Attenuated vesicular stomatitis viruses as vaccine vectors

doi:10.1128/JVI.73.5.3723-3732.1999

.1999年5月；73(5):3723-32.

doi:10.1128/JVI.73.5.3723-3732.1999。

减毒水泡性口炎病毒作为疫苗载体

罗伯茨¹, L Buonocore公司, R价格, J福尔曼, J K罗斯

附属公司

PMID： 10196265
预防性维修识别码：项目经理104148
DOI（操作界面）： 10.1128/JVI.73.5.3723-3732.1999

作为疫苗载体的弱化水泡性口炎病毒

罗伯茨等。 J维罗尔. 1999年5月.

.1999年5月；73(5):3723-32.

doi:10.1128/JVI.73.5.3723-3732.1999。

作者

A罗伯茨¹, L Buonocore公司, R价格, J福尔曼, J K罗斯

附属

¹耶鲁大学医学院病理学系，美国康涅狄格州纽黑文06510。

PMID： 10196265
预防性维修识别码：项目经理104148
DOI（操作界面）： 10.1128/JVI.73.5.3723-3732.1999

摘要

我们之前的研究表明，用表达流感病毒血凝素（HA）蛋白的重组水疱性口炎病毒（VSV）对小鼠进行单次鼻内接种，可完全保护小鼠免受流感病毒的致命攻击（a.Roberts、E.Kretzschmar、a.S.Perkins、J.Forman、R.Price、L.Buonocore、Y.Kawaoka和J.K。罗丝，J.维罗尔。72:4704-4711, 1998). 由于某些发病机制与载体本身有关，在本研究中，我们生成了新的表达HA的VSV载体，在小鼠模型中，HA的发病机制完全减弱。第一种载体截短了VSV G蛋白的细胞质域，并表达流感病毒HA（CT1-HA）。经鼻给药后，这种非致病性载体可完全保护患者免受致命流感病毒的攻击。VSV G缺失并表达HA的第二种载体（DeltaG-HA）也具有保护性和非致病性，其优点是不会对载体本身诱导中和抗体。

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数字

图1
重组VSV流感病毒A/WSN构建物。在负链基因组RNA上显示了指示基因顺序的重组病毒的示意图3′至5′。每个基因间区域包含VSV聚合酶识别的转录STOP/START信号（32）。还显示了用于构建重组体cDNA的限制性内切酶序列。

图2
蛋白质的免疫沉淀³⁵S标记细胞提取物。用流感病毒A/WSN HA蛋白（A，2至8道）或VSV G蛋白（A、1道和B）特异的小鼠单克隆抗体对感染重组VSV的细胞进行代谢标记、裂解和免疫沉淀。VSV△G和VSV△G-HA来自BHK-G细胞提取物；所有其他样品均来自BHK细胞提取物。在所有凝胶上运行VSVrwt和VSV-HA重组体，以比较免疫沉淀蛋白。未感染BHK细胞裂解物的模拟免疫沉淀。

图3
蔗糖纯化的重组病毒粒子。感染重组病毒的细胞被代谢标记为³⁵S转换标签。收集上清液，通过20%蔗糖离心纯化病毒。加载的体积归一化为N-P蛋白质含量。通道1，占总VSV-HA病毒的1%，来自直径为3.5cm的BHK细胞培养皿；通道2，来自直径为3.5cm的BHK细胞培养皿的CT1-HA病毒总量的18%，通道3，来自直径3.5cm的培养皿的BHK-G细胞的VSVΔG-HA病毒总量14%；第4道，13%的VSVΔG病毒来自直径为3.5cm的BHK-G细胞培养皿。

图4
蔗糖纯化重组体的免疫金标记。重组VSVrwt（A）和VSVΔG-HA（B）结合到碳涂层网格上，用鼠抗HA单克隆抗体和次级金结合抗体标记，并进行负染的电子显微镜照片。

图5
减毒重组体可保护机体免受致命流感病毒的攻击。显示了接种了VSV重组物并受到流感病毒A/WSN攻击的小鼠的平均日体重。（A）小鼠经鼻接种VSV-HA(n个=5）或CT1-HA(n个=5）在5×10⁴第0天的PFU/老鼠。在第21天，用等量的接种物对小鼠进行增强。在第35天用致命剂量的流感病毒a/WSN攻击小鼠。（B）条件与A组相同，只是小鼠接种了VSVΔG并进行了增强(n个=4）或VSVΔG-HA(n个=5）在5×10⁴PFU/鼠标。误差条显示±0.5×标准偏差。

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