Recombinant rabies virus as potential live-viral vaccines for HIV-1

doi:10.1073/pnas.97.7.3544

.2000年3月28日；97(7):3544-9.

doi:10.1073/pnas.97.7.3544。

重组狂犬病病毒作为潜在的HIV-1活病毒疫苗

M J Schnell先生¹, H D福利, C A筒仓, J P McGettigan公司, B迪茨施罗德, R J波美兰茨

附属机构

附属

¹美国宾夕法尼亚州费城托马斯杰斐逊大学杰斐逊医学院多兰斯·汉密尔顿实验室人类病毒学中心、生物化学和分子药理学系，邮编：19107。matthias.schnell@mail.tju.edu

PMID： 10706640
预防性维修识别码： PMC16276型
DOI（操作界面）： 10.1073/pnas.97.7.3544

重组狂犬病病毒作为潜在的HIV-1活病毒疫苗

M J Schnell先生等。美国国家科学院程序. 2000.

.2000年3月28日；97(7):3544-9.

doi:10.1073/pnas.97.7.3544。

作者

M J Schnell先生¹, H D福利, C A筒仓, J P McGettigan公司, B迪茨施罗德, R J波美兰茨

附属

¹美国宾夕法尼亚州费城托马斯杰斐逊大学杰斐逊医学院多兰斯·汉密尔顿实验室人类病毒学中心、生物化学和分子药理学系，邮编：19107。matthias.schnell@mail.tju.edu

PMID： 10706640
预防性维修识别码： PMC16276型
DOI（操作界面）： 10.1073/pnas.97.7.3544

摘要

从实验室适应型（CXCR4-tropic）和主要（双重）HIV-1分离物中表达HIV I型（HIV-1）包膜糖蛋白（gp160）的重组狂犬病病毒（RV）疫苗株基载体被开发出来。除其他RV蛋白外，RV基因组内的额外转录停止/启动单元用于表达HIV-1 gp160。人类T细胞株感染重组RV后融合表明，HIV-1 gp160蛋白稳定且功能性表达。用表达HIV-1 gp160的重组RV接种小鼠，在用重组HIV-1 gp120蛋白单次增强后，诱导了针对HIV-1包膜蛋白的强烈体液反应。此外，在小鼠血清中可以检测到高达1:800的抗HIV-1的中和滴度。这些数据表明，表达HIV-1 gp160的活重组RV（一种弹状病毒）可作为HIV-1疫苗的有效载体。

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数字

图1
重组RV基因组的构建。顶部显示了带有五个ORF的野生型RV基因组（SAD L16）。通过使用PCR策略和定点突变，删除了整个Ψ基因，并在G和L基因（SBN）之间引入了一个新的包含两个单位点的最小RV转录单元。编码HIV-1的cDNA序列_89.6或HIV-1_NL4-3型gp160是通过使用*Bsi公司*WI和*Nhe公司*产生质粒pSBN-89.6或pSBN-NL4-3的I位点（底部）。

图2
重组RV的一步生长曲线。用重组RV（SBN、SBN-89.6和SBN-NL4-3）感染BSR细胞，如*材料和方法*，并在指定的时间点重复测定病毒滴度。

图3
表达HIV-1 gp160的重组RV的Western blot分析。用SBN、SBN-89.6或SBN-NL4-3感染Sup-T1细胞，24小时后进行裂解。蛋白质通过SDS/PAGE分离，并通过Western blotting进行分析。针对gp120的抗体在感染SBN-89.6或SBN-NL4-3的细胞裂解液中检测到预期大小的HIV-1 gp160和gp120两条带(对，车道3和4）。在模拟或SBN感染细胞中均未检测到信号(对，车道1和2）。用针对RV的多克隆抗体证实重组RV成功感染细胞(左侧，车道2、3和4）。

图4
使用含有SBN、SBN-89.6或SBN-NL4-3的moi 1感染Sup-T1细胞。感染后24小时，在感染表达HIV-1 gp160的重组RV的细胞培养物中检测到合胞体形成(居中和对)，表示功能性HIV-1包膜蛋白的表达。在感染野生型RV的培养物中未检测到细胞融合(左侧).

图5
小鼠血清对HIV-1 gp120的ELISA反应性。分别用重组RV（SBN、SBN-89.6或SBN-NL4-3）免疫五只小鼠，并且在首次感染后3个月，每组三只小鼠用重组HIV-1 gp120和gp41（SBN*、SBN-88.6*或SBN-NS4-3*）进行增强。图表上的每个数据点表示每组小鼠在三个独立实验中的平均值。SBN-89.6组中的一只小鼠对升压注射没有反应，也没有出现在图表中。误差条表示标准偏差。

图6
小鼠血清抗体对HIV-1抗原反应的Western blot分析。各组（SBN、SBN-89.6或SBN-NL4-3）中一只小鼠的血清，用RV（α-SBN、α-SBN-89.6或α-SBN-NL4-3）免疫，或免疫并注射重组gp120和gp41（α-SPN*、α-SPN-89.6*或α-SPN-NL4-3*），按1:100稀释液进行临床Western blot测试，如*材料和方法*使用高阳性和弱阳性人类对照血清检测HIV-1蛋白的位置。SC表示血清对照。

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