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.1999年11月1日；190(9):1285-96.
doi:10.1084/jem.190.9.1285。

小鼠巨细胞病毒基因m152编码的免疫逃避功能保护病毒免受体内T细胞控制

一个Krmpotic 1, M Messerle先生, I Crnkovic-Mertens公司, B警察, S Jonjic先生, U H Koszinowski先生
附属公司

小鼠巨细胞病毒基因m152编码的免疫逃避功能保护病毒免受体内T细胞控制

一个Krmpotic等。 实验医学杂志. .

摘要

巨细胞病毒编码多种功能，在体外抑制主要组织相容性复合体（MHC）I类通路中的抗原提呈。一个例子是由m152基因编码的小鼠巨细胞病毒（MCMV）糖蛋白gp40，它在内质网-高尔基中间隔室/顺高尔基隔室中选择性地保留小鼠而非人类MHC I类复合物（Ziegler，H.，R.Thäle，P.Lucin，W.Muranyi，T.Flohr，H.Hengel，H.Farrell，W.Rawlinson和U.H。科斯齐诺夫斯基。1997.豁免。6:57-66). 为了研究该基因在自然宿主MCMV感染过程中的体内意义，我们构建了m152基因缺失的MCMV重组体，以及相应的病毒回复体。我们报告了以下发现：m152基因的缺失对细胞培养中的病毒复制没有影响，而在小鼠感染后，m152缺陷病毒复制后病毒滴度显著降低。通过将基因重新插入突变体中，可以提高这种衰减效果。在被剥夺病毒基因功能靶向功能的动物中，即在缺乏β2-微球蛋白的小鼠、缺乏CD8分子的小鼠和缺乏T细胞的小鼠中，突变和回复物生长到相同的滴度。将未经处理的淋巴细胞过继转移到受感染的小鼠体内后，m152基因功能的缺失会使病毒对初级淋巴细胞的控制更敏感。这些结果证明MHC反应功能在体内保护CMV免受CD8（+）T淋巴细胞的攻击。

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数字

图1
图1
的特征152米重组病毒。（A） 重组病毒的基因组结构。MCMV Smith株基因组的HindIII裂解图显示在顶部，野生型和重组病毒的扩展HindIII E区域显示在下面，并显示了HindIII（H）和EcoRI（E）裂解位点。带有箭头的打开框描述了152米基因和阴影框代表用于同源重组的病毒序列。The positions of the液氧磷站点用星号（*）表示。用于选择的标记基因，洛克兹和通用测试，被指示。用于Southern blot分析的探针由一个条表示。HindIII和EcoRI片段的预期大小用箭头表示。（B） 重组病毒基因组的Southern blot分析。从感染的NIH 3T3细胞中分离出DNA，并分别用限制性内切酶HindIII和EcoRI消化。DNA片段的大小以kb表示。
图1
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的特征152米重组病毒。（A） 重组病毒的基因组结构。MCMV Smith株基因组的HindIII裂解图显示在顶部，野生型和重组病毒的扩展HindIII E区域显示在下面，并显示了HindIII（H）和EcoRI（E）裂解位点。带有箭头的打开框描述了152米基因和阴影框代表用于同源重组的病毒序列。The positions of the液氧磷站点用星号（*）表示。用于选择的标记基因，洛克兹和通用测试，被指示。用于Southern blot分析的探针由一个条表示。HindIII和EcoRI片段的预期大小用箭头表示。（B） 重组病毒基因组的Southern blot分析。从感染的NIH 3T3细胞中分离出DNA，并分别用限制性内切酶HindIII和EcoRI消化。DNA片段的大小以kb表示。
图2
图2
功能特性152米缺失突变体。（A） 新合成的MHC I类分子在感染152米缺失突变体。B12细胞被模拟感染或感染野生型MCMV或ΔMC95.21和rMC96.27重组体。感染后6h，用脉冲标记细胞1h[35S] 蛋氨酸和新合成的分子被追捕2小时d日MHC I类复合物是从含有抗K的细胞裂解液中沉淀出来的d日单克隆抗体MA-215。一半沉淀用Endo H消化或模拟处理，然后用12.5%SDS-PAGE分离。MHC I类重链的不同糖基化形式与Endo H敏感性相关，表示为r，Endo H-resistant；s、 内皮H敏感；或d，消化Endo H。分子量标记。（B） 感染MHC的细胞中MHC I类抗原提呈的恢复152米缺失突变体。BALB/c MEF感染野生型（w.t.）MCMV152米缺失突变体ΔMC95.21和回复病毒rMC96.27，条件是只允许表达IE（Δ）或IE和E病毒蛋白（•）。用MCMV抗原pp89特异性CTL以指示的E/T比率在4小时内检测抗原提呈51铬释放试验。
图2
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功能特性152米缺失突变体。（A） 新合成的MHC I类分子在感染152米缺失突变体。B12细胞被模拟感染或感染野生型MCMV或ΔMC95.21和rMC96.27重组体。感染后6h，用脉冲标记细胞1h[35S] 蛋氨酸和新合成的分子被追捕2小时d日MHC I类复合物是从含有抗K的细胞裂解液中沉淀出来的d日单克隆抗体MA-215。在通过12.5%的SDS-PAGE分离之前，用Endo H消化或模拟处理一半的沉淀物。MHC I类重链的不同糖基化形式与Endo H敏感性相关，表示为r，Endo H-resistant；s、 内皮H敏感；或d，消化Endo H。分子量标记。（B） MHC I类抗原在感染152米缺失突变体。BALB/c MEF感染野生型（w.t.）MCMV152米缺失突变体ΔMC95.21和回复病毒rMC96.27，条件是只允许表达IE（Δ）或IE和E病毒蛋白（•）。用MCMV抗原pp89特异性CTL以指示的E/T比率在4小时内检测抗原提呈51铬释放试验。
图3
图3
重组病毒的体外生长。NIH 3T3细胞感染野生型MCMV（○）、△MC95.24（▴）或ΔMC95.21（•）重组体，感染倍数为0.1个PFU/细胞。在感染（p.i.）后的指定时间点采集上清液（A）和细胞（B），并测定病毒滴度。
图5
图5
衰减152米缺失突变体依赖T细胞。（A） 4天龄的BALB/c和C57BL/6小鼠CD4缺失+和CD8+T淋巴细胞或未经治疗，然后腹腔注射1000 PFUΔMC95.24（○）或rMC96.27病毒（•）。感染后10d测定病毒滴度。显示了单个鼠标的标题（圆圈）和中值（水平条）。两种小鼠株中ΔMC95.24和rMC96.27的病毒滴度存在显著差异(P（P）< 0.005; 左侧面板）。T细胞耗竭消除了这种差异（右侧面板）。（B） 8周龄B细胞缺乏小鼠（μMT−/−，BALB/c背景）的CD8缺失+T细胞或CD4两者+和CD8+T淋巴细胞或未经治疗。小鼠感染2×105感染后10天测定ΔMC95.24和rMC96.27病毒的PFU i.p.和病毒滴度。显示了动物个体的滴度和中值（水平条）。感染ΔMC95.24和rMC96.27的非缺失小鼠组之间的病毒滴度差异显著(P（P）<0.005），用于肺部和脾脏中的滴度（左侧面板）。两种T细胞亚群的耗竭消除了两种重组体在两个受试器官中的差异（右表）。仅消耗CD8+T细胞减少，但没有消除两种病毒之间的差异(P（P）< 0.05; 中央面板）。DL，检测限。
图4
图4
毒力和复制能力降低152米体内缺失突变。（A） 新生BALB/c小鼠在产后12 h腹腔接种100只野生型（w.t.）MCMV（○）、ΔMC95.24（填充灰色三角形）或rMC96.27（•）病毒的PFU，并每天监测其存活率。（B） 如A所示感染新生BALB/c小鼠，并在感染后8 d测定病毒滴度。数据表示至少五只小鼠的平均值。
图4
图4
毒力和复制能力降低152米体内缺失突变体。（A） 新生BALB/c小鼠在产后12 h腹腔接种100只野生型（w.t.）MCMV（○）、ΔMC95.24（填充灰色三角形）或rMC96.27（•）病毒的PFU，并每天监测其存活率。（B） 如A所示感染新生BALB/c小鼠，并在感染后8 d测定病毒滴度。数据表示至少五只小鼠的平均值。
图6
图6
无生长差异152米β中的缺失和回复病毒2米−/−和CD8−/−老鼠。正常C57BL/6，β2米−/−和CD8−/−用1000 PFU i.p.ΔMC95.24（开放条）或rMC96.27（阴影条）重组病毒接种小鼠（均为4日龄）。显示感染后10天肺部的病毒滴度。数据表示五只小鼠的平均值。ΔMC95.24和rMC96.27病毒的病毒滴度存在显著差异(P（P）< 0.005). 两种病毒在β2米−/−和CD8−/−小鼠不显著。
图7
图7
敏感性152米MCMV提呈的T淋巴细胞的缺失突变。8周龄BALB/cγ射线照射小鼠注射105ΔMC95.24或rMC96.27病毒的PFU。2 × 105从潜伏感染或未感染BALB/c小鼠中获得T淋巴细胞，感染后立即将细胞静脉转移到受体。未接受细胞移植的小鼠作为阴性对照。所示为单个受者的滴度，在转移和感染后13天测量。水平条表示中值。DL，检测限。
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