Role of dendritic cell targeting in Venezuelan equine encephalitis virus pathogenesis

doi:10.1128/jvi.74.2.914-922.2000

.2000年1月；74(2):914-22.

doi:10.1128/jvi.74.2.914-922.2000。

树突状细胞靶向在委内瑞拉马脑炎病毒发病机制中的作用

G H麦克唐纳¹, R E约翰斯顿

附属公司

PMID： 10623754
预防性维修识别码：项目经理111612
DOI（操作界面）： 2012年10月10日/jvi.74.2.914-922.2000

树突状细胞靶向在委内瑞拉马脑炎病毒发病机制中的作用

G H麦克唐纳等。 J维罗尔. 2000年1月.

.2000年1月；74(2):914-22.

doi:10.1128/jvi.74.2.914-922.2000。

作者

G H麦克唐纳¹, R E约翰斯顿

隶属关系

¹美国北卡罗来纳州教堂山北卡罗来那大学教堂山医学院微生物与免疫学系，邮编：27599-7290。gmacd@med.unc.edu

PMID： 10623754
预防性维修识别码：项目经理111612
DOI（操作界面）： 10.1128/jvi.74.2.914-922.2000

摘要

委内瑞拉马脑炎病毒（VEE）从皮肤接种传播到引流淋巴结的最初步骤已经确定。采用绿色荧光蛋白和免疫细胞化学方法，在接种后48小时内，确定引流淋巴结中的树突状细胞是VEE感染的主要靶点。VEE病毒复制子颗粒只能经历一轮感染，它确定朗格汉斯细胞是接种后直接感染VEE的初始细胞集。这些细胞是皮肤中常驻的树突状细胞，在活化后迁移至引流淋巴结。VEE E2糖蛋白基因中的一个点突变使病毒无毒，并影响其扩散到引流淋巴以外的能力，从而阻止了体内淋巴结中病毒感染的树突状细胞的出现。第二个位点的抑制突变可以恢复病毒向淋巴组织的传播并部分恢复毒性，同样可以恢复VEE感染体内树突状细胞的能力。

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数字

图1
V3000克隆和载体的遗传图谱。亲本病毒V3000的图表，描绘了基因组启动子（G）、亚基因组26S启动子（26S）和非结构基因（nsP1-nsP4）、衣壳蛋白和糖蛋白基因（E1到E3）（a）、双启动子表达载体dpV3000-GFP（b）以及带有pGFP-VRP、衣壳、，糖蛋白助手（c）。在表达复制子中，结构蛋白基因被删除，并被26S启动子下游的mut2GFP基因取代。VEE衣壳基因和糖蛋白基因由单独的辅助RNA提供，其中保留了VEE基因组的5′端和3′端，但从中删除了大多数非结构基因区域，包括封装信号（7）。当共同电穿孔到同一细胞中时，这三个RNA提供了所有必需的VEE功能，导致编码GFP的感染性VRP组装并释放到培养基中。

图2
VEE感染引流淋巴结中的DC。后脚垫皮下接种后12小时腘淋巴结引流切片，10^三dpV3000-GFP的PFU（a至c），显示GFP阳性细胞在引流腘淋巴结（a和b）皮质（放大倍率分别为×100和×400）和b细胞滤泡周围的分布和形态^三V3000的PFU（d至f），显示VEE特异性Ab（CY2；绿色）和DC特异性Ab（DEC 205；得克萨斯红；红色）的双重免疫染色，通过使用得克萨斯红过滤器（d）、异硫氰酸荧光素过滤器（e）或三通过滤器使CY2和得克萨斯红同时可视化（f；放大倍数，×400）。

图3
朗格汉斯细胞是接种后感染的第一批细胞。（a和b）腿部切片，显示在后脚垫皮下接种10个^三GFP-VRP-V3000的IU（放大倍数分别为×100和×400）。（c至f）感染10只小鼠8小时后排空其淋巴结切片^三用针对流感病毒（c和e）、DC（d；DEC 205）或MHC II类（f）的抗体对HA-VRP-3000的IU进行双重免疫染色，并用共焦显微镜（放大倍数×600）分析0.5μm厚的切片。

图4
VEE感染细胞的运动动力学。在后足垫接种10个GFP阳性细胞后，立即测定足垫（孵化）和腹腔引流淋巴结（固体）中GFP阳性的细胞数量^三GFP-VRP-3000的IU。在规定的时间，手术切除组织并作为组织外植体在37°C下培养12小时（体内和体外）。组织连续切片，用荧光显微镜测定每个组织中GFP阳性细胞的总数。每个时间点代表两对脚垫和引流淋巴结的平均值。

图5
VEE E2糖蛋白基因的单一突变可防止DC体内感染，而第二位点抑制突变可恢复VEE感染DC的能力。在后脚垫接种皮下注射10后12小时的引流淋巴结切片^三GFP-VRP-V3010（放大倍数×600）（a）、GFP-VRP V3533（放大倍数，×400）（b）或HA-VRP-V3533（c至f）的IU。用流感病毒和FcγIII/IIR特异性抗体对HA-GFP-V3533切片进行双重免疫染色，并用共焦显微镜（放大倍率，×600）（c和d）或流感病毒和CR-1（e和f）进行分析，用荧光显微镜（放大倍率，×60）（e和f）进行分析。

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