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传感器
第16卷
第7版
10.3390/s16071083
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第条

乙酰化高丝氨酸内酯（AHL）的参与清醒气单胞菌冷藏多宝鱼的腐败(大菱鲆L.）

通过
李婷婷
1,2,
崔方超
三,
白凤龄
三,
赵国华
1和
李建荣
1,3,*
1
西南大学食品科学学院，重庆400715
2
大连民族大学生命科学学院，大连116029
三
渤海大学食品科学与技术学院，锦州121013
*
信件应寄给的作者。
传感器 2016,16(7), 1083;https://doi.org/10.3390/s16071083
收到的提交文件：2016年5月14日/修订日期：2016年7月4日/接受日期：2016年7月8日/发布日期：2016年7月13日
（本条属于本节生物传感器)
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摘要

:
从腐烂的大菱鲆中分离到一株群体感应菌株。该物种通过16S rRNA基因分析和经典测试确定，命名为索氏气单胞菌AS7.法定人数（QS）信号(N个-用报道的菌株检测酰基高丝氨酸内酯（AHL），并用GC-MS进一步测定其结构。用punch法研究了AHL在菌株生长阶段的活性变化以及不同培养条件对AHL分泌活性的影响。结果表明，菌株AS7可以诱导报告菌株产生典型的表型反应。N个-丁酰基-分力-高丝氨酸内酯（C4–HSL），N个-己酰-分力-高丝氨酸内酯（C6–HSL），N个-辛酰基-分力-高丝氨酸内酯（C8–HSL），N个-癸酰基-分力-高丝氨酸内酯（C10–HSL），N个-十二烷酰基-分力-高丝氨酸内酯（C12–HSL）。AHL的活性具有密度依赖性，最大分泌水平分别为pH 8、蔗糖培养、1%氯化钠和32 h。AS7菌株铁载体的产生受外源C的调节8–HSL，而不是C6–HSL。外源C4–HSL和C8–HSL加速了冷藏大菱鲆样品中AS7的生长速度和种群密度。然而，根据鱼类样本的总活菌数和总挥发性碱性氮（TVB-N）值，外源C6–HSL没有导致大菱鲆鱼片变质。总之，我们的结果表明QS参与了冷藏大菱鲆的腐败。

1.简介

大菱鲆L.是中国、智利和欧洲几个国家最重要的养殖鱼类之一。鱼类是极易腐烂的产品，由自然发生的各种生物化学变化以及微生物活动引起的腐败。微生物腐败是鱼类腐败的最常见原因。因此，微生物活性被认为对腐败的表现非常重要。近年来，腐败食品中群体感应信号的检测为研究食品腐败过程增添了新的维度。
群体感应（QS）是Fuqua Winans和Greenberg于1994年提出的一个术语，用于描述细胞间通信，是一种允许细菌通过释放和接收信号分子（称为自身诱导物（AIs））来监测其种群密度和控制许多生理功能的系统[1].N个-酰基高丝氨酸内酯（AHL）是最常见的AI，通常对革兰氏阴性菌具有特异性[2]. 表型的调控，如群集、毒力和生物膜的形成，依赖于由信号分子同步的种群密度[三,4,5,6]. QS最重要的研究集中在AHL在细菌发病机制中的调节作用[2,7]. 迄今为止，通过QS微生物调控的食品腐败问题受到了研究人员的更多关注，这一事件导致了严重的经济损失和公共卫生问题。一些研究已经确定了QS调节的生物膜形成嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌和液化沙雷菌[8,9].
AHL的检测是QS系统中的一个关键步骤。根据典型的表型反应，如β-半乳糖苷酶活性、生物发光或紫罗兰酸生成，报告染色通常用于筛选AHL生成[10,11]或同步组合[12]. 每个诱导菌株对不同范围的AHL作出反应，但结果可能为假阳性。薄层色谱法（TLC）是一种快速、廉价的检测AHL类型的方法，它用平板覆盖监测细菌，分离细菌提取物和AHL标准物[13]. 现在，在不同的情况下，AHL的检测更加敏感和可靠。采用高效液相色谱-（串联）质谱（HPLC-（MS）/MS）和气相色谱-质谱（GC-MS）进行定性和定量分析。Ortori验证了用于定量AHL的LC-MS/MS[14]. 朱[15]报道了一种检测AHL的GC-MS方法，并从冷藏虾中分离出的两株菌株的提取物中发现了三种AHL。
索氏气单胞菌是一种革兰氏阴性、活动、有鞭毛的兼性厌氧细菌，是动物、水产动物和人类的一种条件致病菌[16,17,18,19]. 近年来，QS的研究气单胞菌属spp.专注于嗜水气单胞菌和QS对生物膜形成、毒力因子、蛋白酶活性和运动性的调节[20,21,22].
在本研究中，使用气相色谱-质谱（GC/MS）检测索布里亚亚种从真空包装冷藏腐败大菱鲆中分离得到的菌株AS7。同时，通过琼脂扩散试验研究了环境条件对AHL产生的影响以及AHL产生动力学。此外，在AS7培养基中添加外源性自诱导物，并将AS7接种到无菌鱼片中。本研究的目的是阐明细菌信号（AHL）和AHL依赖性调节是否会导致鱼类腐败。

2.材料和方法

2.1. 材料和细菌菌株

从当地水产品市场（中国锦州）采集活大菱鲆，并用含氧水转移至实验室。鱼被杀后用无菌水冲洗。然后，将样品真空包装，并在−2°C下冷藏28天。N个-丁酰基-分力-高丝氨酸内酯（C4–HSL），N个-己酰-分力-高丝氨酸内酯（C6–HSL），N个-辛酰基-分力-高丝氨酸内酯（C8–HSL），N个-癸酰基-分力-高丝氨酸内酯（C10–HSL），N个-十二烷酰基-分力-高丝氨酸内酯（C12–HSL），N个-十四酰基-分力-高丝氨酸内酯（C14–HSL）从Sigma-Aldrich（英国普尔）购买。本研究中使用的其他试剂是市售的分析级试剂。紫色色杆菌CV026和根癌农杆菌A136储存在我们的实验室。

2.2. 细菌菌株的分离与鉴定

将10克样品与90 mL无菌生理盐水混合，并在BagMixer（Interscience，St.Nom，France）中翻瓣1分钟。然后，将处理过的样品持续稀释，并在平板计数琼脂（PCA，Aoboxing Bio-Tech，中国北京）上计数，并在28°C下培养48小时。48小时后，对所有明显不同的细菌菌落进行评估，并在每个菌落上划线气单胞菌属选择性培养基（Ryan），然后在28°C下培养24小时。观察并记录菌落的颜色、轮廓、大小和其他光学特性。VITEK-2 Compact系统（法国Marcy l'Etoile BioMerieux）用于识别单个菌落[23]. 使用正向引物27F（5′-ACGTTGATCCTTGCTCCAG-3′）和反向引物1492R（5′-ACGTCTCTCTCTTACGACTT-3′）扩增16S rRNA基因，用16S rRNA PCR验证了对菌落的进一步研究[24]. 通过GenBank数据库中BLASTN程序比较密切相关的序列，并使用MEGA 5.0软件进行系统发育分析，对基因序列进行分析。

2.3. 分离菌株的AHL检测

AHL分子侧链长度从短链（C4）到长链（C18）碳链不等。要测试的应变反应紫锥菊CV026与LuxR同源物CviR在LB琼脂平板上平行划线，快速筛选短链AHL的产生[13]. 检测到长链AHL的存在A.肿瘤A136，携带紫胶Z融合到特拉I，并在5-溴-4-氯-3-吲哚基-β存在下产生蓝色-d日-吡喃半乳糖苷（X-Gal）以类似的方法添加20μL X-Gal（20 mg/mL）[12]. C类4–HSL和C6–HSL分别用作CV026和A136的阳性对照。阴性对照为监测菌株本身。

2.4. AHL提取

此外，将100 mL培养物以10000 rpm离心10 min，然后用等量的乙酸乙酯（0.1%（v/v）冰乙酸）萃取。将混合物充分振荡30秒，并停留一层。此过程重复三次，然后移除乙酸乙酯并添加另一个100 mL乙酸乙酯。然后，将整个提取过程重复三次，并混合整个乙酸乙酯部分。用旋转蒸发器（35℃，150 rpm）将合并的乙酸乙酯馏分蒸发至干燥，并在1 mL甲醇中再溶解。提取物储存在−20°C的无菌微型离心管中。

2.5. AHL生产动力学

采用CV026琼脂扩散法测定AHL值。在LB培养基中进行预培养，并在28℃下培养12 h，将100μL稀释至100 mL LB培养液。培养物在28°C 160 rpm下生长，并通过OD进行监测600决定。此外，每四小时提取100 mL样品，并以10000 rpm离心10 min。上清液用于分析均匀扩散分析中的AHL含量[25]. 每个孔补充200μL上清液，并在28°C下培养48小时。测量并记录诱导区的直径。

2.6. 几种条件对AS7生产AHL的影响

在AB培养基中研究了碳源对AHL生成的影响[26]补充有酪蛋白氨基酸（CAA，0.5%）和0.5%的以下碳源之一：葡萄糖、蔗糖、果糖、木糖、乳糖或麦芽糖。通过混合不同体积的磷酸盐缓冲液，研究了胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）培养基的pH值对pH值4、5、6、7、8或9的影响。在含0.5%、0.7%、1.0%、2.0%、3.0%、4.0%或5.0%NaCl的LB培养基中，研究了盐浓度变化对AHL生成的影响。在28°C下进行实验的预培养物在TSB培养基中培养12 h，并稀释为1:1000，以接种到各种培养基中。在28°C 160 rpm下培养24小时，并测定OD600此外，100 mL溶液以10000 rpm离心10 min，上清液储存在−20°C。

2.7. 通过气相色谱-质谱法（GC-MS）鉴定AHL

据朱介绍，使用GC-MS Agilent 7890N/5975（美国加利福尼亚州帕洛阿尔托市Agilent）进行分析[15]进行了一些修改。所有样品均以分离模式（50:1）注入HP-5 MS毛细管柱（30 m长×0.25 mm内径×0.25μm膜厚）（安捷伦，加利福尼亚州帕洛阿尔托，美国）。以1 mL/min的流速将氦用作载气。GC注射器温度为200°C，烘箱温度编程如下：150°C以10°C/min升温至220°C，以5°C/min降温至250°C，然后以0.5°C/min升压至252.5°C。质谱条件如下：电子电离源设置为70 eV，MS Quad 150°C，发射电流500μA，MS source 230°C。通过全扫描模式采集数据(米/秒35–800），并在选定的离子监测（SIM）模式下(米/秒143).

2.8. 菱铁矿分析

使用铬天青-S CAS-agar在固体培养基上检测到嗜铁菌的产生[27]（NC Pharmculture CO.，Ltd，Beijing，China）进行了一些修改。为了制备1L蓝色琼脂，将60.50mg CAS溶于50mL蒸馏水中，并与10mL铁（III）溶液（1mM FeCl）混合三·6小时2O、 10 mM HCl）。在混合的情况下，将该溶液缓慢添加到溶于40 mL蒸馏水中的72.90 mg十六烷基三甲基溴化铵（HDTMA）中。将复合深蓝色液体在121°C下蒸压15分钟，作为CAS分析溶液备用。在冷却至50°C并与1 mL CaCl搅拌后，高压灭菌30 mL casamino acids（10%）2（1 mM），20 mL硫酸镁4·7小时2O（1 mM），10 mL葡萄糖（20%）作为碳源，15.00 g琼脂，30.24 g 1,4-哌嗪二磺酸（Pipes），12.00 g 50%(w个/w个)氢氧化钠溶液，将pH值提高到管道的pKa（6.8）。然后将培养物加热至121°C并通过高压灭菌保持15分钟。冷却至60°C后，搅拌上述CAS分析溶液，通过边沟锥形烧瓶缓慢添加溶液，充分搅拌而不产生泡沫。每个平板含有20 mL蓝色琼脂，用牛津杯打孔（高压灭菌）。这些蓝色琼脂被用来检测铁载体。添加外源性自体诱导物如下：C6–HSL，10、20和40μM；C类8–HSL，10、20和40μM。使用等体积的甲醇作为阴性对照。

2.9. 鱼类腐败检测

根据赫伯特的说法，制作了无菌大菱鲆鱼片[28]进行了一些修改。将活大菱鲆杀死，鱼片用蒸馏水清洗，并在清洁工作台（中国苏州市仕威科环境科技有限公司）中排放，然后在表面喷洒75%的酒精，并在酒精灯的外焰上撇去。为了确认鱼片是无菌的，样品在PCA中培养，以检测低于2.0 log cfu/g的总活菌数。
在接种鱼类之前，将菌株AS7接种在10 mL TSB中，并在28°C下以160 rpm的速度摇晃过夜。然后，将培养物以10000 rpm的速度离心10 min，清洗并重新悬浮在无菌的0.85%生理盐水中，以在600 nm（OD）下产生最终的光密度600)第页，共1.0页[20]. 添加外源性自体诱导物如下：C4–HSL、C6–HSL和C8–HSL分别为20μM。使用等体积的甲醇作为阴性对照。将无菌鱼片浸泡在细菌悬浮液中2s，然后在4°C下用无菌PVC袋包装。

3.结果和讨论

3.1. 细菌分离物的鉴定

经过几次连续的条纹处理，获得了一个纯菌株AS7。物理上，菌株AS7菌落呈圆形，表面湿润，隆起，透明，边缘整齐，小菌落，革兰氏阴性。使用Vitek-2 Compact系统（bioMerieux，Marcy l’Etoile，法国）鉴定了菌株AS7，该系统与索氏气单胞菌详细描述了菌株AS7的生理生化特性(表1). 利用16S rRNA基因核苷酸分析对菌株AS7进行了验证，并基于GenBank数据库和MEGA上16S rRNA的系统发育分析进行了进一步研究(图1)，其中进化历史是使用邻接法推导出来的[29]. 在bootstrap测试（1000个重复）中，相关分类群聚在一起的重复树的百分比显示在分支旁边[30]. 使用最大复合似然法计算进化距离[31]和以每个站点的基础替换数量为单位。我们的系统发育分析结果表明，菌株AS7属于索氏气单胞菌.

3.2. AHL检测

AHL生产商索布里亚亚种菌株AS7通过使用答：。 块菌属A136和紫锥菊CV026。答：。 块菌属A136携带带有P的质粒traI-lac公司Z融合并通过降解X-Gal以响应长链AHL产生蓝色[12,32]. 的CviR紫锥菊CV026调节短链AHL诱导的紫罗兰素生成[12,33]. 菌株AS7通过在答：。 块菌属A136和C.堇菜属CV026分别表明短链和长链AHL均由AS7产生(图2).

3.3. 短链AHL生产动力学

短链AHL的产生是通过使用紫锥菊CV026作为监测菌株，并且通过测量诱导区的直径来估计上清液中短链AHL的浓度。菌株AS7在12～44小时内分泌AHL的能力较强，在此期间AHL的浓度处于较高水平(图3a） ●●●●。在应变AS7的对数阶段（4–16 h），浓度与短链AHLs信号分子的含量同步快速增加(图3b） ●●●●。然后，进入固定相，短链AHL含量保持较高水平，信号分子浓度在32 h达到最高水平，与细菌密度相一致。随着孵育时间的延长，短链AHL的产量在初始增加后呈下降趋势，并呈密度依赖性。这可能是细菌开始进入衰退期。

3.4. 不同条件对AS7菌株生产短链AHL的影响

图3c显示了菌株AS7在不同氯化钠含量下产生AHL的结果。总的来说，结果显示了人口水平和AHL产量之间的显著关系(图3d） ●●●●。我们的数据与之前关于AHL QS系统的报告一致气单胞菌属特殊目的地[34]. 在4%（w/v）NaCl下，AHL的浓度与其他浓度相比显著下降，这与菌落数低有关。当NaCl浓度为5%时，菌株AS7不能生长。这可能是因为高浓度的NaCl抑制了菌株AS7的生长。然而，在低浓度（0.5%–2%）下，AHL的产生处于较高水平，没有明显变化。信号分子的产生在1%NaCl时达到最大值。这可能是因为盐度控制了AHL的产生。贾希德[8]据报道，盐度会影响C4–HSL，C6–HSL，以及生物膜、外蛋白酶和运动性A.嗜水癖与地表水隔离。麦地那-马丁内斯[34]据报道，3%氯化钠完全抑制了A.嗜水癖从食品样品中分离出来，这与我们的结果一致。
不同碳源对菌株AS7产生短链AHL的影响如所示图3e.结果表明，菌株AS7的浓度与信号分子的产生之间存在显著关系(图3f） 。碳源对AS7菌株分泌AHL的影响能力为：蔗糖>麦芽糖>葡萄糖>乳糖>果糖>木糖。蔗糖是AS7菌株生长的最佳碳源，木糖不利于AHL的产生。弗洛德加德[35]据报道，3-氧代-C无影响6–HSL分泌变形链球菌通过改变碳源。然而，不同物种的生长环境是不同的。菌株AS7不能充分利用木糖来增加密度，进而影响AHL的分泌，这与我们的结果一致，即菌株AS7可以利用蔗糖、麦芽糖和葡萄糖，但木糖为阴性(表1).
关于不同pH值下AHL的产生，AHL分泌与总活菌数相关(图3g、 h）。在pH值为8时，AHLs的浓度处于最高水平；在pH值为4时，菌株AS7不能存活。酸性条件（pH5和6）和中性环境对AHL的产生无显著影响。酸性条件低于中性环境，pH值越低，AHL的生成越低。这可能是因为不利的环境条件（弱酸条件）无法导致AS7的有效生长，而在pH值为9时，信号分子急剧下降。我们的数据与之前的研究一致，AHL在碱性条件下不稳定[35,36].

3.5. 细菌培养物提取物中AHL的GC-MS分析

使用GC-MS方法进一步验证AHL的生产。所有AHL的特征是高丝氨酸内酯部分和脂肪酰基，其成员具有不同的长度，从4到14个碳。AHL标准的片段列于表2.离子位于米/z（z）143被选为检测提取样本的显著片段[37]. 同时，检测了AHL的标准混合物和C的保留时间4–HSL、C6–HSL、C8–HSL、C10–HSL、C12–HSL和C14–HSL分别为4.172分钟、5.956分钟、7.942分钟、10.239分钟、12.836分钟和16.044分钟(图4a） ●●●●。根据保留时间和突出碎片(米/秒143），C4–HSL、C6–HSL、C8–HSL、C10–HSL和C12–提取的样品中存在HSL(图4b） ●●●●。AHL的检测，特别是C6–HSL与报告的研究一致，作为AHL QS气单胞菌属显著产生C的物种6–高铁[38]. 加泰罗迪[37]证明了嗜水气单胞菌和沙门氏气单胞菌合成C8–HSL、C12–HSL、C14–HSL和C8–HSL、C10–HSL，C12–HSL、C14–HSL分别作为主要AHL。我们的结果表明，菌株AS7可以产生五种类型的AHL，其中C8–HSL和C10–HSL尤其是主要AHL。尽管气单胞菌属spp.，例如，嗜水气单胞菌和沙门氏气单胞菌，被广泛研究索氏气单胞菌首先进行了详细报道。

3.6. QS对AS7中副产物分泌的调节

在CAS镀层上测试了铁载体的生成水平。铁营养盐是微生物分泌的一种与铁相关的小分子，用于清除铁[39]. 铁载体去除铁后，CAS络合物铁和十六烷基三甲基铵（HDTMA）的颜色由蓝色变为橙色。测量橙色晕的直径以确定产生的铁载体的相对数量[40]. 铁是大多数微生物生长所必需的，用于细菌呼吸（如电子穿梭器）和氧化还原酶。由于铁的高氧化能力3+，铁主要结合在环境中以及哺乳动物和植物中的不溶性复合物中。因此，大多数微生物已经开发出高度特异的铁螯合系统，并且它们经常产生铁载体，铁载体是细胞分泌的铁螯合剂。所有兼性厌氧和好氧细菌的生长都需要铁。为了竞争，一些细菌在铁离子释放条件下产生铁载体。铁载体的产生有助于细菌保持较高的密度，并具有群体效益。如所示图5a、 C类6–HSL对铁载体的含量没有显著影响。然而，C8–HSL显著增加了铁载体的产量(图5b） 同时，铁载体的产生与C的添加量有明显的相关性8–高铁(第页< 0.01) (图5c） ●●●●。C类8–HSL可以调节铁载体的产生，并在菌株AS7中呈现正相关。这些结果与我们之前关于AS7菌株AHL的研究一致，这表明C8–提取样品中HSL最大。

3.7. QS对腐败过程的影响

总活菌数水平和TVB-N值是评价鱼类腐败过程的重要质量参数。如所示图6a、 b，外源C4–HSL和C8–HSL显著刺激了TVB-N的生产(第页<0.01），而外源C没有显著影响6–观察到HSL(第页> 0.05). 总活菌数与TVB-N结果相似。外源C6–HSL对鱼片腐败没有显著影响(第页> 0.05). 布鲁恩[41]据报道，AHL不会影响真空包装肉的腐败。AHL的特异性信号分子可能不是调节的关键因素，例如C6–AS7菌株的HSL，而C4–HSL和C8–HSL提高了鱼类相关细菌的体外总活菌数。C类4–HSL和C8–HSL调节蛋白酶的分泌[15]蛋白质被蛋白酶迅速分解，产生腐败气味。张[42]据报道，外源性AHL和QSI的加入降低了萨拉蒂亚A2和气单胞菌属B1和外源AHL增强了气单胞菌属之前曾报道过QS信号分子对食品腐败生长动力学的影响。克里斯滕森[43]报告说N个-（β-酮己酰基）-我-高丝氨酸内酯调节蛋白酶的产生。C的不同影响4–HSL、C6–HSL和C8–关于TVB-N产量和总活菌数的HSL与菌株AS7生长的HSL一致，这证实了QS在大菱鲆腐败中的关键作用。

4.结论

总之，索布里亚亚种菌株AS7表现出QS活性，产生C4–HSL、C6–HSL、C8–HSL、C10–HSL和C12–根据GC-MS分析的HSL。同时，目前在我们实验室进行了AHL生产动力学研究。研究了不同pH值、NaCl浓度和碳源对AHL生成的影响。AS7产铁菌可以螯合环境中的铁，建立低铁环境，抑制其他微生物的生长，使其成为特定的腐败菌（SSO），加速腐败。QS参与了大菱鲆的腐败。我们未来的研究将集中于因环境变化而产生的AHL数量，食品中的实际环境应负责刺激和抑制AHL的产生。食品行业使用反QS策略控制食品腐败可能具有重要意义。

致谢

本研究得到了国家自然科学基金（31471639号，31301572号）、中国博士后科学基金（2014M552302号）和重庆市博士后专项基金（Xm2014041号）的资助，高等教育博士点优先领域专项研究基金（20113326130001）。

作者贡献

李婷婷和李建荣构思并设计了实验；李婷婷进行了实验；李婷婷和崔方超分析了数据；白凤玲和赵国华贡献了试剂/材料/分析工具；李婷婷和崔方超写了这篇论文。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

缩写

本手稿中使用了以下缩写：
APPA公司丙氨酸-脯氨酸-丙烯酰胺酶
硫化氢H2S生产
BGLU公司β-葡糖苷酶
ProA公司我-脯氨酸芳酰胺酶
囊糖/蔗糖
ILATk公司我-乳酸盐碱化
血型糖蛋白甘氨酸芳酰胺酶
O129R型O/129电阻（补偿振动）
ADO公司ADONITOL公司
英国国家航空公司测试版-N个-乙酰葡糖苷酶
dMAL公司d日-麦芽糖
LIP公司脂肪酶
数据标签d日-塔加托斯
AGLU公司α-葡聚糖酶
ODC公司鸟氨酸脱羧酶
GGAA公司谷氨酸-淀粉酶
吡咯烷酮我-吡咯酰芳酰胺酶
AGLTp公司谷氨酰芳酰胺酶pNA
数字城域网d日-甘露醇
PLE公司帕拉蒂诺斯
数字TREd日-特雷哈洛斯
SUCT（吸入）琥珀酸盐碱化
最不发达国家赖氨酸脱羧酶
IMLTa公司我-MALATE同化
IARL公司我-阿拉伯糖醇
dGLU公司d日-葡萄糖
dMNE公司d日-MANNOSE公司
TyrA公司酪氨酸芳酰胺酶
CIT公司柠檬酸盐（钠）
NAGA公司贝塔（Beta）-N个-乙酰半乳糖苷酶
IHISa公司我-组氨酸同化
ELLM公司埃尔曼
dCEL公司d日-细胞生物学
GGT公司γ-谷氨酰胺转移酶
BXYL公司β-羟糖苷酶
乌拉圭尿素酶
MNT公司马龙酸盐
AGAL公司α-半乳糖苷酶
CMT公司双体船
ILATa公司我-LACTATE同化
BGAL公司β-半乳糖苷酶
关闭发酵/葡萄糖
BAIap公司β-丙氨酸芳酰胺酶pNA
dSOR公司d日-山梨醇
5公斤5-酮-d日-葡萄糖酸盐
电话磷酸酶
BGUR公司β-葡萄糖醛酸酶

工具书类

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传感器16 01083 g001 1024
图1。菌株AS7和其他菌株的系统发育关系Aeromona公司.
图1。菌株AS7和其他菌株的系统发育关系Aeromona公司.
传感器16 01083 g001
传感器16 01083 g002 1024
图2。生产短链的条纹分析(N个-试验菌株中的酰基高丝氨酸内酯（AHL）（使用紫丁香CV026和答：。 块菌属A136与C交叉平行条纹4–HSL（C4-高丝氨酸内酯）和C6–HSL分别作为阳性对照。阴性对照是监测菌株本身。）。
图2。生产短链的条纹分析(N个-试验菌株中的酰基高丝氨酸内酯（AHL）（使用紫锥菊CV026和答：。 块菌属A136与C交叉平行条纹4–HSL（C4-高丝氨酸内酯）和C6–HSL分别作为阳性对照。阴性对照为监测菌株本身。）。
传感器16 01083 g002
传感器16 01083 g003a 1024传感器16 01083 g003b 1024传感器16 01083 g003c 1024
图3。AS7菌株不同培养时间下生长动力学与短链AHL分泌的关系及不同条件对AS7产生短链AHLs的影响(一)：琼脂扩散试验检测不同培养时间下AHL的分泌；(b条)：动力学与AHL之间的关系图；(c（c）,d日)：NaCl浓度0：空白对照，1:NaCl 0.5%，2:NaCl 0.7%，3:NaCl 1%，4:NaCl 2%，5:NaCl 3%，6:NaCl 4%；(电子,（f）)碳源0：空白对照，1：葡萄糖，2：蔗糖，3：果糖，4：木糖，5：乳糖，6：麦芽糖；(克,小时)：0：空白对照，1:pH 5，2:pH 6，3:pH 7，4:pH 8，5:pH 9。
图3。AS7菌株不同培养时间下生长动力学与短链AHL分泌的关系及不同条件对AS7产生短链AHLs的影响(一)：琼脂扩散试验检测不同培养时间下AHL的分泌；(b条)：动力学与AHL之间的关系图；(c（c）,d日)：NaCl浓度0：空白对照，1:NaCl 0.5%，2:NaCl 0.7%，3:NaCl 1%，4:NaCl 2%，5:NaCl 3%，6:NaCl 4%；(电子,（f）)碳源0：空白对照，1：葡萄糖，2：蔗糖，3：果糖，4：木糖，5：乳糖，6：麦芽糖；(克,小时)：0：空白对照，1:pH5，2:pH6，3:pH7，4:pH8，5:pH9。
传感器16 01083 g003a传感器16 01083 g003b传感器16 01083 g003c
传感器16 01083 g004 1024
图4。SIM模式下的GC-MS色谱图米/秒143个AHL标准混合物(一)和AS7的无细胞上清液提取物(b条).
图4。SIM模式下的GC-MS色谱图米/秒143个AHL标准混合物(一)和AS7的无细胞上清液提取物(b条).
传感器16 01083 g004
传感器16 01083 g005 1024
图5。外源性自体诱导物对AS7铁载体形成的影响(c（c）)—(一): (2)，10μM C6–HSL；(三)，20μM C6–HSL；(4)，40微米C6–HSL和(b条): (6)，10μM C8–HSL；(7)，20μM C8–HSL；(8)，40微米C8–HSL。(1)和(5)作为对照。数据表示为平均值±标准偏差(n个= 3; *第页< 0.05; **第页< 0.01).
图5。外源性自身诱导剂对AS7铁载体形成的影响(c（c）)—(一): (2)，10μM C6–HSL；(三)，20μM C6–HSL；(4)，40微米C6–HSL和(b条): (6)，10μM C8–HSL；(7)，20μM C8–HSL；(8)，40微米C8–HSL。(1)和(5)作为对照。数据表示为平均值±标准偏差(n个= 3; *第页< 0.05; **第页< 0.01).
传感器16 01083 g005
传感器16 01083 g006 1024
图6。C的影响4–HSL（20μM），C6–HSL（20μM）和C8–HSL（20μM）开启(一)微生物计数；和(b条)储存在4°C下的大菱鲆块中的TVB-N生产。数据表示为平均值±标准偏差(n个= 6; *第页< 0.05; **第页< 0.01).
图6。C的影响4–HSL（20μM），C6–HSL（20μM）和C8–HSL（20μM）开启(一)微生物计数；和(b条)储存在4°C下的大菱鲆块中的TVB-N生产。数据表示为平均值±标准偏差(n个= 6; *第页< 0.05; **第页< 0.01).
传感器16 01083 g006
表
表1。AS7菌株的生理生化特性。
表1。AS7菌株的生理生化特性。
项目表型项目表型项目表型
APPA公司+吡咯烷酮−dCEL公司−
小时2S公司−AGLTp公司−GGT公司−
BGLU公司−数字城域网+BXYL公司−
ProA公司−PLE公司−乌拉圭−
囊+dTRE公司+MNT公司−
ILATk公司−SUCT（吸入）+AGAL公司−
血型糖蛋白−最不发达国家−CMT公司+
O129R型+IMLTa公司+ILATa公司−
ADO公司−IARL公司−BGAL公司+
英国国家航空公司+dGLU公司+关闭+
dMAL公司+dMNE公司+BAIap公司−
LIP公司−蒂拉+dSOR公司−
数据标签−CIT公司−5公斤−
AGLU公司−NAGA公司−电话−
ODC公司−IHISa公司−BGUR公司−
GGAA公司+ELLM公司+
注：“+”表示正极，“−”表示负极。
表
表2。六种AHL的SIM参数。
表2。六种AHL的SIM参数。
AHL公司片段保持时间/分钟
C类4–高铁32,43.1,57.1,71.1,83,102.1,125.1,143,153.1,171.14.172
C类6–高铁32,43.1,56.1,71.1,83,99.1,102.1,125,143.1,156.15.956
C类8–HSL公司32,43.1,57.1,69.1,83.1,102.1,125.1,143.1,156.1,2077.942
C类10–高铁32,43.1,57.1,69,83.1,102.1,125,143,156.1,20710.239
C类12–高铁32,43.1,57.1,71.1,83,102.1,125.1,143,156.1,20712.836
C类14–高铁32,43.1,57.1,69,83.1,102.1,125.1,143,157.116.044

分享和引用

MDPI和ACS样式

李·T。；崔，F。；Bai，F。；赵，G。；李，J。乙酰化高丝氨酸内酯（AHL）的参与索氏气单胞菌冷藏多宝鱼的腐败(大菱鲆L.）。传感器 2016,16, 1083.https://doi.org/10.3390/s16071083

AMA风格

李T，崔F，白F，赵G，李杰。乙酰化高丝氨酸内酯（AHL）的参与索氏气单胞菌冷藏多宝鱼的损耗(大菱鲆L.）。传感器. 2016; 16(7):1083.https://doi.org/10.3390/s16071083

芝加哥/图拉比安风格

李婷婷、崔方超、白凤龄、赵国华和李建荣。2016.“乙酰化高丝氨酸内酯（AHL）的参与索氏气单胞菌冷藏多宝鱼的腐败(大菱鲆L.）“传感器16号，编号：1083。https://doi.org/10.3390/s16071083

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