而产生一个额外mRNA。在第二种结构中,将外源序列插入HN基因的下游NCR(NCR插入),以便编码的mRNA数量保持不变。在每种情况下,外源序列都被设计为缺乏任何显著的开放阅读框架,这允许独立于表达蛋白的影响来评估插入长度对复制的影响。GU或NCR插入物的大小从168个核苷酸(nt)到3918 nt不等。含有长度高达3918 nt的GU插入物的rPIV3s是测试中最大的插入物,在体外允许的温度下可以存活并有效复制,但在39°C和40°C时,斑块大小减少。插入3918-nt GU的rPIV3在仓鼠上呼吸道(五倍)和下呼吸道(25倍)中的复制受到限制。虽然1908-nt GU的插入并没有显著改变野生型PIV3在体外或体内的复制,但它的引入显著增加了冷传减毒PIV3疫苗病毒L蛋白的三个突变所规定的温度敏感性(ts)和衰减(att)水平。携带3126-nt或3894-nt NCR插入的rPIV3s在体外和体内表现出与携带类似大小GU插入的rPI V3s相似的表型。这些发现表明,通过GU或NCR插入,基因组长度增加了3000 nt以上的rPIV3s表现出意外的宿主范围表型,即体外高效复制,但在仓鼠中复制受限,尤其是在下呼吸道。此外,当rPIV3主干含有其他ts或att突变时,这些效应会大大增强。讨论了这些发现对使用单链负义RNA病毒作为疫苗载体的意义。

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