摘要
细胞衰老通过不可逆转地阻止细胞增殖来抑制癌症。 衰老细胞获得促炎症衰老相关的分泌表型。 许多基因毒性化学疗法以非特异性增殖细胞为靶点,通常伴有不良反应。 与先前的工作一致,我们发现几种化疗药物可诱导原代小鼠和人细胞衰老。 使用能够追踪和消除衰老细胞的转基因小鼠,我们发现治疗诱导的衰老(TIS)细胞持续存在并导致局部和全身炎症。 消除TIS细胞可以减少药物的一些短期和长期影响,包括骨髓抑制、心脏功能障碍、癌症复发、体力活动和力量。 与我们在小鼠中的研究结果一致,化疗前T细胞衰老标记物表达增加的人类化疗诱导疲劳的风险显著增加。 这些发现表明,衰老细胞可以引起某些化疗副作用,为降低抗癌治疗的毒性提供了一个新的靶点。
关键词: 细胞衰老、化疗、副作用、治疗、衰老、阿霉素、乳腺癌、疲劳
介绍
细胞衰老是一种复杂的应激反应,细胞不可逆转地失去增殖能力,伴随着基因表达的大量变化( 1 ). 许多潜在致癌损伤可诱导衰老反应,这是目前公认的一种有效的肿瘤抑制机制。 其他衰老诱导刺激包括辐射、基因毒性药物、组织损伤和重塑以及代谢紊乱( 2 ). 此外,一些脊椎动物的衰老细胞随着年龄的增长而积累( 1 ),它们的消除可以延缓小鼠几种与年龄相关的疾病的发病( 三 , 4 ). 衰老细胞最有可能通过衰老相关分泌表型(SASP)促进衰老:炎症细胞因子、趋化因子、生长因子和蛋白酶的表达和分泌增加( 5 ).
基因毒性和细胞毒性药物广泛用于抗癌治疗。 大多数此类药物通过不同的细胞周期依赖性机制靶向增殖细胞( 6 ). 它们对多种分裂细胞的细胞毒性常常导致副作用,包括免疫抑制、疲劳、贫血、恶心、腹泻和脱发( 7 ). 此外,对儿童时期接受治疗的癌症幸存者的临床研究表明,一些化疗会引起一系列长期副作用,这些副作用与衰老相关的病理学相似,包括器官功能障碍、认知功能障碍和继发肿瘤( 8 ).
许多化疗药物改变癌细胞和肿瘤微环境中的细胞状态,包括诱导衰老( 9 , 10 ). 治疗性衰老(TIS)可以刺激免疫监视以消除肿瘤细胞,但也可能是慢性炎症和耐药性的来源( 11 ). 事实上,最近的一项研究表明,蒽环类和烷基化剂治疗乳腺癌患者可持久诱导细胞衰老和p16中的SASP INK4a公司 -依赖端粒的方式( 12 ). 抑癌基因p16的表达 INK4a公司 随着年龄增长而增加,是许多小鼠和人体组织中的一个强健衰老标记( 13 , 14 ).
为了更准确地评估TIS的生理效应 体内 ,我们使用了最近描述的小鼠模型(p16-3MR),其中p16 INK4a公司 -在活体动物中可以检测到阳性衰老细胞,从组织中分离出来,并在用其他良性药物治疗后消除( 15 ). 使用这种方法,我们确定了衰老细胞对各种常见的短期和长期化疗毒性的贡献。 此外,我们使用衰老标记物评估人类患者衰老细胞与化疗毒性之间的关系。
结果
化疗引起的衰老
蒽环类抗生素多柔比星(Doxo)用于治疗人类患者的几种癌症。 Doxo嵌入DNA并防止拓扑异构酶II重新密封DNA双链断裂,该酶会产生双链断裂来缓解扭转应力( 16 ). Doxo还促进组蛋白从染色质中驱逐,引起DNA损伤反应,并促进表观基因组和转录组的变化( 17 ). 尽管有报道称多索诱导癌细胞衰老,但人们对正常细胞对多索的反应知之甚少。
我们将小鼠胚胎和皮肤成纤维细胞(MEF和MDF)暴露于不同剂量的Doxo,并确定抑制细胞增殖(生长)的浓度( 图S1A和S1B ). 我们选择了250 nM的剂量,在该剂量下,我们观察到生长完全停止,但生存能力没有显著降低( 图S1B 和未显示)。 经250 nM Doxo处理的中密度纤维板显示出衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性急剧上升,DNA合成强烈下降,这由EdU掺入测定( 图1A 和 S1C系列 ). mRNA编码水平升高进一步证实了衰老 第16页 INK4a公司 和SASP组件 IL-1α、IL-6、Mmp-3、Mmp-9、Cxcl-1、Cxcl-10 和 Ccl20公司 ( 5 )使用qPCR( 图1B )p21水平升高,LaminB1和细胞内HMGB1蛋白水平降低( 5 , 18 , 19 )使用西方分析( 图1C ). Doxo诱导的衰老细胞也具有持续的DNA损伤( 20 ),由53BP1焦点测量( 图1D 和 S1D系列 ). 重要的是,Doxo在两种人类皮肤成纤维细胞株(HCA2和BJ)中诱导了类似的衰老表型,包括衰老标记物的表达和持续的DNA损伤( 图S1E-G 和未显示)。
图1。 治疗诱导的原代细胞衰老。
(A) 用250 nM阿霉素(Doxo)处理小鼠皮肤成纤维细胞(MDF)24小时。7天后,细胞要么固定并染色SA-β-gal,要么用EdU孵育24小时,然后固定并染色。 所示为阳性细胞的百分比(得分>100个细胞)。 N=3个独立实验。 (B) 定量实时PCR(qRT-PCR)分析从对照(DMSO)或Doxo-(250 nM)处理的MDF中分离的RNA。 分析RNA中编码与肌动蛋白相关的指示蛋白的mRNA(以控制cDNA数量)。 N=3个独立实验。 A.U.=任意单位。 (C) 使用来自对照或多索治疗MDF的全细胞提取物,通过免疫印迹法测量层压板B1(LMNB1)、HMGB1和p21蛋白水平。 Actin充当加载控件。 (D) 对照或Doxo处理的细胞的免疫荧光。 蓝色DAPI染色细胞核; 绿色,53BP1免疫染色。 (E) p16-3MR雄性小鼠在使用指定浓度的多索(0、2、10、25 mg/kg)治疗10天后,注射注射了注射用库伦他嗪,并使用Xenogen成像系统定量发光。 (F) E.N的代表性图像=4。 (G) 从对照组或多索(10 mg/kg)治疗小鼠的皮肤、肺和肝脏中提取RNA,并通过qRT-PCR定量编码p16的mRNA INK4a公司 以编码微管蛋白的mRNA作为对照。 N=5。 (H) 对照组或Doxo(10 mg/kg)治疗的雌性小鼠在Doxo治疗后的指定时间内注射注射了注射用库伦他嗪,并使用Xenogen成像系统对发光进行量化。 N=4。 数据为平均值±SEM* p<0.05** p<0.01*** p<0.001。
紫杉醇是另一种广泛使用的化疗药物,可稳定微管聚合物,从而防止其分解并导致有丝分裂停滞。 紫杉醇也能诱导小鼠细胞衰老,这是通过减少细胞增殖来衡量的( 图S2A ),增加SA-β-gal活性( 图S2B ),表达上调 第16页 INK4a公司 以及几个SASP因素( IL-1α、IL-6、Mmp-3、Mmp-9、Cxcl-1、Cxcl-10、Ccl20 ),以及 层压板B1 ( 图S2C ).
确定TIS的影响 体内 我们使用了我们最近开发的小鼠模型(p16-3MR),该模型包含肾素荧光素酶(LUC)、单体红色荧光蛋白(mRFP)和一种截短型单纯疱疹病毒(HSV)-1胸苷激酶(tTK)的功能域,受衰老敏感性的控制 第16页 INK4a公司 发起人( 15 ). 因为LUC可以检测到3MR表达细胞,所以我们通过使用一系列Doxo浓度的生物发光来跟踪衰老细胞的诱导( 图1E ). 在最高剂量(25 mg/kg)下,急性毒性(体重过度减轻、毛皮粗糙、缺乏活动)明显。 因此,我们在随后的实验中使用了10 mg/kg的单剂量。 该剂量似乎是生物有效的,因为它可以诱导抗肿瘤反应和毒性(如骨髓抑制),但远低于最大耐受剂量。 相比之下,人类患者以1.25 mg/kg(~50 mg/m)的剂量接受6-8个生物有效剂量的Doxo 2 ),累积毒性为12.5 mg/kg(~400 mg/m 2 ). 有趣的是,符合人类研究( 12 ),此剂量的多索导致全身生物发光增加3倍( 图1E–F ),不分性别。 生物发光的增加幅度与 第16页 INK4a公司 皮肤、肺和肝脏等不同组织中的mRNA( 图1G ). 多索治疗可诱导不同类型的细胞衰老,如皮肤中角质形成细胞、内皮细胞,以及较小程度上的成纤维细胞和平滑肌细胞为p21所示 + 通过免疫染色( 图S3A ). 重要的是 第16页 INK4a公司 ,IL-6 和 Cxcl-10型 持续了几个星期( 图1H 和 S3B型 ). 与我们使用Doxo的数据类似,其他三种化疗药物紫杉醇、替莫唑胺(TMZ)和顺铂在p16-3MR小鼠中诱导生物发光( 图S3C–D ). 紫杉醇、TMZ和顺铂也升高 第16页 INK4A(墨水) 皮肤中的表达( 图S3E ). 这些数据表明,具有不同作用机制的细胞毒性化疗药物可以诱导培养的原代细胞以及不同组织和细胞类型的衰老 体内 .
炎症、骨髓恢复和心脏功能
急性和慢性炎症反应是许多抗癌化学治疗有益结果的主要障碍( 21 ). 事实上,化疗诱导的细胞因子和趋化因子的高局部和全身水平与药物的短期、中期和长期副作用有关。
由于多索和紫杉醇产生的衰老细胞激活了SASP,其中包括炎症因子,因此我们研究了这些细胞对多索治疗的p16-3MR小鼠的影响。 衰老p16 INK4a公司 -更昔洛韦(GCV)可选择性清除p16-3MR小鼠的阳性细胞; 3MR的tTK部分磷酸化GCV,将其转化为有毒的DNA代谢物,与线粒体DNA结合,通过凋亡杀死细胞( 15 ). 我们用Doxo治疗p16-3MR小鼠,5天后再进行GCV治疗。 GCV显著降低生物发光和 第16页 INK4a公司 在Doxo治疗的动物中( 图2A-B 和 图S4A ). GCV还减少了具有DNA损伤病灶的细胞数量( 图2C 和 S4B系列 ). 正如预期的那样,Doxo增加了与Doxo治疗的p16-3MR小鼠肺部炎症相关的SASP因子基因的表达( 图2B ),其中许多(但不是全部)在GCV治疗7天后下降( 图2B ). 因此,去除衰老细胞足以减少组织中许多多索诱导的炎性细胞因子和趋化因子。 不受GCV影响的分泌因子可能是由p21表达的 + /第16页 墨水4a− 或可能独立于衰老。 我们还检测到多索治疗后血清中细胞因子IL-6和趋化因子Cxcl-1的水平显著升高,GCV可降低这些水平( 图2D-E ). 正如预期的那样,与经载体处理的细胞相比,经Doxo处理的MEF也分泌较高水平的IL-6和Cxcl-1( 图S4C–D ).
图2。 衰老相关炎症、骨髓抑制和心脏功能障碍。
对照组或Doxo-(10 mg/kg)治疗的p16-3MR雄性小鼠给予溶媒(PBS)或25 mg/kg更昔洛韦(GCV),持续5天(每天腹腔注射)。 (A) 给小鼠注射注射了注射用库伦他嗪,并使用氙气成像系统监测其发光情况。 (B) 肺部分离RNA的定量实时PCR(qRT-PCR)分析。 编码所示蛋白质的mRNA水平相对于微管蛋白(对照)mRNA进行量化。虚线表示对照小鼠的表达水平,每种蛋白质设置为1。 N=5。 A.U.=任意单位。 (C) 肺部用石蜡固定,并进行γH2AX染色。 蓝色DAPI染色细胞核; 绿色,γH2AX免疫染色。 用ELISA法测定血清(D–E)IL-6(D)和Cxcl-1(E)水平。 N=4。 (F–H)最后一次注射PBS或GCV后3天从小鼠骨髓细胞(BMC)中获取的粒细胞、单核细胞(F)、集落形成单位-粒细胞、红细胞、单体细胞、巨核细胞(G)和2周鹅卵石区域形成细胞(H)的集落形成单元数量, 分别通过集落形成细胞和鹅卵石面积形成细胞分析测定。 N=3。 Doxo治疗4周后,对小鼠进行(I–K)二维经胸超声心动图检查。 图表显示了分数缩短(I)、射血分数(J)和心跳(K)测量值。 N=10。 bpm=每分钟心跳次数。 数据为平均值±SEM* p<0.05** p<0.01*** p<0.001。
急性和慢性炎症反应通常是由于化疗后免疫系统受损所致。 实际上,骨髓抑制是这些疗法耐受性和有效性的主要限制因素。 为了确定Doxo治疗小鼠的炎症指标是否部分是由于骨髓抑制,我们测定了雌性小鼠治疗后骨髓细胞(BMC)的数量和分布。 Doxo治疗2周后,BMC总数略有下降,但没有显著下降,GCV消除衰老细胞后,BMCs总数有所恢复( 图S5A ). 我们检测到Sca1的百分比没有差异 + c-套件 + (LSK)细胞,造血干细胞(HSC;CD150 + CD48型 − LSK细胞)和造血祖细胞(HPC;,谱系 − Sca1类 − c-套件 + 细胞),表明我们使用的Doxo方案不会影响BM-HSC和HPC的数量或比率( 图S5B–D ). 此外,我们观察到血细胞计数没有显著差异,这表明我们使用的Doxo方案仅诱导轻度和短暂的骨髓抑制(未显示)。
我们还通过克隆形成分析测定了HPC功能。 引人注目的是,多索治疗显著减少了集落形成单位(CFU)-GEMM(粒细胞、红细胞、单核细胞、巨核细胞)和CFU-GM(粒细胞,单核细胞)细胞的数量,但在GCV消除衰老细胞后,这些细胞的数量得到了挽救( 图2F–G ). 这一发现得到了为期2周的鹅卵石区域形成细胞(CAFC)检测的证实,该检测用于测量HPC的功能。 从Doxo处理过的动物分离的BMC中,2周CAFC的数量显著减少,但从消除了衰老细胞的动物中没有( 图2H ).
对患者使用Doxo剂量的一个主要限制是心脏毒性,这主要是由于左心室壁增厚所致( 22 ). 重要的是,我们模型中使用的Doxo剂量足以诱导心脏细胞衰老,这是通过诱导 第16页 INK4a公司 和 第21页 表达式( 图S6A–C ). 有趣的是,大多数心脏衰老细胞是CD31 + 内皮细胞和成纤维细胞样细胞,但不包括心肌细胞( 图S6D–E 和未显示)。 为了评估用Doxo治疗的小鼠在消除或不消除衰老细胞的情况下的心脏功能,我们使用了超声心动图。 正如预期的那样,Doxo导致缩短分数(收缩)和射血分数(血容量泵送能力)下降( 图2I–J ). 引人注目的是,GCV治疗几乎完全阻止了这些下降( 图2I–J ). 这些治疗对心率没有影响( 图2K ). 这些发现表明,衰老细胞有助于化疗引起的心脏功能障碍。 值得注意的是,在Doxo治疗4周后,心脏功能障碍明显可检测到,但不能提前检测到( 图S6F–G )表明化疗后衰老细胞的持续存在对心脏毒性很重要。
因此,在多索治疗后消除衰老细胞后,有可能减轻循环炎性因子的负担,促进HPC的功能恢复,防止心脏功能障碍,从而限制药物毒性。
癌症扩散和复发
化疗的另一个重要副作用是癌症复发。 为了研究消除衰老细胞对癌症复发和扩散的影响,我们使用表达病毒致癌基因Polyoma middle T抗原的乳腺癌细胞系MMTV-PyMT。 当植入乳腺脂肪垫时,MMTV PyMT细胞生长 就地 然后扩散到远端组织,优先是肺和肝( 23 ). 我们使用表达萤火虫荧光素酶(FLUC)的MMTV-PyMT细胞,使我们能够使用不同于检测p16-3MR小鼠衰老细胞的底物,通过生物发光监测活体动物的细胞。 由于这些肿瘤细胞不表达p16-3MR转基因,我们可以区分化疗对肿瘤细胞的影响和化疗诱导正常细胞衰老的影响。
我们将表达FLUC的MMTV-PyMT细胞注射到p16-MR小鼠的乳腺脂肪垫中。 一旦发现肿瘤,我们用载体、Doxo+PBS或Doxo+GCV治疗小鼠。 正如预期的那样,Doxo延缓或暂时阻止了肿瘤的生长,小鼠存活率的增加表明了这一点( 图3A 和 S7A系列 ). 经过1-2周的休眠期后,原发性肿瘤恢复生长,Doxo+PBS和Doxo+GCV组的动力学相似( 图S7A ). 然而,Doxo+GCV组的小鼠存活率增加,这与原发肿瘤的大小无关( 图3A 和 S7A系列 ). 引人注目的是,虽然大多数(约80%)接受Doxo+PBS治疗的小鼠发生了肺和肝转移,FLUC可以检测到,但在Doxo+GCV组中发生转移的小鼠更少(20%)( 图3B–C ). 原发肿瘤的再生和原发肿瘤部位的溃疡使我们无法确定这些动物的完整生存曲线。 尽管如此,数据显示,化疗后去除衰老细胞可以预防或延缓癌症复发并扩散到远端组织。
图3。 衰老促进肿瘤转移和复发。
(A–C)fLUC-MMTV-PyMT电池(10 5 )将其注射到p16-3MR雌性小鼠的乳腺脂肪垫中,并用PBS或Doxo(10 mg/kg)进行治疗。 7–10天后,给动物注射PBS或25 mg/kg GCV,持续5天(每天腹腔注射)。 (A) 对小鼠进行生存跟踪。 N=5。 (B) 癌细胞注射后7、14和21天,给多索处理的小鼠注射D-荧光素,并使用氙气成像系统测量发光。 荧光鉴定fLUC-MMTV-PyMT细胞。 第21天,根据fLUC-MMTV-PyMT细胞(C)的发光来评估转移小鼠的数量。 (D–G)fLUC-MMTV-PyMT电池(10 5 )注射到p16-3MR小鼠的乳腺脂肪垫中。 10天后,手术切除原发性肿瘤,用Doxo(10 mg/kg)治疗小鼠,3天后,用PBS或25 mg/kg GCV治疗5天(每天腹腔注射)。 (D) 给小鼠注射D-荧光素,并使用氙气成像系统在指定的时间点测量和量化原发性肿瘤的发光。 荧光鉴定fLUC-MMTV-PyMT细胞。 N=8。 (E) Doxo治疗4周后,根据肺部发光信号评估转移情况,如D.N=8所述。 (F–G)肺被切除,并使用Xenogen成像系统测量发光以量化转移数量。 对于Doxo+PBS,N=6;对于Doxo+GCV,N=3。 数据为平均值±SEM* p<0.05** p<0.01*** p<0.001。
乳腺癌患者最常见的治疗方法是手术,然后是辅助化疗或靶向治疗。 为了在小鼠中模拟这种方案,我们手术切除了一次可触及的MMTV-PyMT肿瘤( 图S7B )然后用Doxo+PBS或Doxo+GCV治疗动物。 在多索治疗的短潜伏期后,所有小鼠的原发性肿瘤复发( 图3D ). 然而,原发肿瘤再生长的动力学取决于小鼠切除后接受的治疗类型( 图3D 和 S7C系列 ). 牺牲时,Doxo+PBS组的肿瘤平均直径为16 mm,而Doxo+GCV组的肿瘤的平均直径仅为10 mm,这反映在肿瘤生物发光信号的显著差异上( 图3D ,未显示)。 与我们在之前的实验中的发现一致,与Doxo+PBS组相比,Doxo+GCV组发生转移的小鼠数量显著减少( 图3E ). 此外,来自Doxo+GCV组的确实发生转移的小鼠显示出明显较少的转移灶( 图3F和3G ).
虽然Doxo治疗可能会导致植入的肿瘤细胞衰老,但值得注意的是,GCV治疗只会去除衰老的正常宿主细胞。 因此,这些数据表明化疗可以通过诱导非肿瘤细胞衰老来促进肿瘤生长和转移。
进一步证明去除衰老细胞,而不是GCV治疗 就其本身而言 ,可以延缓癌症进展,我们测试了ABT-263,一种对衰老细胞具有选择性毒性的抗凋亡抑制剂的作用( 24 ). 正如预期的那样,ABT-263从p16-3MR小鼠中消除了Doxo诱导的衰老细胞( 图S8A ). 此外,注射MMTV-PyMT细胞的小鼠在手术切除肿瘤并联合Doxo和ABT-263治疗后,肿瘤复发和转移延迟,与GCV的作用类似( 图S8B–C ).
化疗引起的疲劳
乏力(严重疲劳)是细胞毒性化疗常见的重要副作用。 癌症患者乏力的原因通常是多因素的,化疗导致的疲乏在化疗结束后很长一段时间内都会持续存在( 25 ). 为了确定衰老细胞是否有助于化疗后活性降低,我们在代谢笼中监测了有或无衰老细胞的多索治疗p16-3MR雌性小鼠的行走轮活动。 正如预期的那样,老鼠主要在夜间跑步,而多索在12小时的夜间周期中显著减少了跑步时间( 图4A ). 令人惊讶的是,消除衰老细胞几乎足以完全挽救跑步活动的下降( 图4A ). 由于Doxo和GCV治疗对白天的活动和睡眠没有影响,我们重点关注12小时的夜间周期( 图4A 和 S9A系列 ). 在每个夜间周期中,对照组小鼠平均跑约4000米,而Doxo治疗组小鼠跑约2500米; 用Doxo plus GCV治疗的小鼠跑了3800米,接近对照小鼠的活动( 图4B ).
图4。 衰老细胞对活动的影响。
对照组或Doxo-(10 mg/kg)治疗的p16-3MR雌性小鼠用溶媒(PBS)或25 mg/kg更昔洛韦(GCV)治疗5天(每日腹腔注射)。 (A) 小鼠被单独安置在代谢笼中,并连续监测4天。 数据是4个昼夜周期的平均值,并显示了在运转轮上花费的时间百分比。 N=8。 (B) 以米为单位的行驶距离,根据夜间循环期间行驶车轮的转数计算(平均值为4)。 N=8。 (C) 老鼠被单独安置在配备有轮子的标准笼子里。 在Doxo治疗前和治疗12天后测定转数。 对于每只鼠标,值来自连续3个晚上的平均值。 该图显示了治疗后和治疗前的跑步距离之比,以百分比表示。 N=10。 (D) 对C中描述的小鼠进行监测,以确定它们能够抓住反向笼格的时间。对于每只小鼠,数值平均为5次试验。 该图显示了处理后和处理前抓取时间之间的比率,以百分比表示。 N=10。 (E) 在夜间周期中测量了A中描述的小鼠的食物摄入量。 数据为平均值±SEM* p<0.05** p<0.01*** p<0.001。
为了证实消除衰老细胞对自发活动的有益作用,并了解这种化疗诱导的疲劳的性质,我们在治疗前后监测了小鼠的跑步模式和力量。 使用标准笼子中的转轮,我们证实,虽然Doxo/PBS处理的动物的跑步活性下降了约50%,但化疗后GCV或ABT-263对衰老细胞的清除将这种下降限制在约20%( 图4C 和 S9B系列 ). 类似地,通过抓住笼盖来测量Doxo治疗导致的力量下降,通过消除衰老细胞可以大大缓解( 图4D ). Paclitaxel治疗的小鼠出现了类似的活动和力量缺陷,GCV介导的衰老细胞消除部分缓解了这些缺陷( 图S9C–D ). 此外,在注射癌细胞3周后,消除乳腺癌小鼠的衰老细胞也显著增加了多索治疗小鼠的跑车活动( 图S9E ).
自发活动减少可能是由于新陈代谢或食物摄入的改变。 然而,从代谢笼中的测量结果来看,无论有无衰老细胞,对照组和多索治疗组小鼠的基础代谢率(RQ)没有显著差异( 图S10A ). 此外,四组之间的食物摄入量具有可比性,这表明食欲不振或恶心不是多索对活动的影响的原因,至少对本研究中使用的治疗方案而言是这样的( 图4E ). Doxo导致体重大幅下降,显示出GCV拯救的趋势,但差异不显著( 图S10B ).
为了研究衰老细胞对化疗诱导的人类毒性的影响,我们使用了一个经验证的标记物 体内 衰老, 第16页 INK4a公司 外周血T细胞(PBTL)中的表达,我们之前已经证明与小鼠和人类的衰老负担相关( 12 , 26 —— 28 ). 在前瞻性收集的89名乳腺癌患者队列中,我们询问了在治疗前测量的衰老细胞的有机负荷标记物是否与随后化疗诱导毒性的风险相关,这些患者接受了具有治疗目的的标准化疗。 患者接受了蒽环类(60%)、烷基化剂(89%)和/或紫杉烷(95%)的联合用药,大多数患者(92%)还接受了G-CSF(聚乙二醇-乙醇胺)治疗,以减少治疗相关的中性粒细胞减少症( 补充表S1 ). 我们确定了化疗前PBTL之间的相关性 第16页 INK4a公司 表达和四个终点:疲劳、神经病变、任何血液毒性和任何非血液毒性。 我们的分析仅限于严重毒性(III级或IV级); 在我们的样本中,四个预先指定的终点中的每一个都出现了预期的频率(10-57%, 补充表S2 ).
测试标记之间的关联 体内 衰老和化疗毒性,我们用两种标准方法分析数据。 首先,我们比较了平均值 第16页 INK4a公司 在经历或未经历给定毒性的患者中的表达,并使用非参数检验(Wilcoxon秩和)测试其显著性。 其次,我们比较了最高四分之一的患者中给定毒性的发生率 第16页 INK4a公司 表达式与的最低四分位数 第16页 INK4a公司 使用考虑患者年龄和其他临床特征的逻辑回归模型进行表达和估计的相对风险( 补充表S2 ). 我们没有观察到PBTL之间的相关性 第16页 INK4a公司 以及聚集终点(所有血液毒性或所有非血液毒性),鉴于这些复杂和复合终点的异质性,这并不奇怪。 PBTL公司 第16页 INK4a公司 治疗前测得的严重化疗引起的神经病变患者的发病率略高(7.94比7.49,p=0.11),严重神经病变的发病率在以下四分之一范围内升高 第16页 INK4a公司 表达(9%对0%)。 之间的关联 第16页 INK4a公司 神经病变具有临界意义,这可能反映出偶然关联或弱统计能力,因为发生III/IV级神经病变的患者数量较少。 严重疲劳与治疗前PBTL之间存在显著相关性 第16页 INK4a公司 (7.93对7.39,p=0.02)。 自 第16页 INK4a公司 在日志上测量 2 -刻度,这个差异表明平均值 第16页 INK4a公司 疲劳患者的表达增加约40%。 重度疲劳发生率最高的患者 第16页 INK4a公司 44%,而在最低四分位的患者中为5% 第16页 INK4a公司 表达,反映出疲劳的相对风险增加了9倍(p=0.03)。 由于这些数据是年龄调整的,这表明体内衰老标记可以独立于年龄预测毒性。 与小鼠的发现一致( 图4 )这些结果表明,在使用PBTL治疗之前估计的衰老细胞的负荷 第16页 INK4a公司 ,预测患者因细胞毒性化疗而出现疲劳的风险。
讨论
细胞衰老是一种重要的肿瘤抑制机制,可以有效地保护长寿生物在年轻时免受癌症的侵袭( 1 ). 我们和其他人认为,与衰老细胞(SASP)相关的分泌表型可以发挥多种生物功能,无论是有益的还是有害的( 29 ). 在这些有害影响中,衰老细胞的积累和持续存在,可能是由于清除率降低和/或慢性诱导,会破坏组织内稳态,并驱动各种病理的发生或发展( 2 ). 衰老细胞是由多种癌症化疗产生的,并可能在许多方面促进癌症的进展( 30 ).
在这里,我们发现四种常用的化疗药物可以诱导正常非癌组织中持续存在衰老细胞。 治疗诱导衰老(TIS)细胞与其他刺激诱导衰老的细胞具有一些共同的特征,包括持续的低增殖、高表达 第16页 INK4a公司 持续DNA损伤和编码许多SASP因子的基因转录激活的证据( 5 , 20 ). 由于SASP被认为会助长多种疾病的发展,尤其是与慢性炎症相关的病理学( 1 , 2 )我们研究了化疗对非癌组织中衰老细胞的诱导作用。
许多化学疗法都有短期、中期和长期的副作用,这往往会限制剂量,需要停止治疗和/或降低总体疗效。 此外,对癌症幸存者的研究表明,化疗的一个长期影响是加速了一系列与年龄相关的疾病的发展( 8 ). 我们发现TIS细胞有助于局部和全身炎症,这是由组织中促炎性SASP因子的表达增加和血清中炎性细胞因子水平的增加决定的,而去除衰老细胞后,炎症细胞因子水平降低 体内 使用p16-3MR转基因小鼠。 此外,消除衰老细胞限制或阻止了化疗产生的多种不良反应。 此外,化疗治疗数周后,TIS细胞对骨髓抑制和心脏功能障碍的发生起着重要作用,这两个因素都限制了某些化疗药物的使用,尤其是蒽环类药物。 心脏功能障碍的促进可能是由于心脏衰老细胞(主要是内皮细胞)或衰老诱导的炎症所致。 衰老的非肿瘤细胞对化疗后癌症复发和向远端组织扩散很重要,至少在我们使用的乳腺癌模型中如此。 此外,清除衰老细胞会增加有无癌症时的整体自发体力活动。 重要的是,这些小鼠发现在人类队列中得到验证,表明p16 INK4a公司 外周T细胞的表达可预测乳腺癌患者化疗引起的疲劳。 我们相信后一项发现与最近的研究一致,即衰老是化疗后长期(>2或>5年)疲劳的主要危险因素( 25 ).
我们研究的局限性与人类和小鼠的药物剂量转换有关。 啮齿动物和人类之间的药物药代动力学和药效学存在显著差异,这些结果的一个潜在问题是,与人类使用的剂量不同,小鼠体内的衰老诱导是由药理学上不现实的剂量所致。 然而,考虑到我们在药效学而非药代动力学方面的结果,我们注意到使用这些化合物剂量的小鼠实验会产生生物效应(肿瘤减少、骨髓抑制等),但属于亚致死性。 这正是此类药物在人体中的使用方式; 也就是说,在接近最大耐受剂量的剂量下,诱导肿瘤反应和细胞毒性(例如骨髓抑制)。 因此,似乎可以合理地推断,两种物种中的药理活性剂量都会导致体内衰老细胞的积累。 此外,我们在含有多种化合物的小鼠中显示了这些作用,这表明衰老细胞对DNA损伤剂的反应似乎是以生物有效剂量进行的细胞毒性化疗的一般性质,而不是对所研究的一种化合物的狭隘性。 最后,我们相信这些结果与其他结果一致,表明细胞毒性化疗会导致人类衰老( 10 , 12 , 27 , 31 ). 总的来说,我们认为这些结果表明,各种DNA损伤剂能够迅速有效地增加人类和小鼠体内衰老细胞的负担,并且这些细胞的积累会对宿主造成长期毒性。
由于构成SASP的许多细胞因子、趋化因子、蛋白酶和生长因子( 5 )可以想象,衰老细胞可能会导致一些与癌症治疗相关的副作用。 这里的数据显示了TIS细胞在小鼠中的直接作用,以及人类疲劳和衰老细胞之间的密切关系。 因此,另一种方法是开发可选择性靶向衰老细胞(衰老药物)和/或SASP的治疗方法,这种方法最近显示出了前景( 24 ). 事实上,在用多克索治疗的小鼠中,给予解senolytic剂ABT-263有效地消除了衰老细胞,改善了身体活动,并减少了癌症复发。 当然,这种治疗方法需要仔细考虑TIS是否有有益的作用,例如促进化疗损伤组织的修复,或者衰老细胞激活对肿瘤细胞免疫反应的潜力。 尽管如此,从肿瘤微环境中用药物去除衰老细胞可能是一种创新策略,可以限制当前化疗的毒性,从而提高癌症患者的健康寿命和可能的寿命。
材料和方法
细胞制备和培养
对13.5天的胚胎进行解剖和培养以产生MEF,如前所述,成纤维细胞来源于3月龄小鼠的背部皮肤( 15 ). 小鼠原代细胞扩增不超过10倍。 人类成纤维细胞HCA2来自O.Pereira-Smith(德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心)。 实验室未对细胞进行重新验证,但定期监测支原体污染情况(一次/2周)。 所有细胞在使用前在3%氧气中培养至少4倍。 MMTV-PyMT细胞购自ATCC(美国马纳萨斯VI),该公司通过短串联重复序列分析验证细胞系,用表达萤火虫荧光素酶(fLUC)的慢病毒转导(美国俄亥俄州阿克伦市珀金埃尔默),购买后使用时间不超过6个月。 盐酸多柔比星和紫杉醇(美国密苏里州圣路易斯Sigma-Aldrich)在100 mM的二甲基亚砜中溶解,并在含血清的培养基中稀释。 根据制造商的方案,使用MTS分析(美国威斯康星州麦迪逊市普罗米加)评估细胞活力。
小鼠
p16-3MR小鼠( 15 )由AALAC认证的巴克衰老研究所(美国加利福尼亚州诺瓦托)动物设施保存。 所有程序均由机构动物护理和使用委员会批准。 p16-3MR小鼠在室内饲养。 对于 体内 发光和组织提取,雄性和雌性小鼠均使用。 在所有其他实验中,均使用雌性小鼠。 对于Doxo治疗,10–16周龄p16-MR小鼠经腹腔(i.p.)注射一次PBS中2、10或25 mg/kg盐酸阿霉素(Sigma-Aldrich),5天后用溶媒或GCV治疗。 GCV通过每天腹腔注射的方式在PBS中连续5天以25 mg/kg的剂量给药。对照小鼠注射等量的PBS。对于紫杉醇治疗,10–16周龄p16-MR小鼠腹腔注射3次10 mg/kg的紫杉醇(Sigma-Aldrich)在PBS/5%二甲基亚砜中,5天后用载体或GCV治疗。 GCV通过每日腹腔注射在PBS中连续5天,剂量为25 mg/kg。对照小鼠注射等量的PBS。对于替莫唑胺治疗,10–16周龄p16-MR小鼠腹腔注射3次50 mg/kg(Sigma-Aldrich)PBS/5%DMSO/0.1%吐温。 对于顺铂治疗,10–16周龄p16-MR小鼠腹腔注射3次2.3 mg/kg(Enzo Life Sciences,Farmingdale NY,USA)PBS/1%二甲基亚砜。
MMTV-PyMT-fLUC单元(10 5 )注射到腹股沟乳腺脂肪垫。 手术切除是在全身麻醉(异氟烷)下进行的,伤口用金属针缝合。 术前和术后48小时皮下注射镇痛药(丁丙诺啡)。
实时PCR
总RNA是使用PureLink Micro-to-Midi总RNA纯化系统(美国纽约州格兰德岛生命科技公司)制备的。 使用试剂盒(Applied Biosystems,Carlsbad CA,USA)将RNA反向转录成cDNA。 qRT-PCR反应按所述进行( 15 )使用Universal Probe Library系统(美国加利福尼亚州南旧金山罗氏)。 人和小鼠p16、LmnB1、IL-1a、IL-6、Mmp-3、Mmp-9、Cxcl-1的引物/探针组如先前报道( 15 , 32 ). 此外,使用了以下集合:Cxcl-10正向5′-gctgccgtcatttctgc-3′,反向5′-tccactggcctcatc-3′,探针#3; Ccl-20正向5′-aactggtgaaaaggctgt-3′,反向5′-gtccatccaaaaa-3′,探头#73; Ccl-7正向5′-ttctgtgcctgctgctcata-3′,反向5′-TTgacatagcatg-3′,探头89。
生物发光
对于 体内 Renilla荧光素酶发光,小鼠腹腔注射15 ug Xenolight RediJect Coelentarazine h(Calipers/Perkin Elmer,Waltham MA,USA)。 25分钟后,用异氟醚对小鼠进行麻醉,并用Xenogen IVIS-200光学成像系统(Caliper Life Sciences,Hopkinton MA,USA;5分钟中期装箱)测量发光。 对于 体内 萤火虫萤光素酶的发光,小鼠腹腔注射150mg/kg的Xenolight D-萤光素(Calipers/Perkin-Elmer)。 5分钟后,用异氟烷麻醉小鼠,并用Xenogen IVIS-200光学成像系统(Caliper Life Sciences;3分钟培养基装仓)测量发光。
免疫印迹分析
用温热的PBS清洗细胞,裂解,并使用4–12%的Bis-Tris凝胶进行SDS–PAGE; 分离的蛋白质被转移到硝化纤维素膜上( 18 ). 将膜封闭,并在室温下培养2小时(LaminB1:Santa Cruz Biotechnology,Santa Cru z CA,USA;HMGB1:Abcam,Cambridge MA,USA)或在4°C下过夜(p21:Calbiochem,San Diego CA,USA;actin:Sigma-Aldrich)与初级抗体。 在室温下清洗膜并与辣根过氧化物酶(1:5000;细胞信号)-结合二级抗体孵育45分钟,然后再次清洗。 通过增强化学发光检测信号。
酶联免疫吸附试验(ELISA)
检测IL-6和CXCL-1的ELISA试剂盒来自R&D Systems(明尼阿波利斯,明尼苏达州,美国),并根据制造商的协议使用。 通过用无血清DMEM洗涤细胞并在无血清DMEM中培养24小时来制备条件培养基。 对于Doxo处理的细胞,在处理10天后收集培养基。 ELISA结果按细胞数标准化。 通过离心分离小鼠血清。
免疫荧光
将玻璃盖玻片上的细胞或OCT包埋的肺在PBS中洗涤,在4%多聚甲醛中固定,用50mM甘氨酸猝灭,用PBS中的0.3%Triton X-100透化,用3%山羊血清饱和(Life Technologies,Carlsbad CA,USA), 并与53bp1和γH2AX一级抗体在室温下孵育1小时(Novus Biologicals,Littleton CO,USA),然后与Alexa荧光标记的二级抗体(Life Technologies)孵育45分钟,并使用Prolong Fade with Dapi(Life Technologies)安装。
新陈代谢和活动
在将p16-3MR小鼠转移到隔离室之前,将其单独饲养3天,并使用Promethion系统(美国内华达州北拉斯维加斯的Sable Systems)连续监测4天。 或者,在适应单间房屋3天后,将小鼠转移到装有滚轮的笼子中(美国俄亥俄州哥伦布市哥伦布仪器公司),并进行3个晚上的测量。 食物摄入量是通过每24小时称量一次食物的重量来测量的。 就握力而言,训练单个小鼠进行3次试验,然后在随后的3次试验中测量抓握时间并取平均值。
骨髓细胞采集
用一氧化碳对小鼠实施安乐死后,立即从其股骨和胫骨中取出 2 使用21号针头和注射器将BMC从骨骼中冲洗到含有2%FCS的HBSS中。 在溶血红细胞后,测定从每只小鼠的两条后腿采集的骨髓细胞总数。
流式细胞术分析造血细胞群的频率
用生物素偶联的抗CD3e、抗CD45R/B220、抗Gr-1、抗CD11b和抗Ter-119抗体以及抗CD16/32抗体预先孵育BMC,以阻断Fcγ受体。 然后用链霉亲和素FITC和抗Sca1-PE-Cy7、c-Kit-APC-Cy7、CD150-APC和CD48-Pacific蓝对其进行染色。 HPC的频率(Lin − Sca1类 − c-套件 + 细胞),LSK细胞(Lin − Sca1类 + c-套件 + 细胞)和造血干细胞(CD150 + CD48型 − LSK细胞)用Aria II细胞分选仪进行分析。 每个样品约为5x10 5 –1x10个 6 使用BD FACSDiva 6.0(BD Biosciences)和FlowJo(FlowJo,Ashland,OR)软件采集BMC并分析数据。
集落形成细胞(CFC)和鹅卵石区域形成细胞(CAFC)分析
通过在MethoCult中培养BM-MNCs(单核细胞)进行CFC分析 ™ GF M3434甲基纤维素培养基(干细胞 ™ 技术公司,加拿大温哥华)。 根据制造商的方案,在第7天对CFU粒-巨噬细胞(GM)集落进行评分,在孵育的第12天对CFU-粒细胞、-红细胞、-单核细胞和-巨核细胞(GEMM)集落评分。 如前所述进行鹅卵石区域形成细胞(CAFC)分析( 24 ).
超声心动图
如前所述进行二维经胸超声心动图( 29 ). 简言之,在成像期间,用1.5%异氟烷和100%氧气混合对小鼠进行轻度麻醉。 使用LZ 550系列、55MHz MicroScan换能器探头和Vevo 2100成像系统(VisualSonics;加拿大安大略省多伦多)在4周实验期前后进行超声心动图检查( 33 ). 左心室缩短分数和射血分数由胸骨旁短轴视图的M模式测定。 所有参数均取至少3个连续高分辨率心脏循环的平均值进行分析。
患者
这项名为LCCC 1027的研究是在北卡罗来纳大学(UNC)医院接受乳腺癌治疗的成年患者中进行的,该研究得到了UNC机构审查委员会的批准,并在clinicaltrials.gov上注册( NCT01305954号 ). 这项研究是根据《赫尔辛基宣言》进行的。 18岁以上被诊断为I–IV期乳腺癌的患者,计划在新诊断或复发疾病的新辅助剂、辅助剂或转移环境下开始新的化疗疗程,他们同意参与该研究。 对于这份手稿,只分析了新佐剂和佐剂设置。 排除有克隆性骨髓疾病病史(如急性或慢性白血病)、同时进行实验治疗或之前或当前接受HDAC抑制剂治疗的患者。 患者接受标准的化疗方案,包括使用生长因子。 从病历中提取病史和治疗信息。 患者也同意在开始治疗前接受静脉切开术进行分子分析。 分子分析由对患者数据不知情的研究人员进行,收集临床信息的研究人员对实验室结果不知情,直到数据收集完成。
p16表达评估
将10 ml血液抽入薰衣草(EDTA)试管,用于分离CD3 + T淋巴细胞。 使用RNeasy Mini Kit(Qiagen)分离总RNA,并使用ImProm-II逆转录酶试剂盒(Promega)制备cDNA。 的表达式 第16页 INK4a公司 通过TaqMan定量逆转录聚合酶链反应测定 第16页 INK4a公司 并标准化为 YWHAZ公司 家政基因。
统计分析
未成对的 t吨 该检验用于计算两两比较的P值。 使用双向方差分析和Bonferroni后验计算多重比较的P值。 之间的关联 第16页 INK4a公司 采用单因素方差分析进行3/4级毒性试验。 0.05或更低的P值被认为具有统计学意义。 由于分组规模较小,因此使用了Wilcoxon p值。 数据由A.M.Deal使用SAS版本9.2(SAS,Cary,NC)和STATA版本12(StataCorp,College Station,TX)进行分析。
重要性声明。
许多基因毒性化学疗法有使人衰弱的副作用,也会导致正常组织的细胞衰老。 衰老细胞长期存在,可促进局部和全身炎症,导致或加剧化疗的许多副作用。
致谢
我们感谢Simone Brandenburg帮助滴定细胞培养中的阿霉素。 我们感谢Herman Sillje分享CD31抗体。
这项工作得到了美国意大利癌症基金会(MD)和美国国立卫生研究院(AG009909、AG017242、AG041122和CA122023)(JC、DZ)的资助。 JC和DZ是Unity Biotechnology的创始人。 MD、JC和DZ拥有Unity Biotechnology的股权。 NM是HealtSpan Diagnostics的员工。 NES是HealthSpan Diagnostics的创始人之一,拥有财务利益。
工具书类
1 Campisi J.衰老、细胞衰老和癌症。 《生理学年鉴》。 2013; 75:685–705. doi:10.1146/annurev-physiol-030212-183653。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
2 Childs BG,Durik M,Baker DJ,van Deursen JM。衰老和年龄相关疾病中的细胞衰老:从机制到治疗。 《国家医学》2015; 21:1424–35. doi:10.1038/nm.4000。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
三。 Baker DJ、Wijshake T、Tchkonia T、LeBrasseur NK、Childs BG、van de Sluis B等。清除p16Ink4a阳性衰老细胞延缓衰老相关疾病。 自然。 2011; 479:232–6. doi:10.1038/nature10600。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
4 Baker DJ、Childs BG、Durik M、Wijers ME、Sieben CJ、Zhong J等。天然存在的p16(Ink4a)阳性细胞缩短健康寿命。 自然。 2016; 530:184–9. doi:10.1038/nature16932。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
5 Coppe JP、Patil CK、Rodier F、Sun Y、Munoz DP、Goldstein J等。衰老相关分泌表型揭示了致癌RAS和p53肿瘤抑制剂的细胞自主功能。 《公共科学图书馆·生物》。 2008; 6:2853–68. doi:10.1371/journal.pbio.0060301。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
6 Dy GK,Adjei AA。系统性癌症治疗:过去60年的演变。 癌症。 2008; 113:1857–87. doi:10.1002/cncr.23651。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
7 Schunemann M、Anker SD、Rauchaus M。癌症疲劳综合征反映了临床非显性心力衰竭:一种肿瘤心脏病学方法。 Nat Clin Pract肿瘤。 2008; 5:632–3. doi:10.1038/ncponc1226。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
8 Hudson MM、Ness KK、Gurney JG、Mulrooney DA、Chemaitilly W、Krull KR等。接受儿童癌症治疗的成年人健康结果的临床确定。 JAMA公司。 2013; 309:2371–81。 doi:10.1001/jama.2013.6296。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
9 Schmitt CA。衰老、凋亡和治疗——切断癌症的生命线。 Nat Rev癌症。 2003; 3:286–95. doi:10.1038/nrc1044。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
10 Sun Y、Campisi J、Higano C、Beer TM、Porter P、Coleman I等。治疗对肿瘤微环境的损伤通过WNT16B促进前列腺癌治疗抵抗。 《自然医学》,2012年; 18:1359–68. doi:10.1038/nm.2890。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
11 Ewald JA、Desotelle JA、Wilding G、Jarrard DF。 癌症的治疗性衰老。 美国国家癌症研究所杂志2010; 102:1536–46. doi:10.1093/jnci/djq364。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
12 Sanoff HK、Deal AM、Krishnamurthy J、Torrice C、Dillon P、Sorrentino J等。细胞毒化疗对乳腺癌患者分子年龄标记物的影响。 2014年国家癌症研究所杂志; 106:dju057。 doi:10.1093/jnci/dju057。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
13 Ressler S、Bartkova J、Nielederger H、Bartek J、Scharffetter-Kochanek K、Jansen-Durr P等。p16INK4A是人体皮肤细胞衰老的一种体内强健生物标记物。 老化细胞。 2006; 5:379–89. doi:10.1111/j.1474-9726.2006.00231.x。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
14 Krishnamurthy J、Torrice C、Ramsey MR、Kovalev GI、Al-Regaiey K、Su L等。Ink4a/Arf表达是衰老的生物标志物。 临床投资杂志。 2004; 114:1299–307. doi:10.1172/JCI22475。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
15 Demaria M、Ohtani N、Youssef SA、Rodier F、Toussaint W、Mitchell JR等。衰老细胞通过分泌PDGF-AA在最佳伤口愈合中发挥重要作用。Dev Cell。 2014; 31:722–33. doi:10.1016/j.devcel.2014.11.012。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
16 Pommier Y,Leo E,Zhang H,Marchand C.DNA拓扑异构酶及其抗癌和抗菌药物中毒。 化学生物。 2010; 17:421–33. doi:10.1016/j.chembiol.2010.04.012。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
17 庞B,乔X,杨森L,维尔兹A,格鲁修斯T,柯霍文R,等。药物诱导组蛋白从开放染色质中清除有助于阿霉素的化疗效果。 国家公社。 2013; 4:1908. doi:10.1038/ncomms2921。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
18 Freund A、Laberge RM、Demaria M、Campisi J.Lamin B1缺失是衰老相关的生物标志物。 分子生物学细胞。 2012; 23:2066–75. doi:10.1091/mbc。 E11-10-0884。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
19 Davalos AR、Kawahara M、Malhotra GK、Schaum N、Huang J、Ved U等。p53依赖性Alarmin HMGB1的释放是衰老表型的中心介体。 细胞生物学杂志。 2013; 201:613–29. doi:10.1083/jcb.201206006。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
20 Rodier F、Coppe JP、Patil CK、Hoeijmakers WA、Munoz DP、Raza SR等。持续的DNA损伤信号触发衰老相关的炎症细胞因子分泌。 自然细胞生物学。 2009; 11:973–9。 doi:10.1038/ncb1909。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
21 van der Most RG、Currie AJ、Robinson BW、Lake RA。 解读危险的死亡:细胞毒性化疗如何引发炎症、免疫或什么都没有。 细胞死亡不同。 2008; 15:13–20. doi:10.1038/sj.cdd.4402255。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
22 Singal PK,Iliskovic N.阿霉素诱导的心肌病。 《英国医学杂志》,1998年; 339:900–5. doi:10.1056/NEJM199809243391307。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
23 Fantozzi A,Christopori G.乳腺癌转移小鼠模型。 2006年乳腺癌研究; 8:212. doi:10.1186/bcr1530。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
24 Chang J,Wang Y,Shao L,Laberge RM,Demaria M,Campisi J,等。ABT263清除衰老细胞对小鼠衰老造血干细胞的再生作用。 《国家医学》2016; 22:78–83. doi:10.1038/nm.4010。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
25 Kreissl S、Mueller H、Goergen H、Mayer A、Briellant C、Behringer K等。霍奇金淋巴瘤患者和幸存者的癌症相关疲劳:德国霍奇金研究小组的纵向研究。 柳叶刀Oncol。 2016; 17:1453–62. doi:10.1016/S1470-2045(16)30093-6。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
26 Liu Y,Sanoff HK,Cho H,Burd CE,Torrice C,Ibrahim JG,等。外周血T细胞中p16(INK4a)的表达是人类衰老的生物标志物。 老化细胞。 2009; 8:439–48. doi:10.1111/j.1474-9726.2009.00489.x。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
27 Wood WA、Krishnamurthy J、Mitin N、Torrice C、Parker JS、Snavely AC等。化疗和干细胞移植增加p16INK4a表达,一种T细胞衰老的生物标志物。 EBioMedicine公司。 2016; 11:227–38. doi:10.1016/j.ebiom.2016.08.029。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
28 Burd CE、Sorrentino JA、Clark KS、Darr DB、Krishnamurthy J、Deal AM等。用p16(INK4a)-荧光素酶模型监测体内肿瘤发生和衰老。 单元格。 2013; 152:340–51. doi:10.1016/j.cell.2012.12.010。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
29 Demaria M、Desprez PY、Campisi J、Velard MC。皮肤衰老细胞的细胞自主和非自主效应。 《皮肤病学杂志》。 2015; 135:1722–6。 doi:10.1038/jid.2015.108。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
30 Dorr JR,Yu Y,Milanovic M,Beuster G,Zasada C,Dabritz JH,等。癌症治疗中细胞衰老的合成致命代谢靶向。 自然。 2013; 501:421–5. doi:10.1038/nature12437。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
31 Beeharry N,Broccoli D.化疗反应中的端粒动力学。 2005年《现代分子医学》; 5:187–96. doi:10.2174/15566524053586554。 [ 内政部 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
32 Laberge RM、Sun Y、Orjalo AV、Patil CK、Freund A、Zhou L等。MTOR通过促进IL1A翻译来调节促肿瘤衰老相关的分泌表型。 自然细胞生物学。 2015; 17:1049–61. doi:10.1038/ncb3195。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
33 Flynn JM、O'Leary MN、Zambataro CA、Academia EC、Presley MP、Garrett BJ等。雷帕霉素晚期治疗可逆转与年龄相关的心脏功能障碍。 老化细胞。 2013; 12:851–62. doi:10.1111/acel.12109。 [ 内政部 ] [ PMC免费文章 ] [ 公共医学 ] [ 谷歌学者 ]
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