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.1999年8月3日;96(16):9118-23.
doi:10.1073/pnas.96.16.9118。

基于醛脱氢酶活性的原始人造血祖细胞分离

附属公司

基于乙醛脱氢酶活性的原始人类造血祖细胞的分离

西北部风暴等。 美国国家科学院程序. .

摘要

由于造血干细胞富含醛脱氢酶(ALDH)活性,我们开发了一种ALDH的荧光底物,称为BODIPY氨基乙醛(BAAA),并测试了其分离原始人类造血细胞的潜力。从与BAAA和多药耐药抑制剂维拉帕米共染的人脐血细胞中可以很容易地分离出具有低正交光散射和明亮荧光强度(SSC(lo)ALDH(br)细胞)的细胞群。SSC(lo)ALDH(br)群体缺乏谱系承诺细胞,CD34(+)CD38(lo/-)细胞纯度为40-90%,在短期和长期培养分析中检测到的原始造血祖细胞富集50-100倍。总之,这些观察结果表明,使用BAAA根据ALDH活性分离人类造血干细胞是分离原始人类造血祖细胞的有效方法。这项技术也可用于从其他组织中分离干细胞。

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图1
图1
BAAA-DA、BAAA和BAA的结构。BAAA-DA是通过荧光化合物BODIPY FL、SE与AAA-DA的键合而合成的t吨1/2在以下所述条件下约15分钟材料和方法当细胞被BAAA染色后,ALDH将BAAA转化为BAA,BAA因其净负电荷而留在细胞内。BAAA-DA和BAAA的结构以及这些化合物之间的转化动力学由1核磁共振波谱。
图2
图2
L1210、L1210/cpa和K562细胞的BAAA染色。L1210线(A类)是一种表达少量ALDH的小鼠细胞系。L1210/cpa(千帕)(B类)表达高水平的ALDH和K562(C类)是一种表达ALDH的人类细胞系。用20μM BAAA对细胞进行染色,并按照材料和方法数据代表了三个实验。
图3
图3
人类UCB含有ALDHbr个细胞。用1μM BAAA对红细胞贫化的UCB单核细胞进行染色。(A类)染色UCB的散射特性。区域R1定义SSC种群和R2定义单核细胞种群。(B类D类)总UCB、单核细胞和SSC的BAAA染色图谱单元格。SSC公司ALDH公司br个单元格由中的M1光标定义D类.在每个面板中,虚线为二乙氨基苯甲醛处理的阴性对照,实线为实验样品。这些数据代表了六个实验。
图4
图4
子系统控制器ALDH公司br个针对CD34富集UCB+CD38型lo/−细胞。UCB与BAAA、维拉帕米、CD34和CD38抗体共染色,并用FACS分析。(A类)未分化脐血CD34和CD38染色图谱。(B类)SSC概况细胞。(C类)SSC概况ALDH公司br个细胞。这些数据代表了六个实验。
图5
图5
子系统控制器ALDH公司br个脐血富含造血祖细胞。未分馏,CD34+和SSCALDH公司br个分离UCB细胞并将其置于HPCA中(A类),5周长期护理(B类)和8周LTC(C类)分析。如中所述材料和方法,CD14+在SSC隔离期间,细胞也被移除ALDH公司br个因为这些细胞是初步分选实验中的主要污染物。条形图显示了六个实验的平均值(±SD)。HPCA、5周LTC和8周LTC的差异显著(P(P)<0.05)在未分割的UCB和CD34之间+和SSCALDH公司br个人口。此外,8周LTC的比例明显较高(P(P)<0.05)在SSC中ALDH公司br个与CD34相比的人口+而HPCA和5周LTC比例没有差异。

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参考文献

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