细胞悬液和组织的超微粉碎技术

摘要

固定组织的超低温冷冻术已经研究了多年，但到目前为止，由于几个原因，其成功受到了限制。本文报道的简单技术不仅可以对多种组织进行超低温切割，还可以对悬浮的单个细胞进行超低温冷冻切割，其超微结构细节的保存和可视化至少相当于传统包埋程序获得的超微结构细节。在这项技术中，为了控制切片的稠度，在冷冻之前将蔗糖注入戊二醛固定的组织块中。通过选择合适的蔗糖浓度和切片温度组合，可以顺利切片各种组织。将悬浮在蔗糖溶液中的分离细胞通过切割悬浮液的冰冻液滴进行切片。将饱和或近饱和蔗糖溶液的小液滴悬浮在睫毛探针的尖端，用于将冷冻切片从刀口转移到网格基板或水面上。在蔗糖液滴表面上的切片熔化时，由于表面张力，它们被平展且光滑。当单个细胞悬浮液的部分熔化时，单个细胞的部分仍局限于液滴表面的小区域。这些设备可以切割较宽的干燥段，并避免二甲基亚砜溶液的浮选。通过适当的染色程序，可以观察到保存完好的超微结构细节。该技术通过许多组织制剂以及红细胞和细菌细胞悬浮液来说明。