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.1993年10月；13(10):6241–6252. 数字对象标识：10.1128/mcb.13.10.6241

通过依赖雌二醇的人raf-1蛋白激酶对细胞进行条件转化并快速激活有丝分裂原激活的蛋白激酶级联。

M L萨缪尔 1,M J韦伯 1,J M主教 1,M麦克马洪 1
PMCID:PMC364683 PMID：8413224

摘要

我们报道了一种调节细胞质信号分子（由raf-1编码的蛋白激酶）活性的策略。构建了编码人类p74raf-1致癌形式与人类雌激素受体（hrafER）激素结合域之间基因融合的逆转录病毒。融合蛋白在不存在雌二醇的情况下是不转化的，但可以通过添加雌二醇或从生长培养基中去除雌二醇而可逆地激活。在C7 3T3细胞中，hrafER的激活伴随着丝裂原活化蛋白（MAP）激酶激酶和p42/p44 MAP激酶的快速蛋白合成依赖性激活，以及电泳迁移率降低所证明的常驻p74raf-1蛋白的磷酸化。p74raf-1的磷酸化对蛋白的激酶活性没有影响，表明迁移率变化是p74rav-1酶活性的不可靠指标。从生长介质中去除雌二醇导致MAP激酶级联快速失活。这些结果表明，Raf-1可以在体内激活MAP激酶级联，而不依赖于其他“上游”信号成分。对经hrafER条件转化的rat1a细胞进行的平行实验表明，MAP激酶激酶在雌二醇作用下激活，但随后没有激活p42/p44 MAP激酶或p74raf-1磷酸化。这一结果表明，在rat1a细胞中，Raf-1介导的致癌转化不需要p42/p44 MAP激酶激活。然而，当细胞用冈田酸预处理时，在表达hrafER的rat1a细胞中观察到p42/p44 MAP激酶的雌二醇依赖性激活和p74raf-1的磷酸化。这一结果表明，蛋白磷酸酶活性水平可能在MAP激酶级联的调节中发挥关键作用。我们的结果提供了第一个细胞溶质信号传感器通过与雌激素受体的激素结合域融合而被利用的例子。这个条件系统不仅有助于阐明Raf-1的功能，而且可能更广泛地用于构建其他激酶和信号分子的条件形式。

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