A new structure for the murine Xist gene and its relationship to chromosome choice/counting during X-chromosome inactivation

doi:10.1073/pnas.96.12.6829

.1999年6月8日；96(12):6829-34.

doi:10.1073/pnas.96.12.6829。

小鼠Xist基因的一种新结构及其与X染色体失活时染色体选择/计数的关系

Y K Hong先生¹, S D香根草, C陈, W M施特劳斯

附属公司

PMID： 10359798
PMCID公司： PMC22001型
内政部： 10.1073/pnas.96.12.6829

小鼠Xist基因的一种新结构及其与X染色体失活时染色体选择/计数的关系

Y K Hong先生等人。美国国家科学院程序. 1999.

.1999年6月8日；96(12):6829-34.

doi:10.1073/pnas.96.12.6829。

作者

Y K Hong先生¹, S D香根草, C陈, W M施特劳斯

附属

¹哈佛大学人类遗传学研究所、哈佛医学院和贝思以色列女执事医学中心，美国马萨诸塞州波士顿，邮编02115。

PMID： 10359798
PMCID公司： 2001年2月
内政部： 10.1073/pnas.96.12.6829

摘要

在本报告中，我们提供了小鼠Xist基因的结构数据。本文提供的数据表明，小鼠Xist转录物至少为17.4kb，而不是之前报道的14.3kb。本文描述的小鼠Xist基因的新结构有7个外显子，而不是6个。Exon VII在3'端额外编码3.1 kb的信息。外显子VII包含七个可能的聚腺苷化位点；其中四个地点位于新发现的3'端。因此，有可能通过初级转录物的差异聚腺苷化产生几个不同的转录物。多聚腺苷酸化信号的替代使用可能导致外显子VII的大小变化。通过Northern分析可以检测到两种主要的Xist物种，这与差异聚腺苷化一致。在本文中，我们提出了一个关于Xist 3’末端在胚胎发育过程中X染色体计数和选择过程中的作用的模型。

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数字

图1
老鼠*西斯特*该基因由七个外显子组成。(A类)修改的基因组结构*西斯特*与Brockdorff记录的外显子VI的结构相比，含有一个781-bp-long内含子等。(14). 外显子VI/外显子VII连接序列如图所示。箭头，艾娃我；星号，生态意大利。(B类)的比较艾娃我/生态小鼠基因组DNA、Y116（第2道）和雌性小鼠肺cDNA（第3道）的RI片段。对跨越该区域的PCR片段进行克隆和测序。通道1是1-kb DNA大小标记（GIBCO/BRL）。

图2
3′端新结构*Xist公司*. (A类)四个EST（EST1≈4）相对于*西斯特*（EST1≈4的GenBank登录号：AA543875、AA221611、AA690387^§和R74734）。用封闭箭头标记位置的引物合成的PCR片段证明了所有EST的共线性。用于确定末端的引物位置*西斯特*成绩单用开放箭头标记。还指出了用于Northern印迹和RNA–FISH的探针（pWS854，pWS850）。聚腺苷酸化（A_n个)推测的茎和环结构序列也被定位。Clerc和Avner（12）创建的65-kb删除从*Sca公司*EST1中的I站点（用粗箭头标记）。EST片段的回收如所述*实验程序*. (B类)所有EST与*西斯特*.对所有PCR产物进行测序。在本图中*西斯特*+EST1和EST1+EST2、EST2+EST3和EST3+EST4分别在0.8%和2%琼脂糖凝胶中电泳，转移到尼龙膜上，并与单个片段杂交（此图的探针，*西斯特*EST1、EST2和EST3）。（C） YAC116（基因组DNA）；♀, 雌性小鼠肺cDNA文库；♂, 雄性小鼠大脑和雄性心脏cDNA文库。通过使用1-kb标记（GIBCO/BRL）标记0.8%凝胶，或使用100-bp标记（NEB，Beverly，MA）标记2%凝胶，来标记大致的DNA大小。每条车道的顶部是迁徙的起点。^§注：登录号AA690387被错误地标识为源自GenBank中的雄性小鼠cDNA库。它被正确地归因于I.M.a.G.E.主页上的一个女性图书馆(http://www-bio.llnl.gov/bbrp/image/image.html).

图3
Northern印迹显示主要和次要*西斯特*物种。雄性小鼠(♀) 和女性(♂) 肾脏RNA在甲醛-海藻糖凝胶上分离，转移到带正电的尼龙上，产生重复的条带。将双通道杂交到单个探针：pWS850、pWS854和mx8（20）。包含mx8的车道未显示，因为没有混合信号。*Xist公司*大、小成绩单用箭头符号表示。核糖体RNA的位置表示相对流动性。图中显示了两种主要的*西斯特*使用pWS850探针。新的3′端探针pWS854与两个主要物种中较大的物种发生了不成比例的杂交*西斯特*RNA。

图4
雄性和雌性体细胞的RNA-FISH显微照片。RNA–FISH用于可视化与*西斯特*探针pWS850（FITC）和pWS854（罗丹明）。的杂交*西斯特*同时进行探针测试，并记录不同的通道；录音后他们合并了。显微照片显示探针pWS850和pWS854的共定位。(×600.)

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