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.1999年9月；19(9):5969-80.
doi:10.1128/MCB19.9.5969。

缺乏Id3基因小鼠的免疫反应受损和B细胞增殖

L盘 1, S佐藤, J P弗雷德里克, X H太阳, Y庄
附属公司

缺乏Id3基因的小鼠免疫反应受损和B细胞增殖

L盘等人。 分子细胞生物学. 1999年9月.

摘要

由B细胞受体（BCR）信号诱导的B淋巴细胞活化和增殖是体液免疫反应启动的重要步骤。BCR信号是如何被核转录因子转化为细胞周期进程的，目前尚不清楚。Id3是一种对包括B细胞在内的多种细胞类型的生长和有丝分裂信号作出反应的即时早期基因。Id3蛋白的主要功能被定义为碱性螺旋环螺旋（bHLH）转录因子抑制剂。Id3和bHLH蛋白之间的相互作用是导致细胞增殖而非分化的关键调控事件，其中许多蛋白对细胞分化至关重要。为了进一步研究Id3在组织和胚胎发育中的作用以及Id3介导的生长调节机制，我们制作并分析了Id3缺陷小鼠。虽然这些小鼠在组织和胚胎发育方面没有明显异常，但它们的体液免疫受到损害。用T细胞依赖性抗原和2型T细胞依赖型抗原免疫的Id3缺陷小鼠产生的免疫球蛋白数量分别减少和严重受损。进一步分析从Id3-缺乏小鼠分离的淋巴细胞，发现其对BCR交联的增殖反应存在B细胞缺陷，但对脂多糖或BCR交联与白细胞介素-4的组合的增殖反应没有缺陷。对培养淋巴细胞的分析也表明Id3参与了T细胞的细胞因子生成和B细胞的同种型转换。最后，Id3缺乏的B细胞的增殖缺陷可以通过异位表达Id1来修复，Id1是Id3的同源物。综上所述，这些结果确定了Id3在体液免疫反应期间从BCR到细胞周期进展的信号介导中的必要和特定作用。

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数字

图1
图1
（A） 鼠标示意图识别码3基因组位点（顶部）、基因靶向结构（中部）和识别码3敲除等位基因（底部）。外显子和选择标记分别用实心框和开放框表示。显示了用于Southern分析的探针。限制性内切酶和选择标记缩写如下：B，巴姆你好；H、，Hin公司dIII；P、，精神分裂症我；S中，囊我；X、，Xba公司我；Xh中，Xho公司我；磷酸甘油酸激酶基因启动子；tk、胸苷激酶基因；neo，新霉素抗性基因。（B） 基因组DNA的Southern blot分析识别码3+/+,识别码3+/−、和识别码3−/−老鼠。DNA被消化囊I与面板A中显示的探针杂交囊野生型和突变等位基因的I片段分别为3.6 kb和15 kb。（C） 分离的RNA的Northern blot分析识别码3+/+,识别码3+/−、和识别码3−/−小鼠脾细胞。杂交中使用的探针显示在左侧，GAPDH作为加载控制。
图2
图2
（A） 淋巴组织中T细胞和B细胞的发育识别码3−/−老鼠。胸腺、脾脏、骨髓和腹腔淋巴细胞的三色FACS分析识别码3+/+（左）和识别码3−/−（右）显示老鼠。通过7AAD染色去除死细胞后，结果代表了多项测试，并显示为双色点图。象限中显示了相关淋巴细胞群的百分比。（B） 大鼠脾脏B细胞表面标记物的表达及亚群识别码3−/−老鼠。脾细胞分离自识别码3+/+（左）和识别码3−/−（右）小鼠，并按照A组所述进行流式细胞术分析。
图3
图3
ELISA法检测未免疫者血清Ig水平识别码3+/+(n个=16）和识别码3−/−(n个=16）只小鼠。结果显示为每种基因型16只小鼠的平均值±标准误差。星号表示与野生型控件显著不同的值(t吨测试；P（P）< 0.005).
图4
图4
（A） 对DNP-KLH的体液免疫反应。识别码3+/+(n个=5）和识别码3−/−老鼠(n个=5）小鼠在第0天腹腔注射100μg含完全弗氏佐剂的DNP-KLH，21天后在不含佐剂的情况下进行增强。在指定的时间给小鼠放血，用于DNP特异性抗体的ELISA。抗DNP特异性抗体同型的相对浓度显示为平均光密度（O.D.）和标准误差。血清稀释系数如下：IgM和IgG1为1:1000；IgG2a和IgG3为1:500；IgG2b和IgA为1:100。识别码3−/−小鼠在第14天和第28天显示IgG2a和IgG3的产生显著降低(t吨针对野生型对照的测试；P（P）< 0.005). （B） 对DNP-Ficoll的体液免疫反应。在第0天，小鼠腹腔注射25μg DNP-Ficoll，并在指定时间出血。用ELISA分析了6种不同同型的DNP特异性抗体。血清稀释系数如下：IgM和IgG3为1:1000；其他四种同型物为1:100。在免疫接种后的所有病例中，发现两种基因型之间存在显著差异(t吨针对野生型对照进行测试，n个每种基因型=5；P（P）< 0.005).
图5
图5
（A） 脾细胞负载Indo-1AM后，用FITC-标记的抗B220单克隆抗体进行染色。B220型+B细胞检测[Ca2+]我用兔抗鼠CD19或F（ab′）刺激后（箭头所示）2山羊抗鼠IgM。[加利福尼亚州2+]我测定为405 nm到525 nm处的Indo-1荧光比率。结果代表了三对识别码3+/+和识别码3−/−老鼠。（B） MHC II类抗原（I）的表达水平一)纯化的脾B细胞识别码3+/+（顶部）和识别码3−/−（底部）小鼠在没有（虚线）或存在（实线）10μg F（ab′）的情况下培养24小时后2每毫升山羊抗鼠IgM。
图5
图5
（A） 脾细胞负载Indo-1AM后，用FITC-标记的抗B220单克隆抗体进行染色。B220型+B细胞检测[Ca2+]我用兔抗小鼠CD19或F（ab′）刺激后（箭头所示）2山羊抗鼠IgM。[钙2+]我测定为405 nm到525 nm处的Indo-1荧光比率。结果代表了三对识别码3+/+和识别码3−/−老鼠。（B） MHC II类抗原（I）的表达水平一)纯化的脾B细胞识别码3+/+（顶部）和识别码3−/−（底部）小鼠在没有（虚线）或存在（实线）10μg F（ab′）的情况下培养24小时后2每毫升山羊抗鼠IgM。
图6
图6
（A） F（ab′）诱导的B细胞增殖2三种不同浓度的山羊抗鼠IgM片段（右），通过LPS（50μg/ml）、抗CD40单克隆抗体（10μg/ml2每毫升山羊抗鼠IgM片段（左）。纯化的脾B细胞在指示刺激物存在下培养64小时[三H] 在最后16h内加入胸腺嘧啶核苷[三H] 胸腺嘧啶核苷掺入显示为三倍培养物的平均值和标准误差。结果代表了四个独立实验。（B） 抗CD3（10μg/ml）、ConA（2μg/ml。纯化的脾T细胞培养54小时[三H] 在最后16小时内添加胸腺嘧啶核苷。结果如图A所示，是四个独立实验的代表。
图6
图6
（A） F（ab′）诱导的B细胞增殖2三种不同浓度的山羊抗鼠IgM片段（右），通过LPS（50μg/ml）、抗CD40单克隆抗体（10μg/ml2每毫升山羊抗鼠IgM片段（左）。纯化的脾B细胞在指示刺激物存在下培养64小时[三H] 在最后16h内加入胸腺嘧啶核苷[三H] 胸腺嘧啶核苷掺入显示为三倍培养物的平均值和标准误差。结果代表了四个独立实验。（B） 抗CD3（10μg/ml）、ConA（2μg/ml。纯化的脾T细胞培养54小时[三H] 在最后16小时内添加胸腺嘧啶核苷。结果如图A所示，是四个独立实验的代表。
图7
图7
诱导识别码3用抗IgM刺激的纯化脾B细胞中的表达。从野生型中分离RNA识别码3−/−用抗IgM刺激小鼠B细胞达到指定时间（0、1.5和4小时）。的表达式识别码3,E2A公司，c-myc公司、和EF1α用基因特异性引物进行RT-PCR检测。通过运行增量PCR循环，对每对引物进行线性PCR扩增测试。结果显示了给定基因的最佳循环条件。通过使用从单独一批动物中纯化的B细胞重复整个增殖和RNA分析，进一步确认定量。
图8
图8
受刺激脾B细胞的Ig分泌。B细胞来自识别码3+/+和识别码3−/−从脾脏中提纯小鼠，并在图中所示的各种刺激下培养6天。通过ELISA测定培养上清中的Ig同型浓度。从四个独立的实验中获得了类似的结果。
图9
图9
抗CD3刺激的细胞因子基因表达识别码3−/−小鼠脾细胞。红细胞耗竭的脾细胞来自识别码3+/+和识别码3−/−用抗CD3培养小鼠48小时。制备总RNA，并通过RNase保护试验测定细胞因子基因表达。每个波段的标识都显示在右侧。L32和GAPDH是mRNA数量和质量的控制因素。
图10
图10
（A） 骨髓和脾脏B细胞的FACS分析识别码3+/+（顶部）标识1热重（tg）（中间），和识别码3−/− 标识1热重（tg）（底部）老鼠。B220的百分比+/免疫球蛋白M+单元格显示在每个点图的右上象限中。（B） 的比较识别码3+/−,识别码3+/− 标识1热重（tg）,识别码3−/−、和识别码3−/− 标识1热重（tg）小鼠脾B细胞对F（ab′）的增殖反应2抗IgM片段（20μg/ml）、IgM（5μg/ml。[三H] 胸腺嘧啶核苷掺入显示为三倍培养物的平均误差和标准误差。结果代表了三个独立的实验。
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    1. Bain G、Robanus Maandag E C、te Riele H P、Feeney A J、Sheehy A、Schlissel M、Shinton S A、Hardy R R、Murre C。E12和E47都支持B细胞谱系。免疫。1997;6:145–154.-公共医学
    1. Bain G、Maandag E C、Izon D J、Amsen D、Kruisbeek A M、Weintraub B C、Krop I、Schlissel M S、Feeney A J、van Roon M、van der Valk M、te Riele H P J、Berns A、Murre C。E2A蛋白是B细胞发育和免疫球蛋白基因重排启动所必需的。单元格。1994;79:885–892.-公共医学
    1. Barone M V、Pepperkok R、Peverali F A、Philipson L.Id蛋白质控制哺乳动物细胞的生长诱导。美国国家科学院院刊，1994年；91:4985–4988.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Benezra R.分子间二硫键稳定E2A同源二聚体，并在生理温度下用于DNA结合。单元格。1994;79:1057–1067.-公共医学

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