杂志的下一篇文章
Caveolin-1在背纹状体中的表达驱动甲基苯丙胺成瘾样行为
下一篇特刊文章
抑制谷氨酸释放，但不抑制谷氨酸再循环生成谷氨酸，这与非惊厥性MSO剂量延缓锂-木犀草素诱导的幼鼠癫痫发作有关
期刊上的上一篇文章
中枢性腺机能减退的机制
特刊上一篇文章
锌转运蛋白在神经组织细胞中的表达分析揭示了ZIP4的神经元和突触定位
 
 
搜索用于文章以下为：
标题/关键字
作者/附属机构/电子邮件
日记账
文章类型
 
 
高级搜索
 
章节
特别发行
体积
问题
编号
第页
 
期刊销售
IJMS公司
第22卷
第15版
10.3390/ijms22158218
ijms-标志
提交到此日志 本期刊的评论 提出特殊问题
► 文章菜单

文章菜单

分享 份额 公告 帮助 format_quote格式 引用 问题_答案 在SciProfiles中讨论 竖起拇指（_U）
...
背书 短信
...
注释
第一页（_P）
设置
订购文章重印
字体类型：
宋体 佐治亚州 宋体，Verdana
字体大小：
澳大利亚 澳大利亚 澳大利亚
行距：
列宽：
背景：
第条

早期热性惊厥对幼年大鼠海马突触可塑性的影响

通过
塔蒂亚娜·波斯特尼科娃（Tatyana Y.Postnikova）
,
亚历山德拉·V·格里弗卢克
,
德米特里·阿马金
,
安娜·A·科瓦伦科
,
埃琳娜·索博列娃
,
奥尔加·E.祖巴雷瓦
和
阿列克西·V·扎伊采夫
*
俄罗斯圣彼得堡托雷扎大道44号RAS塞奇诺夫进化生理和生物化学研究所，194223
*
信件应寄给的作者。
国际分子科学杂志。 2021,22(15), 8218;https://doi.org/10.3390/ijms22158218
收到的提交文件：2021年6月18日/修订日期：2021年7月27日/接受日期：2021年7月28日/发布日期：2021年7月30日
（本文属于特刊健康和疾病中中枢神经系统（CNS）突触可塑性和神经传递的非遗传修饰物)
浏览地物
版本注释

摘要

以下为：
早期的热性惊厥（FSs）是晚期神经系统疾病和认知功能障碍的重要危险因素。然而，关于FSs对发育中大脑影响的现有数据是相互矛盾的。我们旨在研究出生后第10天暴露于高温诱导癫痫发作的幼年大鼠海马的形态和功能变化。我们发现FSs导致了轻微的形态紊乱。CA1和门的细胞数量减少了10%，但CA3或齿状回区域的细胞数量没有减少。相反，功能性损伤很严重。CA3-CA1突触中的长时程增强（LTP）显著降低，这归因于N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）活性不足。使用全细胞记录，我们发现FS组NMDAR电流脱敏程度较高。由于NMDAR的脱敏取决于亚单位组成，我们分析了NMDAR电流衰减和亚单位的基因表达，这表明对照组和FS组大鼠之间没有差异。我们认为，脱敏增加是由于NMDAR的甘氨酸位点激活不足，因为应用甘氨酸位点激动剂D-丝氨酸可以将LTP恢复到控制值。我们的结果揭示了FS影响大脑发育的一种新的分子机制。

1.简介

发烧的传染病可引发热性癫痫（FSs）[1,2]这是3个月至5岁儿童最常见的神经系统疾病之一[三]. FSs分为简单FSs（持续时间<10–15分钟）和复杂FSs（持久时间>15分钟）[4,5]. 这种分类目前被认为具有预测价值。在绝大多数情况下，简单的FSs是良性的，不会对儿童的发展产生不利的长期影响[6]. 临床研究表明，早年经历过更长时间FSs的成年人在晚年经常表现出广泛的神经疾病[7,8,9]. 对成人颞叶癫痫患者的回顾性分析表明，儿童早期存在长期FSs病史的高患病率（30-50%）[5]. 与早期生活中的许多其他负面因素一样，FSs也会导致认知功能的长期改变，尤其是学习和记忆[10,11,12,13,14].
为了研究FSs对发育中的大脑影响的潜在机制，建立了一种高温诱导新生大鼠癫痫发作模型[7,15,16]. 癫痫发作强烈影响谷氨酸能传播[17,18]. 由于谷氨酸能传播与学习和记忆密切相关，因此早期癫痫发作导致认知障碍也就不足为奇了。
结果表明，长时间的实验性FSs可诱导短暂的海马神经元损伤[19,20]导致海马神经元特性的长期改变，对海马神经网络的兴奋性产生深远影响[21]. 这些和其他变化增强了大鼠一生中对进一步边缘区癫痫发作的敏感性[22]并在35%的动物生命后期诱发反复、自发的癫痫发作[23].
一些研究描述了FSs对突触可塑性影响的实验数据，但这些数据相互矛盾。Chang等人（2005年）发现，重复的FSs导致海马CA1区突触可塑性的长期双向调节，特别是长期增强（LTP）的减弱和长期突触抑制（LTD）的促进[24]. 然而，Notenboom等人（2010年）证明，P10 FSs后，P44大鼠的LTP增加，LTD降低[25].
啮齿类动物的突触可塑性和认知功能的长期损害也在其他诱发新生儿癫痫模型中观察到[26,27,28,29,30,31,32]. 例如，在P10缺氧诱导的新生儿癫痫模型中，在癫痫发作后立即观察到LTP的增加[33]. 癫痫发作后48–72小时记录LTP的衰减，这在成年大鼠中持续存在（P60）[34]. 然而，导致早期癫痫发作后海马可塑性改变的确切机制仍不清楚。
在本研究中，我们旨在研究暴露于FSs的幼年大鼠海马的形态和功能变化，以更好地了解可塑性损伤的机制。实验中只包括FSs持续时间至少15分钟的动物。研究在FSs后11天进行。

2.结果

2.1. 热性惊厥导致海马CA1区和海马门神经元数量减少

FSs是否诱导神经细胞死亡仍存在争议。前瞻性和回顾性临床研究表明，持续的FSs可能导致神经元死亡和颞叶内侧硬化[5,7,8,11,35]. 动物研究表明，早期实验性FSs可能导致海马神经元持续功能障碍，而不会导致细胞死亡[19,20].
使用尼塞尔染色(图1)我们计算了海马CA1和CA3区锥体层、DG门和颗粒细胞层的神经元数量。我们检测到CA1细胞数量下降（对照组N=8大鼠每100μm 51.2±1.0个细胞，FS后为46.8±1.0个/100μm，N=8个大鼠；t吨-测试=3.07，第页<0.01）和肝门（对照组为40.9±1.1个细胞，FS后为36.6±1.1个；t=2.72，第页< 0.05). CA3中的神经元数量没有显著变化（对照组为30.4±0.9个细胞，FS后为29.1±0.9细胞；t=1.05，第页=0.31）和DG（对照组68.6±1.1个细胞；FS后66.1±1.4个细胞；t=1.44，第页= 0.17).
因此，我们证明FS导致某些海马区的细胞数量减少10%。CA1和肝门是最容易感染FSs的区域，而CA3和DG中的细胞数量没有明显变化。因为海马体的信息处理是由区域内和区域间的兴奋性突触联系决定的；海马不同区域神经元数量比例的变化会导致海马的某些功能紊乱。

2.2. FS后CA3-CA1突触神经传递的有效性降低

接下来，我们研究了在FS之后，CA3-CA1锥体神经元突触的突触神经传递效率是否发生变化。使用钨双极电极在CA2/CA1边界对来自CA3区的传入纤维进行电刺激。我们在25至300毫安的强度范围内施加电流，并测量突触前FV的振幅，这表明了激发动作电位和fEPSP的CA3轴突的数量，显示了CA1神经元发生的整体兴奋性突触后反应。
首先我们比较了对照组（N=12只动物，n个=27片）和FS动物（N=23只大鼠，n个=53片）；各组之间没有发现差异（重复测量ANOVA F11858个= 0.50;第页= 0.90,图2a） ●●●●。相反，FS（F11,836= 8.7;第页<0.001，对照组：n个=26，FS：n个= 52;图2b） ，提示突触前纤维具有较高的兴奋性。
接下来，我们比较了对照组和FS组fEPSP和FV振幅之间的神经元输入-输出（I/O）关系。这种曲线中的最大I/O斜率被视为突触强度度量[36]. 我们通过用sigmoid Gompertz函数拟合实验数据来确定每个切片的最大I/O斜率(图2c） 并注意到FS后大鼠的平均斜率降低了25%(t吨-试验：t=2.30；第页< 0.05; 控制：n个=22，FS：n个= 49;图2d） ●●●●。这些数据表明，FS后CA3–CA1的突触神经传递效率降低。

2.3. 出生后早期肿瘤发生中FS大鼠海马神经元短期突触可塑性无变化

突触传递效率的中断可能是由于突触前机制的干扰。作为第一种近似，介质释放概率的变化可以通过短期突触可塑性特性的变化来确定[37]. 我们使用配对脉冲刺激来研究短期突触可塑性的可能变化，并比较对照组动物（N=7只大鼠，n个=12片）和实验（N=9，n个=15）组。图3显示了30 ms和80 ms刺激间隔下成对fEPSP的示例，以及说明成对振幅比对刺激间隔值依赖性的曲线。重复测量方差分析显示FS（F1,336= 0.20;第页=0.66）或因素的相互作用（刺激间隔时间×FS；F14,336= 0.26;第页=0.99）。
因此，对照组和实验组之间短期可塑性没有差异，这表明FS后CA1区神经递质释放的概率没有改变。

2.4. 热惊厥对大鼠海马长期突触可塑性和突触传递的影响

接下来，我们研究了FSs后海马CA3–CA1突触的LTP特性是否发生变化。我们应用了两种LTP诱导方案：θ突发刺激（TBS）和高频刺激（HFS）。两种方案对FS组LTP诱导的效果都较差(图4). 根据双向方差分析，FSs显著降低LTP（FS/对照，F1,44= 19.1,第页<0.001），无论使用何种协议（协议类型×FS/控制，F1,44= 0.001,第页= 0.98). TBS方案在对照组（N=6只大鼠，n个=9片），而FS组仅为1.21±0.06（N=8，n个=18）、HFS原球茎-1.61±0.08（N=7，n个=9）和1.27±0.07（N=6，n个=12）。
因此，FS后幼年大鼠CA1海马区LTP显著减弱。
CA3–CA1突触的LTP被认为依赖于NMDAR的激活[38,39]. 为了评估NMDAR依赖性可塑性机制的维持，我们应用了非竞争性拮抗剂MK-801（10μM）。在对照组中，MK-801应用几乎完全阻止了两种TBS诱导LTP(图5a、 c；1.15 ± 0.06; N=6只大鼠，n个=10片）和HFS协议(图5b、 d；1.07 ± 0.06; N=8只大鼠，n个=9片）。在实验组中，MK-801的作用相似。在MK-801存在的情况下，未诱导明显的LTP（TBS:1.08±0.07；N=5，n个= 7; HFS:1.12±0.08；N=9，n个= 10). 因此，我们的结果证实，在对照和FS动物中，LTP诱导是NMDAR依赖的过程。
突触可塑性特性取决于NMDAR的亚基组成[40]. 为了评估含GluN2B的NMDAR的影响，我们使用了它们的选择性拮抗剂ifenprodil（3μM）。我们发现，在TBS方案中，ifenprodil显著影响突触可塑性(图6a、 c；双向方差分析，ifenprodil（+/-）：F1,43个= 8.0,第页<0.01）和HFS协议(图6b、 d；如果1,36= 13,第页< 0.001). 对照组和实验组（TBS方案：组（对照/FS）×ifenprodil（+/-），F1,43= 2.3,第页= 0.13; HFS协议：F1,36个= 0.74,第页= 0.39). 在对照动物中，ifenprodil使LTP的幅度降低了近两倍（TBS:1.24±0.04；N=9只大鼠，n个=14片；图6a、 c；HFS:1.24±0.05；N=6，n个= 7;图6b、 d）。在实验大鼠中，无论采用何种方案，LTP的生成均被阻断（TBS:1.11±0.08，N=6，n个= 6;图6a、 c；HFS:1.08±0.08；N=7，n个= 10;图6b、 d）。
因此，含有GluN2B的NMDAR参与了对照和实验动物LTP的诱导。FS大鼠LTP的完全阻断可能是因为含GluN2B受体在NMDAR中占主导地位。另一种可能性是，ifenprodil进一步阻断最初通过NMDAR的较低电流。为了确定这些原因中哪一个更可行，我们检测了不同谷氨酸受体亚单位的表达。

2.5. FS后NMDAR和AMPAR亚单位基因的相对表达不变

我们比较了NMDAR的表达(格林1,格林2a,格林2b)和AMPAR(格栅1,格栅2)P21三组大鼠海马背区亚单位基因。除了对照组和FS组外，本研究还使用了一组完整的动物。谷氨酸受体亚基基因的mRNA表达没有变化；这个格林2b/格林2a表达率也没有改变(图7).
结果表明，NMDAR和AMPAR的亚单位组成在这种发热性癫痫模型中不太可能发生变化。专性亚基GluN1的表达值没有变化也表明NMDAR的总数很可能没有改变。因此，突触可塑性降低的可能原因可能是NMDAR的功能障碍。

2.6. 热性惊厥对TBS诱发NMDAR介导突触电流特性的影响

热性惊厥后LTP下降可能是由于NMDAR依赖性钙电流减弱所致。因此，我们使用全细胞膜片钳方法比较了NMDAR介导的TBS反应。在对照组和FS组大鼠中，在训练期间，反应幅度降低，但幅度不同(图8a、 b）。我们将EPSC的振幅归一化为第一个峰值的振幅，并进行混合模型方差分析。分析表明，在FS组中，NMDAR介导的电流峰值振幅在五个响应（F24,649= 4.05,第页< 0.001). 因此，在FS组中，NMDAR表现出更快的脱敏，并且在诱导方案中提供较少的钙进入突触后终末。反过来，这可能是LTP产量受损的原因。
由于NMDAR脱敏的动力学强烈依赖于其亚基组成[41]此外，我们还使用电生理方法测试了NMDAR的亚基组成在FS后是否发生了变化。NMDAR介导的eEPSC的衰变阶段取决于GluN2亚单位的类型，在锥体神经元中，它可以用具有快时间常数和慢时间常数的双指数函数拟合。之前，我们已经证明，含有GluN2B的NMDAR拮抗剂ifenprodil选择性地阻断具有慢时间常数的成分[42]. 我们研究了FS是否影响这些成分的相对贡献，以及TBS对对照组和FS大鼠快速和慢速成分的相对影响是否不同。
我们证实，在对照组和FS大鼠中，电流衰减由时间常数的两个指数函数拟合 τ （f） 一 秒 t吨 =65 ms和 τ 秒 我 o个 w个 =300毫秒(图8c） FS组和对照组对第一次反应的相对贡献没有差异。接下来，使用混合模型方差分析，我们发现在TBS（F4,109= 56.3,第页< 0.001). 尽管如此，FS（F1,109= 0.01,第页=0.9），并且未检测到响应数和FS之间的显著交互作用（F4,109= 0.6,第页=0.7）。对于快速衰减成分也发现了类似的结果（刺激数：F4,109= 3.5,第页= 0.011; 可行性研究：可行性研究1,109= 0.27,第页= 0.6; 刺激数×FS:F4,109= 0.23,第页= 0.9).
结合qRT-PCR数据，这些结果表明FSs不会影响NMDARs的亚基组成。

2.7. D-丝氨酸部分恢复FS-Rat中的LTP

NMDAR的激活需要谷氨酸和微摩尔浓度的协同激动剂甘氨酸或D-丝氨酸。谷氨酸与GluN2的结合通过负变构调节降低GluN1对甘氨酸/D-丝氨酸的亲和力；这导致在激动剂存在下通过NMDAR的离子电流逐渐减少。
NMDAR脱敏表现为亚摩尔甘氨酸，并随着甘氨酸浓度的升高而降低。这被称为甘氨酸依赖性脱敏[41,43,44]. 海马星形胶质细胞保持控制涉及钙的LTP的能力2+-依赖性D-丝氨酸释放[45]癫痫患者星形胶质细胞与神经元的关系受到干扰[46]. 最近，我们用锂-匹罗卡品颞叶癫痫模型显示，应用D-丝氨酸可以完全恢复大鼠海马LTP的初始阶段（5-15分钟）[47]. 因此，我们设计了下一组实验来评估D-丝氨酸（10μM）的应用效果。
我们发现D-丝氨酸对对照动物和FS大鼠突触可塑性的影响不同(图9)，当使用TBS协议时（双向方差分析，组（FS/对照）×D-丝氨酸（+/-），F1,37= 5.1,第页<0.01）和HFS（F1,39= 4.3,第页< 0.05). 在FS大鼠中，应用D-丝氨酸使LTP值恢复到对照值。在HFS方案中，D-丝氨酸的应用使LTP幅度从1.27±0.07增加（N=6只大鼠，n个=12片）至1.63±0.08（N=8只大鼠，n个= 16,第页<0.01）。我们的发现表明，FS后神经元-胶质细胞关系可能受损。

2.8. NMDAR对TBS的中介响应仿真

为了研究环境甘氨酸/D-丝氨酸浓度的降低是否会影响TBS期间NMDAR脱敏，我们实现了NMDAR动力学的数学模型(图10).
使用两种浓度的环境激动剂进行模拟：10µM和1µM。对于两种浓度的甘氨酸，TBS的实施诱导了NMDAR反应，这与实验中观察到的反应相似。每次突发都会导致开启状态概率的单一峰值，从而产生五个响应，每个响应都有五个峰值(图11). 当出现较高浓度的甘氨酸时，在五次爆发中的每一组中，个别峰值都会略有下降。在低浓度甘氨酸中，概率峰的振幅在训练期间表现出更大幅度的降低(图11)与TBS期间NMDAR电流的实验观察结果相当。因此，模拟表明，低浓度甘氨酸在TBS期间促进NMDAR的使用依赖性下调，与实验中观察到的类似。

3.讨论

大量证据表明，长期或反复的新生儿癫痫发作可导致后天癫痫和认知功能障碍[16,28,31,48,49]. 癫痫诱发癫痫和认知异常的确切机制尚不完全清楚，尽管人们认为兴奋性突触传递特性的改变有助于这一过程。由于儿童癫痫的高发病率，了解其对未成熟大脑的影响机制是最关键的任务之一。
这项研究使用了一个紧密复制长时间FSs的动物模型[三]; 为了实现这一点，我们监测了动物中FSs的持续时间，并且只包括癫痫发作持续15–20分钟的大鼠。本研究的主要发现是，P10的热性癫痫发作导致P21大鼠海马LTP诱导显著减弱。海马突触可塑性的减弱伴随着CA1区突触传递效率的减弱以及CA1区和门区神经元数量的轻微减少。我们认为FS大鼠的可塑性诱导减弱与NMDARs更明显的脱敏有关。脱敏增加可能是由于NMDAR的甘氨酸位点激活不足，因为甘氨酸位点协同激动剂D-丝氨酸的应用可以将突触可塑性恢复到控制值。
在本研究中，我们假设FS模型中谷氨酸能传递受损可能主要与AMPAR和NMDAR的特性中断有关，因为在各种新生儿癫痫模型中都显示出这种紊乱。例如，早期低氧诱导的癫痫发作导致CA1中AMPAR介导的信号增强，与受体磷酸化增加相关[50]. 新生儿缺氧-缺血后还观察到NMDAR亚基的酪氨酸磷酸化增强[51]. 在缺氧新生儿癫痫模型中，海马中GluN2A磷酸化增加[52]. 低氧诱导的癫痫发作也可能导致GluA2-lacking Ca的表达增强2+-海马中的可渗透性AMPA受体[31,53]. 在癫痫发生的早期阶段，最经常报告的干扰包括含有GluN2B的NMDARs的相对贡献增加，这在匹罗卡品和锂-匹罗卡平模型中显示[42,54,55]. 戊四唑诱导的点燃也得到了类似的结果[56].
FSs对谷氨酸系统的影响目前研究较少。早期频繁重复的FSs导致成年大鼠海马CA1区NMDA治疗后GluN2A亚基酪氨酸磷酸化选择性缺失[24]. Chen等人表明，在延长FSs后，GluN2B Tyr1472磷酸化逐渐增加，并在7天内保持高水平，而GluN2B总表达水平没有任何明显变化[57].
在本研究中，我们没有观察到AMPAR或NMDAR亚单位的mRNA表达水平有任何变化。尽管蛋白质和mRNA水平的受体亚单位表达水平可能不一致，但对照组和FS组中NMDAR介导的电流衰减相似，表明NMDAR的亚单位组成不受FS的影响。然而，FS组中NMDAR的功能活动发生了改变：与对照组相比，FS组的NMDAR表现出更快的脱敏。
NMDAR脱敏是由几个不同的并发过程引起的。NMDAR激活后，至少会发生两种不同类型的脱敏[41]. （1） 谷氨酸结合GluN2通过负变构调节降低GluN1对甘氨酸的亲和力；这导致在存在激动剂的情况下通过NMDAR的离子流逐渐减少[43]. 甘氨酸浓度的增加消除了这种影响[58]. （2） 钙依赖性脱敏是由于GluN1亚单位进入细胞后与细胞内钙结合而引起的[41]. 两种脱敏类型都取决于NMDAR亚单位的组成[41].
由于我们没有使用PCR分析检测到NMDAR亚单位组成的任何变化，我们认为这些变化可能与甘氨酸位点激动剂的可用性有关。以下数据支持这一假设。细胞外甘氨酸浓度随脑区和神经元活动而变化。在海马体中，甘氨酸的突触可用性主要受星形胶质细胞和突触后神经元中表达的甘氨酸转运蛋白1（GlyT1）的控制[59,60]. Shen等人（2015），使用两种不同的癫痫啮齿动物模型，证明了GlyT1在海马结构中的强烈过表达，表明癫痫中的甘氨酸信号传导功能失调[61]. 值得注意的是，颞叶癫痫患者海马甘氨酸受体表达的变化也有报道，表明癫痫中甘氨酸信号的失调[62]. 因此，我们可以假设FSs后有效甘氨酸的浓度降低，从而NMDRs的脱敏增加。在我们的实验中，添加甘氨酸位点激动剂D-丝氨酸可以恢复LTP，这一事实支持了这一假设。
NMDAR脱敏增强和突触可塑性受损的另一个可能原因可能是神经元-胶质细胞关系的紊乱。海马星形胶质细胞保持在其各自区域内或附近控制LTP的能力，包括Ca2+-依赖性D-丝氨酸释放[45]. 因此，星形胶质细胞可以调节局部D-丝氨酸供应，并可能能够将D-丝碱传递给特定的NMDAR人群，从而降低他们的脱敏。此前，我们发现应用D-丝氨酸可以完全恢复毛果芸香碱治疗大鼠海马脑片LTP的初始阶段[47]. 在这项研究中，D-丝氨酸的作用更为显著，这表明神经元-胶质细胞相互作用受损的假说有待进一步探讨。
实验诱导的FSs对星形胶质细胞间隙连接偶联产生强烈抑制[63]，可能影响FS后海马神经元的兴奋性，促进癫痫的发展[20,22]. 在重复的FS模型中，星形胶质细胞的长期激活[64]海马星形胶质细胞和颞叶新皮质出现明显的超微结构改变。颗粒内质网和线粒体的损伤是主要表现[65]导致一些细胞间生化事件的紊乱，例如异常的蛋白质合成或氧化磷酸化的抑制。
在本研究中，我们还证实了早期FSs不会导致显著的神经细胞死亡，支持了先前的研究，即未成熟海马对癫痫诱导的神经元死亡具有抵抗力[20,66]. 然而，本研究显示海马CA1区和门的锥体层有10%的神经元丢失，而CA3或DG没有。此外，受影响神经元的分布与之前的研究报告部分相似[19]其中，作者使用银染法，确定了海马CA1锥体层和所有CA3亚区神经元物理化学性质中最具破坏性、最显著和最持久的变化。
因此，我们的研究表明，早期FSs不会直接导致海马细胞死亡，但会导致谷氨酸能神经传递的多种功能紊乱，包括突触内可塑性的改变。这些障碍最终可能导致癫痫状态，并成为认知功能障碍的主要机制。

4.材料和方法

4.1. 动物和FS模型

所有实验均由塞奇诺夫进化生理学和生物化学研究所伦理委员会批准，并按照当地实验动物治疗指南进行。这些指南完全符合俄罗斯和国际动物研究标准。雌性Wistar大鼠及其窝鼠在室温下的标准条件下饲养，可以自由获得水和食物。只有10只幼崽被遗弃在窝里。在P10上诱导FS。幼犬被放置在一个10升的玻璃室底部。温度保持在46°C。动物直肠温度测量[67].
实验前，体温为31.1±0.1°C，癫痫发作开始时为39.8±0.1°C。癫痫发作后，每隔2分钟测量一次温度。如果温度升高到41°C以上，则将幼鼠移到凉爽的表面上2分钟，然后放回试验箱。将动物体温（39–41°C）维持25分钟。
该范式中的行为性癫痫是刻板的，包括热诱发的运动亢进的停止，随后是面部自动化，通常伴有身体屈曲，随后是肌阵挛抽搐和阵挛性癫痫。热疗后，将动物放在寒冷的表面上，直到核心温度恢复到正常范围，然后再放回笼子。热疗后，幼崽的体重变化不大（体重变化<3%），表明只有轻微的脱水症状。热疗和随后30分钟内的死亡率均低于1%。只有持续至少15分钟的FS动物被纳入研究（N=43）。
同时从笼子中取出用于对照的利特曼盐，但保持在室温下（N=42）。此外，使用一组完整的动物（N=5）来研究谷氨酸受体亚单位的表达。来自完整组的大鼠未接受任何治疗。

4.2. 脑切片准备

海马切片的制备如前所述[68]. 简单地说，在第21–23页，大鼠被斩首。大脑被迅速切除。使用振动棒HM 650 V（Microm，Walldorf，Germany）在冷冻人工脑脊液（ACSF；t=0°C）中切割水平脑切片（400μm），该脑脊液中通入碳（95%O）2和5%CO2). ACSF的成分（单位：mM）：126 NaCl、2.5 KCl、1.25 NaH2人事军官4，1 MgSO4，2氯化钙2，24氯化钠三，10葡萄糖。然后将切片在35°C下孵育1小时，然后在室温下放置。孵育后，将切片转移到记录室，在那里记录25-27°C下的现场反应。在记录室中，ACSF流速为5–7 mL/min。

4.3. 现场电位记录

用玻璃微电极（0.2–1.0 MΩ）从海马CA1放射层记录细胞外场兴奋性突触后电位（fEPSP）。用增加的振幅电流刺激每个切片（25至300μA，25μA步长），并测量每个fEPSP的振幅、20–80%的上升相位斜率和纤维束振幅（FVs）。如前所述，神经传递的功效是通过乙状结肠Gompertz功能测定的[36]. LTP实验的刺激电流幅度为电流强度的40-50%，导致种群峰值。通过A365刺激隔离器每20秒发送一次刺激（美国佛罗里达州萨拉索塔的世界精密仪器公司）。响应由1800型放大器（美国华盛顿州卡尔斯堡a-M系统公司）放大，然后使用ADC/DAC NI USB-6211（美国德克萨斯州奥斯汀国家仪器公司）使用WinWCP v5.x.x软件（英国格拉斯哥斯特拉斯克莱德大学）进行数字化。使用Clampfit 10.2软件（Axon Instruments，San Jose，CA，USA）对记录进行分析。
LTP诱导采用两种刺激方案。（1） TBS：五个脉冲的五次爆发，频率为100 Hz，爆发之间的间隔为200 ms。每10秒重复刺激5次。（2）HFS：每20秒施加3组100 Hz脉冲组成的序列。
LTP诱导前的20分钟基线期。刺激后60分钟内记录增强的fEPSP。通过计算增强的fEPSP的平均斜率（刺激后50–60分钟）和基线值（刺激前10分钟）的比率来量化LTP。MK-801（10μM）是一种非竞争性NMDAR拮抗剂，ifenprodil（3μM）则是一种GluN2B亚单位选择性NMDAR阻断剂，D-serine是NMDAR的联合激动剂，从Sigma（美国密苏里州圣路易斯）获得。这些药物在蒸馏水中稀释，然后在浴中使用。
配对脉冲比（PPR）计算为第二个到第一个fEPSP振幅比。

4.4. 全细胞配线架记录

使用Zeiss Axioskop 2显微镜（德国Oberkochen的Zeiss）对锥体神经元进行可视化，该显微镜配备有差分干涉对比光学系统和摄像机（Grasshopper 3 GS3-U3-23S6M-C；FLIR Integrated Imaging Solutions Inc.，美国俄勒冈州威尔逊维尔）。使用P-1000移液器（Sutter Instrument，Novato，CA，USA）从硼硅酸盐玻璃毛细管中拔出贴片电极（3-5 MΩ）。使用基于甲烷磺酸铯的移液管溶液（mM:127 CsMeSO3、10 NaCl、5 EGTA、10 HEPES、6 QX314、4 ATP-Mg和0.3 GTP的成分；用CsOH将pH调至7.25）进行电压灯记录。使用MultiClamp 700B（Molecular Devices，Sunnyvale，CA，USA）补丁灯放大器和NI USB-6343 a/D转换器（National Instruments，Austin，TX，USA，使用WinWCP 5软件（英国格拉斯哥斯特拉斯克莱德大学）进行全细胞录音。以10kHz对数据进行滤波，并以20kHz对数据进行采样。在包括在样品中的所有细胞中，接入电阻小于20MΩ，并且在整个实验期间保持稳定（≤20%的增加）。通过减去7 mV，对电压灯记录的液结电位进行离线补偿。将双极刺激电极放置在与场电位记录相同的区域。在加巴静（10µM，以色列耶路撒冷Alomone实验室）和DNQX（10μM，英国布里斯托尔Tocris Bioscience）存在下，NMDAR介导的eEPSC在+40 mV下被记录。
使用衰减阶段（90–10%）的非线性回归分析描述了TBS期间NMDAR介导电流的时间进程变化[42]. 我们使用了双指数函数：
我 t吨 ; A类 （f） 一 秒 t吨 , τ （f） 一 秒 t吨 , A类 秒 我 o个 w个 , τ 秒 我 o个 w个 = A类 （f） 一 秒 t吨 ∗ 经验 负极 t吨 τ （f） 一 秒 t吨 + A类 秒 我 o个 w个 ∗ 经验 负极 t吨 τ 秒 我 o个 w个
哪里 A类 （f） 一 秒 t吨 和 τ （f） 一 秒 t吨 是快速衰减分量的振幅和时间常数； A类 秒 我 o个 w个 和 τ 秒 我 o个 w个 是缓慢衰减分量的振幅和时间常数。
对于TBS诱导的五个NMDAR介导电流中的每一个，快衰减分量和慢衰减分量的相对份额计算如下：
对 e（电子） 我 。 秒 小时 一 第页 e（电子） （f） 一 秒 t吨 = A类 （f） 一 秒 t吨 A类 （f） 一 秒 t吨 1 + A类 秒 我 o个 w个 1
对 e（电子） 我 。 秒 小时 一 第页 e（电子） 秒 我 o个 w个 = A类 秒 我 o个 w个 A类 （f） 一 秒 t吨 1 + A类 秒 我 o个 w个 1
哪里 A类 （f） 一 秒 t吨 1 和 A类 秒 我 o个 w个 1 分别是五个响应中第一个响应的快衰减分量和慢衰减分量的振幅。

4.5. 定量PCR（qRT-PCR）

在第21页将大鼠斩首。大脑被迅速取出、冷冻，并在−80°C下储存，直到解剖。根据大鼠脑图谱，使用低温恒温器OTF5000（英国亨廷顿Bright Instrument）解剖背侧海马[69]. 按照制造商的方案，使用ExtractRNA试剂（俄罗斯莫斯科埃夫罗根）分离总RNA。使用NanoDrop™Lite（Thermo Fisher Scientific，Wilmington，DE，USA）分光光度法评估RNA浓度。
逆转录使用总RNA（2μg）、寡核苷酸引物和9聚体随机引物（分别为0.5μg/1μg RNA和0.25μg/1µg RNA）（俄罗斯莫斯科DNA合成有限公司）和MMLV逆转录酶（100个单位/10μg RNA；俄罗斯莫斯科Evrogen）。反应总体积为25µL。我们将引物和8µL RNA溶液混合，在70°C下培养10分钟，并快速冷却至4°C进行引物退火。然后，我们添加了包含逆转录酶的反应混合物，样品在42°C下培养1小时，在65°C下培育10分钟。在此步骤后，将所有样品稀释7倍。使用0.8µL cDNA、0.75单位TaqM-聚合酶（Alkor Bio，俄罗斯圣彼得堡）、3.5 mM Mg、2+、特异正向、反向引物和水解（TaqMan）探针（参见表1). 核苷酸由DNA合成有限公司（俄罗斯莫斯科）合成。PCR反应在C1000 Touch热循环器和CFX96 Touch™实时PCR检测系统（Bio-Rad，Hercules，CA，USA）中以三胞胎的形式进行，同时没有模板和反转录对照样品。的相对表达式格林1,格林2a,格林2b,格里亚1和格里亚2基因使用2计算-ΔΔCt方法[70]，根据的相对表达式进行规范化Ppia公司基因，在癫痫模型中是稳定的[71].

4.6. 组织学

在第21–23页，用舒泰/二甲苯嗪混合物（法国Virbac）对大鼠进行深度麻醉，然后用冰镇0.01M PBS（pH=7.4）和冰镇4%多聚甲醛（PFA）在0.1M PB（pH=7.4）中以10 mL/min的速率经心灌注处死大鼠。然后，取下大脑，将其固定在4%PFA中，温度为4°C，持续24小时。将大脑从PFA中冲洗出来，并在4°C的PBS中的30%蔗糖中冷冻保护2-3天。最后，将大脑冷冻在冷却（＜−50°C）的异戊烷（78-78-4，异戊烷溶液，Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA）中，并在−80°C下储存，直到切割。用Bright OTF5000低温恒温器（Bright Instrument Co Ltd.，英国亨廷顿）从尾部至角部2.6至3.6 mm切割20μm厚的冠状连续切片，并将其安装在带有粘合剂涂层Super Frost Plus（J1800AMNZ，英国拉夫堡Fisher Scientific UK Ltd.）的载玻片上。干燥一天后，将未染色的载玻片放入一系列溶液中进行尼塞尔染色。将切片在乙醇（EtOH）和氯仿（俄罗斯莫斯科Ekos-1）（1:1）的混合物中脱脂1–3 h，然后在浓度降低的EtOH-溶液中再水化（96%EtOH3步，70%EtOH2步，每步2分钟），然后在蒸馏水中漂洗2次（每次1分钟），然后在0.05%的硫蛋白溶液（pH 4.5）中放置5分钟。然后在蒸馏水中冲洗切片（2步，每个步骤1分钟），并在浓度增加的乙醇溶液中脱水。最后，在微清理中清理断面（意大利马丁内戈的迪帕斯；两步15分钟和20分钟），然后用VitroGel覆盖（俄罗斯莫斯科Ergo生产厂）。
使用Leica显微镜AF 7000（Leica Microsystems，Wetzlar，德国）在×400倍放大下分析Nissl染色切片。为了进行形态学分析，对每5个切片进行神经元计数（从一只大鼠海马体中得到8-10个切片）。分析截面之间的距离为100µm。使用ImageJ（美国国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达）对CA1、CA3、门和齿状回细胞层的数字显微照片中每100μm的神经元数量进行计数。

4.7. 仿真

由提出的NMDARs动力学模型[58]添加谷氨酸结合步骤，如[76]用于模拟TBS诱导NMDAR介导的电流。这个动力学方案(图1)包括两个谷氨酸结合步骤（R0和R1)，三个闭合状态（C三，C2,和C1)，两种脱敏状态（D1和D2)，两个打开状态（O1和O2)和两个甘氨酸结合步骤（CU型和CM（M）). TBS期间的突触输入被模拟为1mM谷氨酸的1ms脉冲（5组5脉冲，每100秒重复一次）。甘氨酸的浓度设置为恒定值。使用Wolfram Mathematica 12（Wolfram Research，Champaign，IL，USA）对相应的速率方程系统（十一个一阶微分方程，每个概率状态一个）进行了数值求解。由于NMDAR的两个开放状态具有相似的电导[58,77]，将宏观电流的时间历程计算为两个导电状态的解之和。

4.8. 统计分析

使用OriginPro 8（美国马萨诸塞州北安普敦的OriginLab Corporation）和SigmaPlot 12.5（美国加利福尼亚州帕洛阿尔托的Systat Software Inc.）对结果进行统计分析和图形表示。Dixon的Q检验（90%置信水平）用于识别和拒绝异常值。使用Kolmogorov–Smirnov检验评估样本数据的正态性。使用Levene中值检验评估方差的相等性。使用Student’st吨-测试和方差分析如文中所述。所有数据均表示为平均值±标准误差。第页<0.05被认为具有统计学意义。

作者贡献

数据管理，D.V.A。；形式分析、T.Y.P.、A.V.G.、D.V.A.、A.A.K.、E.B.S.和O.E.Z。；融资收购，A.V.Z。；调查、T.Y.P.、A.V.G.、A.A.K.和E.B.S。；方法、T.Y.P.、D.V.A.、A.A.K.、A.V.Z.和O.E.Z。；监督、T.Y.P.、O.E.Z.和A.V.Z。；验证、T.Y.P.和A.V.Z。；书面原稿、T.Y.P.、D.V.A.、A.A.K.、E.B.S.、O.E.Z.和A.V.Z。；Writing review and editing，T.Y.P.和A.V.Z.所有作者均已阅读并同意手稿的出版版本。

基金

这项工作得到了俄罗斯科学院谢谢诺夫进化生理学和生物化学研究所研究项目075-00408-21-00的支持。

机构审查委员会声明

该研究是根据欧盟动物实验指令2010/63/EU进行的，并得到俄罗斯科学院谢谢诺夫进化生理学和生物化学研究所伦理委员会的批准（伦理许可证编号13-k-a，2018年2月15日）。

数据可用性声明

本研究中提供的数据可向相应作者索取。

致谢

分子生物学实验是利用俄罗斯科学院谢谢诺夫进化生理学和生物化学研究所生理、生化和分子生物学研究资源中心的设施进行的。

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

工具书类

  1. Chiu，S.S。；谢志勇（Tse，C.Y.）。；Lau，Y.L。；Peiris，M.流感A型感染是引起发热性癫痫的重要原因。儿科 2001,108，E63。[谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  2. 弗朗西斯，J.R。；里士满，P。；罗宾斯，C。；Lindsay，K。；Levy，A。；埃夫勒，P.V。；博兰德，M。；Blyth，C.C.《发热性癫痫的观察研究：病毒感染和免疫的重要性》。BMC儿科。 2016,16, 202. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  3. 冯，B。；Chen，Z.热性惊厥的发生和继发性癫痫。神经科学。牛市。 2016,32, 481–492. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  4. Millichap，J.G.J。；Millichap，J.G.J.病毒感染在发热性癫痫病因中的作用。儿科。神经醇。 2006,35, 165–172. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  5. Mewasingh，L.D.公司。；R.F.M.钦。；Scott，R.C.对发热性癫痫发作及其长期预后的当前认识。儿童神经发育医学。 2020,62, 1245–1249. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  6. Knudsen，F.U.《热性惊厥：治疗和预后》。癫痫 2000,41, 2–9. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  7. C.M.杜贝。；拉维扎，T。；滨村，M。；查，Q。；基博，A。；Fok，K。；安德烈斯，A.L。；俄勒冈州纳西奥格鲁。；Oberaus，A。；Vezzani，A。；等。长期实验性热性惊厥引发的癫痫发生：机制和生物标记物。《神经科学杂志》。 2010,30, 7484–7494. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  8. Lewis，D.V。；Shinnar，S。；赫斯多佛特区。；Bagiella，大肠杆菌。；Bello，J.A。；Chan，S。；Xu，Y。；麦克福尔，J。；华盛顿州戈麦斯。；Moshé，S.L。；等。发热性癫痫持续状态后的海马硬化：FEBSTAT研究。安。神经。 2014,75, 178–185. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  9. Cendes，F.发热性癫痫和内侧颞叶硬化症。货币。操作。神经醇。 2004,17, 161–164. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  10. 阿维沙伊·埃利纳，S。；Brunson，K.L。；桑德曼，C.A。；巴拉姆，T.Z.压力过大，还是在（子宫内）？《神经科学趋势》。 2002,25, 518–524. [谷歌学者] [交叉参考]
  11. 基普，K.H。；Opitz，B。；贝克尔，M。；霍夫曼，J。；克里克，C。；Gortner，L。；Mecklinger，A.热性惊厥儿童识别记忆的神经相关性：来自功能磁共振成像的证据。前面。嗯，神经科学。 2012,6, 17. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  12. 基普，K.H。；Mecklinger，A。；贝克尔，M。；雷思，W。；Gortner，L.《婴儿热性惊厥：事件相关电位揭示的陈述性记忆变化》。临床。神经生理学。关J.国际联邦诊所。神经生理学。 2010,121, 2007–2016. [谷歌学者] [交叉参考]
  13. Martinos，M.M。；Pujar，S。；O’Reilly，H。；德哈恩，M。；B.G.R.内维尔。；斯科特，R.C。；Chin，R.F.M.儿童惊厥性癫痫持续状态10年内的智力和记忆结果。癫痫行为。 2019,95, 18–25. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  14. Martinos，M.M。；Yoong，M。；帕蒂尔，S。；W.K.Chong。；Mardari，R。；R.F.M.钦。；B.G.R.内维尔。；德哈恩，M。；Scott，R.C.，痉挛性癫痫持续状态儿童的早期发育结果：一项纵向研究。癫痫 2013,54, 1012–1019. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  15. 巴拉姆，T.Z。；Gerth，A。；Schultz，L.热性惊厥：适合长期研究的适当年龄模型。大脑研究开发大脑研究。 1997,98, 265–270. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  16. R.A.本德。；发育中大脑的癫痫发生：我们能从动物模型中学到什么？癫痫 2007,48（补充S5），2-6。[谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  17. Walker，M.C.癫痫持续状态的病理生理学。神经科学。莱特。 2018,667, 84–91. [谷歌学者] [交叉参考]
  18. Mihály，A.动物癫痫中海马离子型谷氨酸受体的反应可塑性。国际分子科学杂志。 2019,20, 1030. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  19. 托思，Z。；严，X.X。；Haftoglou，S。；里巴克，C.E。；Baram，T.Z.癫痫诱导的神经元损伤：幼年大鼠模型中的高热惊厥易感性。《神经科学杂志》。 1998,18, 4285–4294. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  20. R.A.本德。；杜贝，C。；Gonzalez-Vega，R。；米纳，E.W。；Baram，T.Z.在持续发热性癫痫动物模型中，苔藓纤维可塑性和海马兴奋性增强，而海马细胞没有丢失或神经发生改变。海马 2003,13, 399–412. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  21. 布鲁斯特，A。；R.A.本德。；陈，Y。；Dube，C。；Eghbal-Ahmadi，M。；Baram，T.Z.发育性热性惊厥以亚型和细胞特异性的方式调节超极化激活通道的海马基因表达。《神经科学杂志》。 2002,22, 4591–4599. [谷歌学者] [交叉参考]
  22. Dube，C。；Chen，K。；Eghbal-Ahmadi，M。；Brunson，K。；索尔特斯，I。；巴拉姆，T.Z。；Eghbal-Ahmadi，M。；Brunson，K。；索尔特斯，I。；巴拉姆，T.Z。；等。幼年大鼠模型中长时间的热性惊厥增强海马的长期兴奋性。安。神经。 2000,47, 336–344. [谷歌学者] [交叉参考]
  23. 杜贝，C。；Richichi，C。；R.A.本德。；Chung，G。；利特，B。；Baram，T.Z.实验性长期高热惊厥后颞叶癫痫：前瞻性分析。大脑 2006,129, 911–922. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  24. Chang，Y.-C.，纽约州。；Kuo，Y.-M。；黄，A.-M。；Huang，C.-C.大鼠幼鼠反复热性惊厥会导致突触可塑性和NR2A酪氨酸磷酸化的长期缺陷。神经生物学。数字化信息系统。 2005,18, 466–475. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  25. Notenboom，R.G.E。；拉梅克斯，G.M.J。；Kamal，A。；斯普鲁伊特，B.M。；De Graan，P.N.E.大鼠早期复杂热性惊厥后海马突触可塑性的长期调节。《欧洲神经科学杂志》。 2010,32. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  26. 卡纳姆，H.B。；赵（Q.Zhao）。；沙茨基赫，T。；Holmes，G.L.年龄对大鼠早期癫痫发作后认知后遗症的影响。癫痫研究。 2009,85, 221–230. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  27. Mikati，文学硕士。；医学博士Zeinieh。；R.M.库尔迪。；Harb，S.A.公司。；El Hokayem，J.A。；Daderian，R.H。；沙姆塞丁，A。；奥贝德，M。；比塔，F.F。；El Sabban，M.急性和慢性缺氧对发育中大脑行为和海马组织学的长期影响。大脑研究开发大脑研究。 2005,157, 98–102. [谷歌学者] [交叉参考]
  28. 黄，L.-T。；Yang，S.N。；Liou，C.-W。；洪，P.-L。；赖，M.-C。；王，C.-L。；Wang，T.-J.戊四氮诱导的幼鼠反复癫痫发作：空间学习的时间进程和长期影响。癫痫 2002,43, 567–573. [谷歌学者] [交叉参考]
  29. 霍姆斯，G.L。；Ben-Ari，Y.新生儿癫痫发作一次就会永久性改变谷氨酸能突触。安。神经。 2007,61, 379–381. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  30. Yang，S.-N。；Huang，C.-B。；杨，C.-H。；赖，M.-C。；陈，W.-F。；王，C.-L。；Wu，C.-L。；Huang，L.-T。先前暴露于围生期低氧诱导损伤的大鼠海马CA1区SynGAP表达和长期空间学习记忆受损：A68930的有益作用。神经科学。莱特。 2004,371, 73–78. [谷歌学者] [交叉参考]
  31. Lippman-Bell，J.J。；周，C。；Sun，H。；费斯克，J.S。；Jensen，F.E.早期癫痫发作会改变突触钙通透性AMPA受体的功能和可塑性。分子细胞。神经科学。 2016,76, 11–20. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  32. 科尔内霍，B.J。；Mesches，M.H。；一次早期癫痫发作会损害短期记忆，但不会改变空间学习、识别记忆或焦虑。癫痫行为。 2008,13, 585–592. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  33. Jensen，F.E。；王，C。；斯塔夫斯特罗姆，C.E。；刘，Z。；Geary，C。；Stevens，M.C.围生期缺氧后大鼠海马脑片的兴奋性急性和慢性增加体内。《神经生理学杂志》。 1998,79, 73–81. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  34. 周，C。；贝尔，J.J.L。；Sun，H。；Jensen，F.E.低氧诱导的新生儿癫痫发作减少了海马CA1神经元的沉默突触和长期增强。《神经科学杂志》。 2011,31, 18211–18222. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  35. Tanabe，T。；Hara，K。；Shimakawa，S。；福井，M。；Tamai，H.长期发热性癫痫发作后海马损伤：连续前瞻性系列中的一例。癫痫 2011,52, 837–840. [谷歌学者] [交叉参考]
  36. 纽约州波斯特尼科娃。；Amakhin，D.V.公司。；特罗菲莫娃，上午。；斯莫伦斯基，I.V。；Zaitsev，A.V.，戊四氮诱导癫痫持续状态后大鼠海马神经元功能特性的变化。神经科学 2019,399, 103–116. [谷歌学者] [交叉参考]
  37. 祖克，R.S。；Regehr，W.G.短期突触可塑性。每年。生理学评论。 2002,64, 355–405. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  38. 布利斯，T.V.P。；Collingridge，G.L.记忆的突触模型：海马体的长期增强。自然 1993,361, 31–39. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  39. Citri，A。；Malenka，R.C.突触可塑性：多种形式、功能和机制。神经精神药理学 2008,33, 18–41. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  40. Lujan，B。；刘，X。；Wan，Q.含GluN2A-和GluN2B-的NMDA受体在神经元存活和死亡中的不同作用。国际生理学杂志。病理生理学。药理学。 2012,4, 211–218. [谷歌学者]
  41. Sibarov，D.A。；Antonov，S.M.NMDA受体的钙依赖性脱敏。生物化学 2018,83, 1173–1183. [谷歌学者] [交叉参考]
  42. Amakhin，D.V.公司。；马尔金，S.L。；Ergina，J.L。；K.A.Kryukov。；Veniaminova，E.A.公司。；祖巴雷娃，O.E。；Zaitsev，A.V.，毛果芸香碱诱导的Wistar大鼠急性癫痫后颞皮层和海马谷氨酸能传递特性的改变。前面。单元格。神经科学。 2017,11, 264. [谷歌学者] [交叉参考]
  43. Benveniste，M。；克莱门茨，J。；维克里克？，L。；Mayer，M.L.对小鼠培养海马神经元中甘氨酸调节N-甲基-D-天冬氨酸受体的动力学分析。《生理学杂志》。 1990,428, 333–357. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  44. Chen，Y.S。；Tu，Y.C。；赖，Y.C。；刘，E。；Yang，Y.C。；Kuo，C.C.NMDA通道的脱敏需要配体结合到GluN1和GluN2亚单位以收缩激活门旁边的孔。神经化学杂志。 2020,153, 549–566. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  45. Henneberger，C。；巴布亚新几内亚。；奥利特，S.H.R。；Rusakov，D.A.长期增强依赖于星形胶质细胞释放D-丝氨酸。自然 2010. [谷歌学者] [交叉参考]
  46. Clasadonte，J。；Haydon，P.G.星形胶质细胞与癫痫。癫痫 2010. [谷歌学者] [交叉参考]
  47. 普拉塔，A。；Lebedeva，A。；杰尼索夫，P。；Nosova，O。；纽约州波斯特尼科娃。；Pimashkin，A。；Brasche，A。；扎伊采夫，A.V。；Rusakov，D.A。；Semyanov，A.癫痫持续状态后的星形细胞萎缩降低了大鼠海马的Ca2+活性和突触可塑性受损。前面。摩尔神经科学。 2018,11, 215. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  48. Rakhade，S.N.公司。；克莱因，P.M。；Huynh，T。；希拉里·戈梅兹，C。；科萨拉斯，B。；Rotenberg，A。；Jensen，F.E.在低氧诱导新生儿癫痫的啮齿动物模型中晚期自发癫痫的发展。癫痫 2011,52, 753–765. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  49. Rajab，E。；阿卜丁，Z。；哈桑，Z。；Alsaffar，Y。；曼迪尔，M。；F.A.沙瓦夫。；Al-Ansari，S。；Kamal，A.大鼠实验性发热后的认知表现和惊厥风险。国际神经科学发展杂志。 2014,34, 19–23. [谷歌学者] [交叉参考]
  50. Rakhade，S.N.公司。；周，C。；奥伊拉，P.K。；Fishman，R。；新泽西州苏彻市。；Jensen，F.E.AMPA受体的早期改变介导新生儿癫痫诱导的突触增强。《神经科学杂志》。 2008,28, 7979–7990. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  51. 蒋，X。；Mu，D。；比兰，V。；福斯蒂诺，J。；Chang，S。；林科恩，C.M。；安·谢尔顿（Ann Sheldon，R.）。；Ferriero，D.M.激活的Src激酶在新生儿脑缺血后与N-甲基-D-天冬氨酸受体相互作用。神经病学年鉴 2008,63, 632–641. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  52. 周，C。；Sun，H。；克莱因，P.M。；Jensen，F.E.新生儿癫痫改变了海马CA1神经元中NMDA谷氨酸受体Glu22A和3A亚单位的表达和功能。前面。单元格。神经科学。 2015,9, 362. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  53. 桑切斯，R.M。；Koh，S。；里约，C。；王，C。；兰佩蒂，E.D。；Sharma，D。；科尔法斯，G。；Jensen，F.E.在围生期低氧诱导癫痫发作后，幼年大鼠海马谷氨酸受体2表达降低，癫痫发生增强。《神经科学杂志》。 2001,21, 8154–8163. [谷歌学者] [交叉参考]
  54. Di Maio，R。；Mastroberardino，P.G。；胡，X。；蒙特罗，L。；Greenamyre，J.T.Pilocapine改变海马神经元中NMDA受体的表达和功能：NADPH氧化酶和ERK1/2机制。神经生物学。数字化信息系统。 2011,42, 482–495. [谷歌学者] [交叉参考]
  55. Di Maio，R。；Mastroberardino，P.G。；胡，X。；蒙特罗，L.M。；Greenamyre，J.T.Thiol氧化和体内外匹罗卡品模型中NR2B/NMDA受体功能的改变：癫痫发生的意义。神经生物学。数字化信息系统。 2013,49, 87–98. [谷歌学者] [交叉参考]
  56. 朱，X。；Dong，J。；沈，K。；Bai，Y。；Zhang，Y。；吕，X。；Chao，J。；Yao，H.NMDA受体NR2B亚单位参与PTZ点燃诱导的海马星形细胞增多和氧化应激。大脑研究公牛。 2015,114，70–78。[谷歌学者] [交叉参考]
  57. 陈，B。；冯，B。；Tang，Y。；你，Y。；Wang，Y。；Hou，W。；胡，W。；Chen，Z.阻断GluN2B亚单位可逆转长时间热性癫痫发作后的癫痫易感性增强，且治疗时间窗较宽。实验神经学。 2016,283, 29–38. [谷歌学者] [交叉参考]
  58. 卡明斯，K.A。；Popescu，G.K.甘氨酸依赖性激活NMDA受体。《遗传学杂志》。 2015,145, 513–527. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  59. 哈辛，L.G。；Matyus，P.建立突触和突触外甘氨酸水平的甘氨酸释放机制：突触和非突触甘氨酸转运体的作用。大脑研究公牛。 2013,93, 110–119. [谷歌学者] [交叉参考]
  60. Zafra，F。；Ibáñez，I。；巴托洛姆-马汀，D。；Piniella，D。；Arribas-Blázquez，M。；Giménez，C.甘氨酸转运体及其与NMDA受体的偶联。在神经生物学进展; 施普林格国际出版公司：美国纽约州纽约市，2017年；第16卷，第55-83页。[谷歌学者]
  61. 沈海云。；van Vliet，E.A。；布莱特，K.-A。；Hanthorn，M。；新泽西州莱尔。；J.戈尔特。；Aronica，E。；Boison，D.甘氨酸转运体1是治疗癫痫的靶点。神经药理学 2015,99, 554–565. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学] [绿色版本]
  62. Eichler，S.A.公司。；Kirischuk，S。；Jüttner，R。；Schafermeier，P.K.公司。；Legendre，P。；莱曼，T.N。；Gloveli，T。；Grantyn，R。；Meier，J.C.通过去极化GABA能传递对海马神经元的糖能强直抑制引发颞叶癫痫的组织病理学征象。J.细胞。分子医学。 2008,12, 2848–2866. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  63. D.Khan。；Dupper，A。；Deshpande，T。；Graan，P.N.E.D。；施坦豪斯，C。；Bedner，P.实验性热性惊厥损害幼年小鼠的星形胶质细胞间隙连接偶联。《神经科学杂志》。物件。 2016,94, 804–813. [谷歌学者] [交叉参考]
  64. Yang，L。；Li，F。；张，H。；Ge，W。；米·C。；孙，R。；Liu，C.反复高热惊厥模型中的星形胶质细胞激活和记忆损伤。癫痫研究。 2009,86, 209–220. [谷歌学者] [交叉参考]
  65. Ł奥托夫斯卡，J.M。；Sobaniec-Łotowska，M.E。；Sobaniec，W.在热性惊厥实验模型中，使用托吡酯时海马回皮层和颞叶新皮层中星形胶质细胞的超微结构特征。叶状神经病理性。 2009,47, 268–277. [谷歌学者]
  66. 查普曼，K.E。；Raol，Y.H。；布鲁克斯·凯亚尔（Brooks-Kayal），A.《新生儿癫痫：将实验室新疗法转化为隔离疗法的争议和挑战》。《欧洲神经科学杂志》。 2012,35, 1857–1865. [谷歌学者] [交叉参考]
  67. 杜贝，C。；Brunson，K.L。；Eghbal-Ahmadi，M。；Gonzalez-Vega，R。；Baram，T.Z.内源性神经肽Y通过增加癫痫发作阈值来防止实验性热性癫痫的复发。《分子神经科学杂志》。 2005,25, 275–284. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  68. 纽约州波斯特尼科娃。；特罗菲莫娃，上午。；埃尔吉娜，J.L。；祖巴雷娃，O.E。；Kalemenev，S.V.公司。；Zaitsev，A.V.在戊四唑诱导的幼年大鼠急性发作后，CA3-CA1海马突触NMDA依赖性长时突触电位瞬间转换为mGluR1依赖性电位。单元格。摩尔神经生物学。 2019,39, 287–300. [谷歌学者] [交叉参考]
  69. 帕西诺斯，G。；沃森，C。鼠脑立体定位图谱; 爱思唯尔出版社：荷兰阿姆斯特丹，2007年。[谷歌学者]
  70. 利瓦克，K.J.J。；Schmittgen，T.D.D.使用实时定量PCR和2-ΔΔCT方法分析相关基因表达数据。方法 2001,25，402–408。[谷歌学者] [交叉参考]
  71. A.斯威森。；Nelissen，K。；Janssen，D。；里戈，J.M。；Hoogland，G.实验性热性惊厥后齿状回定量实时PCR研究参考基因的验证。BMC研究注释 2012,5, 685. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  72. 马尔金，S.L。；Amakhin，D.V.公司。；Veniaminova，E.A.公司。；Kim，K.K。；祖巴雷娃，O.E。；Magazanik，L.G。；Zaitsev，A.V毛果芸香碱诱导大鼠癫痫持续状态后新皮质和海马ampa受体特性的变化。神经科学 2016,327, 146–155. [谷歌学者] [交叉参考]
  73. 吉萨，C.C。；新南威尔士州玛丽亚。；科布达，D.A.脑损伤后发育中的N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位发生变化。J.神经创伤 2006,23, 950–961. [谷歌学者] [交叉参考] [绿色版本]
  74. Floyd，D.W。；Jung，K.-Y。；McCool，B.A.长期摄入乙醇促进大鼠杏仁核外侧/基底外侧神经元的N-甲基-D-天冬氨酸受体功能和表达。《药理学杂志》。实验治疗师。 2003,307, 1020–1029. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
  75. 普鲁德尼科夫，D。；尤菲罗夫，V。；周，Y。；拉福吉，K.S。；何，A。；Kreek，M.J.优化荧光PCR的引物-探针设计。《神经科学杂志》。方法 2003,123, 31–45. [谷歌学者] [交叉参考]
  76. 波佩斯库，G。；罗伯特·A。；J.R.豪。；Auerbach，A.反应机制决定NMDA受体对重复刺激的反应。自然 2004. [谷歌学者] [交叉参考]
  77. 雅各布奇，G.J。；Popescu，G.K.NMDA受体亚型激活和调节的动力学模型。货币。操作。生理学。 2018,2, 114–122. [谷歌学者] [交叉参考] [公共医学]
Ijms 22 08218 g001 550号
图1。对照组（CTRL）和FS大鼠（FS）海马CA1、CA3、门和齿状回（DG）神经元的尼斯染色。每100μm细胞层计数的尼塞尔染色神经元的分组数据。菱形显示每个大脑的个体值。条形图表示平均值，误差条形图表示均值的标准误差*第页< 0.05, **第页< 0.01,t吨-测试。
图1。对照组（CTRL）和FS大鼠（FS）海马CA1、CA3、门和齿状回（DG）神经元的尼塞尔染色。每100μm细胞层计数的尼塞尔染色神经元的分组数据。菱形显示每个大脑的个体值。条形图表示平均值，误差条形图表示均值的标准误差*第页< 0.05, **第页< 0.01,t吨-测试。
Ijms 22 08218 g001号
Ijms 22 08218 g002 550公司
图2。fEPSP振幅的刺激-响应关系(一)和突触前FV振幅(b条)对照组（CTRL）和FS大鼠海马CA1区记录。每个点代表平均值±SEM(c（c）)对照组和FS大鼠海马脑片fEPSP和FV振幅之间I/O关系的典型示例。(d日)FS大鼠的最大I/O斜率小于对照动物。每个菱形代表在单个大脑切片中获得的值。每只动物使用一到三片*第页< 0.05, **第页<0.01-对照组和FS组之间的差异。
图2。fEPSP振幅的刺激-响应关系(一)和突触前FV振幅(b条)对照组（CTRL）和FS大鼠海马CA1区记录。每个点代表平均值±SEM(c（c）)对照组和FS大鼠海马脑片fEPSP和FV振幅之间I/O关系的典型示例。(d日)FS大鼠的最大I/O斜率小于对照动物。每个菱形代表在单个大脑切片中获得的值。每只动物使用一到三片切片*第页< 0.05, **第页<0.01——对照组和FS组之间的差异。
Ijms 22 08218 g002标准
Ijms 22 08218 g003 550公司
图3。FS后大鼠海马脑片短期突触可塑性无变化。(一)对照组（CTRL）和FS后大鼠（FS）海马CA1区对脉冲响应的典型示例，脉冲间隔为30 ms和80 ms(b条)图中显示了不同刺激间海马脑片中的配对脉冲促进作用。每个点代表平均值±SEM。
图3。FS后大鼠海马脑片短期突触可塑性无变化。(一)对照组（CTRL）和FS后大鼠（FS）海马CA1区对脉冲响应的典型示例，脉冲间隔为30 ms和80 ms(b条)图中显示了不同刺激间海马脑片中的配对脉冲促进作用。每个点代表平均值±SEM。
Ijms 22 08218第003页
Ijms 22 08218 g004 550公司
图4。幼年大鼠海马CA1区的长时突触增强（LTP）在早期FSs后减弱。(一)显示海马体中电极位置的图式。(b条)诱导前（1）和HFS或TBS后60分钟fEPSP的典型示例（2）。(c（c）)显示对照组（CTRL）和实验组（FS）动物在θ波刺激（TBS）或高频刺激（HFS）后fEPSP标准化斜率值的变化的图表（在时间0时进行刺激）。(d日)图表显示了不同刺激类型的对照（CTRL）和实验（FS）动物之间LTP的差异。本图和下图中的所有数据均表示为平均值±标准误差*第页<0.05——与对照组的显著差异（Tukey的事后检验）。
图4。幼年大鼠海马CA1区的长时突触增强（LTP）在早期FSs后减弱。(一)显示海马体中电极位置的图式。(b条)诱导前（1）和HFS或TBS后60分钟fEPSP的典型示例（2）。(c（c）)显示对照组（CTRL）和实验组（FS）动物在θ波刺激（TBS）或高频刺激（HFS）后fEPSP标准化斜率值的变化的图表（在时间0时进行刺激）。(d日)图表显示了不同刺激类型的对照（CTRL）和实验（FS）动物之间LTP的差异。本图和下图中的所有数据均表示为平均值±标准误差*第页<0.05——与对照组的显著差异（Tukey的事后检验）。
Ijms 22 08218 g004公司
Ijms 22 08218 g005 550号
图5。幼年动物早期FS后CA1海马LTP的诱导是NMDAR依赖性的。对照组和实验组在NMDAR阻滞剂MK-801（10μM）存在下TBS前后的标准化fEPSP斜率(一)或HFS(b条). (c（c）,d日)显示对照组和实验组在MK-801存在下TBS后塑性大小的图表(c（c）)或HFS(d日). 注意，在任何组中，MK-801均未检测到突触可塑性。采用Tukey事后检验后的双向方差分析**第页< 0.01, ***第页< 0.001.
图5。幼年动物早期FS后CA1海马LTP的诱导是NMDAR依赖性的。在NMDAR阻断剂MK-801（10μM）存在的情况下，TBS前后对照组和实验组的标准化fEPSP斜率(一)或HFS(b条). (c（c）,d日)显示对照组和实验组在MK-801存在下TBS后塑性大小的图表(c（c）)或HFS(d日). 注意，在任何组中，MK-801均未检测到突触可塑性。采用Tukey事后检验后的双向方差分析**第页< 0.01, ***第页< 0.001.
Ijms 22 08218 g005号
Ijms 22 08218 g006 550公司
图6。含有GluN2B的NMDAR参与了对照组和FS后动物LTP的诱导。TBS前后，在含有选择性GluN2B NMDAR拮抗剂ifenprodil（Ifen，3μM）存在下，对照组和实验组的相对fEPSP斜率(一)或HFS(b条). 注意，在FS组中，ifenprodil的存在没有检测到突触可塑性。(c（c）,d日)TBS后，在伊芬地尔存在的情况下，对照组和FS后组的塑性大小示意图(c（c）)或HFS(d日). 注意，在FS组中，ifenprodil的存在没有检测到突触可塑性。采用Tukey事后检验后的双向方差分析*第页< 0.05.
图6。含有GluN2B的NMDAR参与了对照组和FS后动物LTP的诱导。TBS前后，在含有选择性GluN2B NMDAR拮抗剂ifenprodil（Ifen，3μM）存在下，对照组和实验组的相对fEPSP斜率(一)或HFS(b条). 注意，在FS组中，ifenprodil的存在没有检测到突触可塑性。(c（c）,d日)显示TBS后，在ifenprodil存在的情况下，对照组和FS后组的可塑性大小的图表(c（c）)或HFS(d日). 注意，在FS组中，ifenprodil的存在没有检测到突触可塑性。采用Tukey事后检验后的双向方差分析*第页< 0.05.
Ijms 22 08218 g006公司
Ijms 22 08218 g007 550公司
图7。热性惊厥后背海马区Grin1、Grin2a、Grinb2b、Gria1、Gria2基因的相对表达以及Grin2a/Grin2b比率。CTRL对照组；FS-实验组。单向方差分析，然后是Tukey的事后多重比较测试。数据以平均值和平均值的标准误差表示。每个点（圆、菱形、方形）代表单个动物获得的值。
图7。热性惊厥后背海马区Grin1、Grin2a、Grinb2b、Gria1、Gria2基因的相对表达以及Grin2a/Grin2b比率。CTRL对照组；FS-实验组。单向方差分析，然后是Tukey的事后多重比较测试。数据以平均值和平均值的标准误差表示。每个点（圆、菱形、方形）代表单个动物获得的值。
Ijms 22 08218 2007年7月
Ijms 22 08218 g008 550
图8。在FS大鼠中，TBS诱发的NMDAR介导的电流特性受到干扰。(一)TBS在对照组（黑色）和FS大鼠（红色）CA1神经元中诱导的NMDAR介导电流的典型电压灯记录。(b条)响应中单个电流峰值的平均振幅，归一化为第一个响应的振幅。混合模型方差分析揭示了各因素之间的显著交互作用（FS×刺激数）。根据Dunnett的事后检验，星号表示相同刺激次数下，对照组和FS组大鼠的数值之间存在显著差异。(c（c）)在TBS期间，NDMAR介导的电流的90–10%衰减的代表性记录。电流用双指数函数拟合，时间常数为 τ （f） 一 秒 t吨 =65 ms和 τ 秒 我 o个 w个 =300毫秒(d日)在TBS期间，反应的快成分和慢成分的相对贡献。混合模型方差分析未显示对照组和FS组大鼠之间的差异。星号表示与第一个响应的显著差异*第页< 0.05; **第页< 0.01; ***第页< 0.001.
图8。FS大鼠TBS诱发NMDAR介导的电流特性受到干扰。(一)TBS在对照组（黑色）和FS大鼠（红色）CA1神经元中诱导的NMDAR介导电流的典型电压灯记录。(b条)响应中单个电流峰值的平均振幅，归一化为第一个响应的振幅。混合模型方差分析揭示了各因素之间的显著交互作用（FS×刺激数）。根据Dunnett的事后检验，星号表示相同刺激次数下，对照组和FS组大鼠的数值之间存在显著差异。(c（c）)在TBS期间，NDMAR介导的电流的90–10%衰减的代表性记录。电流用双指数函数拟合，时间常数为 τ （f） 一 秒 t吨 =65 ms和 τ 秒 我 o个 w个 =300毫秒(d日)在TBS期间，反应的快成分和慢成分的相对贡献。混合模型方差分析未显示对照组和FS组大鼠之间的差异。星号表示与第一个响应的显著差异*第页< 0.05; **第页< 0.01; ***第页< 0.001.
Ijms 22 08218 g008标准
Ijms 22 08218 g009 550号
图9。D-丝氨酸是NMDAR的联合激动剂，可增强FS组的LTP，但不增强对照组。对照组和FS组在NMDAR协同激动剂D-丝氨酸（10μM）存在下TBS前后的标准化fEPSP斜率(一)或HFS(b条). (c（c）,d日)显示TBS后D-丝氨酸存在时对照组和实验组可塑性大小的图表(c（c）)或HFS(d日). Tukey事后测试后的双向方差分析：*第页< 0.05, **第页< 0.01.
图9。D-丝氨酸是NMDAR的联合激动剂，可增强FS组的LTP，但不增强对照组。对照组和FS组在NMDAR协同激动剂D-丝氨酸（10μM）存在下TBS前后的标准化fEPSP斜率(一)或HFS(b条). (c（c）,d日)显示TBS后D-丝氨酸存在时对照组和实验组可塑性大小的图表(c（c）)或HFS(d日). Tukey事后测试后的双向方差分析：*第页< 0.05, **第页< 0.01.
Ijms 2009年8月22日
Ijms 22 08218 g010 550
图10。用于模拟NMDAR选通机制的动力学方案。每个箭头上方的速率常数以s为单位−1，但甘氨酸结合和谷氨酸结合速率常数除外，其单位为µM−1秒−1Gly和Glu分别表示甘氨酸和谷氨酸浓度（单位：µM）。
图10。用于模拟NMDAR选通机制的动力学方案。每个箭头上方的速率常数以s为单位−1，但甘氨酸结合和谷氨酸结合速率常数除外，其单位为µM−1秒−1Gly和Glu分别表示甘氨酸和谷氨酸浓度（单位：µM）。
Ijms 22 08218 g010公司
Ijms 22 08218 g011 550号
图11。NMDAR介导的对TBS反应的模拟(一)开放状态概率（O1+O1）的总和，反映了由TBS诱导的NMDAR介导的突触电流的时间进程。上面的痕迹（黑色）代表5种反应，用10µM的环境甘氨酸模拟。用1µM环境甘氨酸模拟较低的痕量（红色）。(b条)响应中单个开放状态概率峰值的振幅归一化为第一个响应的第一个峰值振幅。
图11。NMDAR对TBS的响应模拟(一)开放状态概率（O1+O1）的总和，反映了由TBS诱导的NMDAR介导的突触电流的时间进程。上面的痕迹（黑色）代表5种反应，用10µM的环境甘氨酸模拟。用1µM环境甘氨酸模拟较低的痕量（红色）。(b条)响应中单个开放状态概率峰值的振幅归一化为第一个响应的第一个峰值振幅。
Ijms 22 08218 g011公司
表
表1。qRT-PCR中使用的引物和探针。
表1。qRT-PCR中使用的引物和探针。
基因符号
RefSeq登录号		核酸序列
（正向、反向、TaqMan-Probe）		参考
Ppia公司
NM_017101型		AGGATTCATGTGCCAGGGTG公司
CTCAGTCTGGCAGTGCAGA公司
ROX-CACGCCATAATGGCACTGGCA-BHQ1		[72]
格林1
NM_017010		GTTCTTCCGCTCAGGCTTTG公司
AGGGAAAACGTTCTGCTTCCA公司
FAM-CGGCATGCGCAAGGACAGCC-BHQ1公司		[73]
格林2a
纳米_012573		全球气候变化大会
CACCTGGTAACCTTCCTCAGTGA公司
FAM-TGGTCAATGTACTTGGATCAA-BHQ1公司		[74]
格林2b
NM_012574		CCCAACATGCTCTCTCCCTTAA公司
CAGCTAGTCGCTCTCTTGGTT公司
FAM-GACGCCAAAACCTCTAGGCGACAG-BHQ1公司		[74]
格里亚1
NM_031608号		TCAGAAGCCTCAACGCC公司
标签
ROX-TCCTGGGCCAGATCGAAGTAAAA-BHQ1公司		[75]
格里亚2
NM_017261		CAGTGCATTTCGGGTAGGA公司
TGCGA行动TGGCTACCT
FAM-TCGGAGTCAGACTGACACCCA-BHQ1公司		[75]
出版商备注：MDPI对公布的地图和机构关联中的管辖权主张保持中立。

分享和引用

MDPI和ACS样式

纽约州波斯特尼科娃。；Griflyuk，A.V.公司。；Amakhin，D.V.公司。；科瓦伦科，A.A。；Soboleva，E.B。；祖巴雷娃，O.E。；A.V.扎伊采夫。幼年大鼠早期热性惊厥损害海马突触可塑性。国际分子科学杂志。 2021,22, 8218.https://doi.org/10.3390/ijms22158218

AMA风格

Postnikova TY、Griflyuk AV、Amakhin DV、Kovalenko AA、Soboleva EB、Zubareva OE、Zaitsev AV。幼年大鼠早期热性惊厥损害海马突触可塑性。国际分子科学杂志. 2021; 22(15):8218.https://doi.org/10.3390/ijms22158218

芝加哥/图拉宾风格

Postnikova、Tatyana Y.、Alexandra V.Griflyuk、Dmitry V.Amakhin、Anna A.Kovalenko、Elena B.Soboleva、Olga E.Zubareva和Aleksey V.Zaitsev。2021.“幼年大鼠早期热性惊厥损害海马突触可塑性”国际分子科学杂志22，编号15:8218。https://doi.org/10.3390/ijms22158218

请注意，从2016年第一期开始，该杂志使用文章编号而不是页码。查看更多详细信息在这里。

文章指标

返回页首顶部