Mitogen-activated protein kinase kinase activity is required for the G(2)/M transition of the cell cycle in mammalian fibroblasts

doi:10.1073/pnas.96.20.11335

.1999年9月28日；96(20):11335-40.

doi:10.1073/pnas.96.20.11335。

哺乳动物成纤维细胞细胞周期的G（2）/M转变需要有丝分裂原激活的蛋白激酶活性

J H赖特¹, E穆纳尔, D R詹姆逊, P R安德烈森, R L马戈利斯, R赛格, E G克雷布斯

附属机构

PMID： 10500177
预防性维修识别码：项目经理18034
DOI（操作界面）： 10.1073/pnas.96.20.11335

哺乳动物成纤维细胞细胞周期的G（2）/M转变需要有丝分裂原激活的蛋白激酶活性

J H赖特等人。美国国家科学院程序. 1999.

.1999年9月28日；96(20):11335-40.

doi:10.1073/pnas.96.20.11335。

作者

J H赖特¹, E穆纳尔, D R詹姆逊, P R安德烈森, R L马戈利斯, R Seger公司, E G克雷布斯

附属

¹华盛顿大学药理学系，西雅图，WA 98103，美国。jocelyn-wright@sugen.com

PMID： 10500177
预防性维修识别码：项目经理18034
DOI（操作界面）： 10.1073/pnas.96.20.11335

摘要

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联是体细胞有丝分裂所必需的，并被多种致癌刺激激活。通过抑制高度同步化NIH 3T3细胞中MAPK激酶1（MAPKK1）的活性，分析了该信号模块在生长中的特定作用。除了已知该激酶在G（0）细胞周期进入中的作用外，还观察到MAPKK活性水平影响NIH 3T3细胞周期G（1）和G（2）期的进展动力学。先前研究表明，显性负性形式的MAPKK1的异位表达可以抑制G（0）/G（1）的进展，也可以通过G（2）延缓细胞的进展。此外，在同步S期用特异性MAPKK抑制剂PD 98059处理细胞，可将细胞阻滞在随后的G（2）期。这些数据证明了MAPK级联在NIH 3T3细胞从G（2）进入有丝分裂过程中的新作用。

PubMed免责声明

数字

图1
显性负性MAPKK突变体异位表达对细胞周期进展的影响。(A类)显示了用PI染色的同步生长的MAPKK1突变表达细胞的DNA含量的FACS图谱。A类和B类显示了在G区蚜虫精释放后一系列时间点用PI染色的细胞DNA含量的剖面图₁/S过渡。0小时时(上部)当去除蚜虫精时，细胞有2个n个DNA含量。当它们进入S期时，每个细胞的荧光强度增加（峰值向右移动），得到＞2n个但<4n个在6小时时，大多数细胞具有4n个DNA含量和在G中的累积₂/M峰值。在接下来的3小时内，模拟细胞通过G₂和M，并恢复G中的2N DNA含量₁（9小时）。到15小时，模拟细胞已经完成一个细胞周期，并进入第二轮S期。“Mock”是转染pcDNA3载体的细胞系；“S222A”是转染S222A-MAPKK1突变体的细胞系；“K97A”是一种转染K97A-MAPKK1突变体的细胞系。(B类)通过模拟转染和S222A MAPKK-突变转染细胞系同步提取物的凝胶迁移率变化分析，测定了表达MAPKK1突变体的NIH 3T3细胞系的MAPK磷酸化。未磷酸化和磷酸化ERK1和ERK2的位置显示在每个面板的右侧。

图2
MAPKK突变体延迟G₂/同步化细胞中MPM-2抗体反应性和CDC2活化可观察到M转变。(A类)从模拟和MAPKK-S222A突变转染细胞系中比较PI和MPM-2抗体/FITC二级抗体染色细胞的二维FACS分析。点图显示相对PI荧光强度(x个轴线；线性）与相对FITC/MPM-2荧光强度(年轴线；对数）。显示了一个具有代表性的数据集。(B类)从两个数据集绘制了相对FITC荧光与时间的关系图，其中一个数据集来自上述数据集(左侧)比较模拟转染（黑圈）和MAPKK S222A突变表达（白色方块）细胞系。比较MAPKK S222E（黑色方块）和S222A显性阴性（白色方块）MAPKK突变表达细胞系(对). (C类)MAPKK S222A突变和模拟转染细胞系中CDC2激活的时间和幅度的比较。显示了磷酸化组蛋白H1的SDS/PAGE分析的自射线照片和凝胶的荧光成像仪（PI）定量。这个x个轴是细胞释放到S期后的时间。

图3
PD98059对G的影响₂进展。(A类)在蚜虫灵存在下用PDGF刺激静止细胞20小时。细胞释放到S期（0小时）。在S期晚期（8小时），向细胞中加入100μM PD 98059/DMSO或单独的DMSO。释放后15、20、25和30小时，用PI对细胞进行DNA含量染色，并用FACS进行分析。(B类)向晚期S期细胞添加100μM PD 98059对随后激活细胞周期蛋白B-CDC2复合物的影响。在所示的8小时时间点添加PD 98059或DMSO载体对照。图中显示了磷酸化组蛋白H1的放射自显影。凝胶的PhosphorImager定量如下图所示。(C类)激酶抑制和G所需剂量的比较₂延迟。上图显示了G中细胞的百分比₁（堆叠的灰色条）和G₂（黑条）作为药物浓度的函数1n个微摩尔每升。在S期晚期（8小时）加入PD 98059，收集细胞并在20小时的时间点进行染色，如A类下图显示了MAPK和MAPKK的相对活性与PD 98059剂量的关系。静态NIH 3T3细胞在用0.2 nM PDGF刺激30 min之前，用指示浓度的PD 98059或DMSO载体处理30 min。用ERK2作为底物的偶联分析测定MAPKK活性（黑条）。以髓鞘碱性蛋白为底物测定MAPK活性（灰条）。

图4
PD98059在无蚜虫灵处理的情况下对细胞周期进展的影响。细胞在低密度下培养并在低血清中生长48小时。加入PDGF诱导其进入细胞周期。20小时后，当细胞全部进入细胞周期时，将PD 98059添加到100μM或同等体积的二甲基亚砜中。在血清刺激后37和43小时收集细胞并用PI进行FACS染色。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

体细胞有丝分裂中细胞外信号调节激酶和磷脂酰肌醇3-激酶信号通路的不同细胞周期时间要求。
Roberts EC、Shapiro PS、Nahreini TS、Pages G、Pouyssegur J、Ahn NG。 Roberts EC等人。分子细胞生物学。2002年10月；22(20):7226-41. doi:10.1128/MCB.22.20.7226-7241.2002。分子细胞生物学。2002 PMID：12242299 免费PMC文章。
有丝分裂原活化蛋白激酶级联和转录因子：MKK3/6-p38K和MKK1-MAPK的相反作用。
Terada Y、Nakashima O、Inoshita S、Kuwahara M、Sasaki S、Marumo F。 Terada Y等人。肾拨号移植。1999;14补充1:45-7。doi:10.1093/ndt/14.suppl_1.45。肾拨号移植。1999 PMID：10048449 审查。
p42有丝分裂原激活的蛋白激酶途径的激活抑制了Cdc2的激活和循环爪蟾卵提取物进入M期。
Bitangcol JC、Chau AS、Stadnick E、Lohka MJ、Dicken B、Shibuya EK。 Bitangcol JC等人。分子生物学细胞。1998年2月；9(2):451-67. doi:10.1091/mbc.9.2.451。分子生物学细胞。1998 PMID：9450967 免费PMC文章。
解读MAP激酶途径。
L’Allemain G。阿莱曼·G。 Prog生长因子研究，1994年；5(3):291-334. doi:10.1016/0955-2235（94）90011-6。 1994年Prog Growth Factor Res。 PMID：7888635 审查。
PD 098059是体内外丝裂原活化蛋白激酶活化的特异性抑制剂。
Alessi DR、Cuenda A、Cohen P、Dudley DT、Saltiel AR。 Alessi DR等人。生物化学杂志。1995年11月17日；270(46):27489-94. doi:10.1074/jbc.270.46.27489。生物化学杂志。1995 PMID：7499206

查看所有类似文章

引用人

将单个细胞分裂事件与单细胞ERK和Akt活动时间过程联系起来。
Stern AD、Smith GR、Santos LC、Sarmah D、Zhang X、Lu X、Iuricich F、Pandey G、Iyengar R、Birtwistle MR。 Stern AD等人。科学报告2022年10月27日；12(1):18077. doi:10.1038/s41598-022-23071-6。科学报告2022。 PMID：36302844 免费PMC文章。
癌基因BRAF通过抑制胞质分裂诱导全基因组加倍。
Darp R、Vittoria MA、Ganem NJ、Ceol CJ。 Darp R等人。国家公社。2022年7月15日；13(1):4109. doi:10.1038/s41467-022-31899-9。国家公社。2022 PMID：35840569 免费PMC文章。
抑制BTK和PI3Kδ会损害人JMML干细胞和祖细胞的发育。
Ramdas B、Yuen LD、Palam LR、Patel R、Pasupuleti SK、Jideonwo V、Zhang J、Maguire C、Wong E、Kanumuri R、Zhand C、Sandusky G、Chan RJ、Zhan C、Stieglitz E、Haneline L、Kapur R。 Ramdas B等人。分子热学。2022年7月6日；30(7):2505-2521. doi:10.1016/j.ymthe.2022.04.009。Epub 2022年4月20日。分子热学。2022 PMID：35443935 免费PMC文章。
生长因子诱导的细胞信号传导对细胞周期进程的调节。
王Z。王Z。细胞。2021年11月26日；10(12):3327. doi:10.3390/cells10123327。细胞。2021 PMID：34943835 免费PMC文章。审查。
通路传感器的时空控制和跨通路反馈调节酵母中的分化MAPK通路。
Prabhakar A、González B、Dionne H、Basu S、Cullen PJ。 Prabhakar A等人。细胞科学杂志。2021年8月1日；134（15）：jcs258341。doi:10.1242/jcs.258341。Epub 2021年8月4日。细胞科学杂志。2021 PMID：34347092 免费PMC文章。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Robinson M J，Cobb M H.《细胞生物学》。1997;9:180–186.-公共医学
1. Pages G，Lenormand P，L'Allemain G，Chambard J C，Meloche S，Pouyssegur J.美国国家科学院院刊1993；90:8319–8323.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Seger R、Seger D、Reszka A A、Munar E S、Eldar Finkelman H、Dobrowolska G、Jensen A M、Campbell J S、Fischer E H、Krebs E G.J Biol Chem。1994;269:25699–25709.-公共医学
1. Brunet A，Pages G，Pouyssegur J.癌基因。1994;9:3379–3387.-公共医学
1. Mansour S J、Matten W T、Hermann A S、Candia J M、Rong S、Fukasawa K、Vande Woude G F、Ahn N G。科学。1994;265:966–970.-公共医学

出版物类型

行动
行动

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

[1] Robinson M J，Cobb M H.《细胞生物学》。1997;9:180–186.-公共医学

[2] Robinson M J，Cobb M H.《细胞生物学》。1997;9:180–186.-公共医学

[3] Pages G，Lenormand P，L'Allemain G，Chambard J C，Meloche S，Pouyssegur J.美国国家科学院院刊1993；90:8319–8323.-项目管理咨询公司-公共医学

[4] Pages G，Lenormand P，L'Allemain G，Chambard J C，Meloche S，Pouyssegur J.美国国家科学院院刊1993；90:8319–8323.-项目管理咨询公司-公共医学

[5] Seger R、Seger D、Reszka A A、Munar E S、Eldar Finkelman H、Dobrowolska G、Jensen A M、Campbell J S、Fischer E H、Krebs E G.J Biol Chem。1994;269:25699–25709.-公共医学

[6] Seger R、Seger D、Reszka A A、Munar E S、Eldar Finkelman H、Dobrowolska G、Jensen A M、Campbell J S、Fischer E H、Krebs E G.J Biol Chem。1994;269:25699–25709.-公共医学

[7] Brunet A，Pages G，Pouyssegur J.癌基因。1994;9:3379–3387.-公共医学

[8] Brunet A，Pages G，Pouyssegur J.癌基因。1994;9:3379–3387.-公共医学

[9] Mansour S J、Matten W T、Hermann A S、Candia J M、Rong S、Fukasawa K、Vande Woude G F、Ahn N G。科学。1994;265:966–970.-公共医学

[10] Mansour S J、Matten W T、Hermann A S、Candia J M、Rong S、Fukasawa K、Vande Woude G F、Ahn N G。科学。1994;265:966–970.-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

哺乳动物成纤维细胞细胞周期的G（2）/M转变需要有丝分裂原激活的蛋白激酶活性

附属

哺乳动物成纤维细胞细胞周期的G（2）/M转变需要有丝分裂原激活的蛋白激酶活性

作者

附属

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源