本文中提到：

介绍

电过敏（EHS）是一种新的世界卫生组织（WHO）-确认发生致残情况EHS自我报告患者(1).

继世卫组织主办的国际研讨会之后2004年布拉格电磁超敏反应研究（捷克共和国）“特发性环境不耐受”一词的使用（IEI）归因于电磁场（IEI-EMF）鉴定这种新的EHS相关有害健康状况(2).

利用超声脑断层血流图（UCTS），最近有证据表明，EHS自我报告的患者平均脑组织搏动指数下降（PI）在颞叶的许多区域，特别是在包膜丘脑区，包括边缘系统和丘脑；另外还表明这些异常实际上可能与脑血流减少有关和/或这些特定脑区的神经元功能障碍(3–5). EHS自我报告患者也通过展示潜力来客观地识别和表征与许多生物异常相关，包括热休克蛋白相关细胞的炎症程度外周血中的应激和自身免疫反应，以及尿液中6-羟基-甲状腺素硫酸盐/肌酐比值异常(3). 事实上，因为它是据报道，许多EHS自我报告患者表现可靠他们每次报告接触电磁波时的临床症状来源，并呈现客观UCTS和生物异常(4,5)，本研究的作者建议使用更简明的术语电磁场不耐受综合征（EMFIS）是指WHO认可的IEI-EMF病理状况患者关联(4).

当前前景体内生物化学的调查旨在确定EHS自我报告患者也可能具有氧化应激的特征外周血异常，以进一步确定和描述EMFIS。

材料和方法

入选标准

根据之前的研究(3)、EHS，更确切地说是EHS中的EMFIS自我报告患者的定义基于五个以下临床标准：i）缺乏已知病理学解释观察到的临床症状；ii）报告人患者，假定症状的再现性电磁场（EMF）的影响，无论入罪来源；iii）症状消退或消失与报告的EMF规避相关；iv）临床症状与之前归因于EHS自我报告的内容兼容科学文献中的患者；和v）慢性进化(6–10).

在纳入之前，所有患者都进行了面对面的交流根据之前验证的问卷进行的访谈全身和神经系统临床检查生物检查，包括目前使用的外周血排除任何非EMFIS相关病理。因此，到被纳入研究的患者没有此类病史癌症、阿尔茨海默病、II型糖尿病和/或心血管疾病。患者也没有相关的多发性硬化化学敏感性（MCS），处于活跃症状期他们的病理状况，无论他们是否之前治疗过。此外，患者的颈动脉正常椎动脉超声多普勒扫描，血液学正常，肝脏，肾脏和代谢性外周血检测，以及（如果有）正常磁共振成像或计算机断层扫描。

然而，由于大多数临床症状EHS自我报告患者主观，两个生物增加了纳入标准，以客观地确定EMFIS：i）A至少三个中间部位的平均组织搏动指数下降颞叶脑动脉依赖性组织切片正如之前报道的那样，使用UCTS进行演示UCTS能够区分EHS自我报告患者以及使用该标准的健康受试者(11)；和ii）至少增加一个三种与炎症相关的外周血生物标志物之前已确定可能在EHS中检测到自我报告患者(3):组胺增加，炎症介质(12)；标志物S100B蛋白增加与氧化应激相关的血脑屏障开放(13,14)；和增加的伴侣蛋白热休克蛋白β1（HSP27）或热休克70 kDa蛋白1B（HSP70），热休克细胞应激相关炎症标志物和/或免疫反应(15,16). 用于以下目的的方法的参考测量这三种炎症相关的外周血生物标记物显示在表我(17–20).

表一 炎症相关生物标志物电过敏自报告研究患者。

表一

炎症相关生物标志物电过敏自报告研究患者。

作者，年份	生物标志物	样品类型	（参考文献）
莱贝尔等,1996	组胺	等离子	(17)
史密特等,2005	蛋白质S100B	血清	(18)
德和罗奇，2004	热休克蛋白27	血清	(19)
波克利等铝, 1998	热休克蛋白70	血清	(20)

[一]HSP27，加热休克蛋白β1；HSP70，热休克70kDa蛋白1B。

氧化和抗氧化应激相关生物标志物

一组生物标记物被用来测量血浆中的氧化应激和抗氧化应激反应和/或红细胞(表二). 离心后进行测量（4000 x g；10分钟；4°C）从血浆中分离红细胞。

表二 氧化测定方法应激相关生物标志物、抗氧化非酶蛋白血浆和/或红细胞中的抗氧化酶电超敏反应自我报告患者电磁场不耐受综合征。

表二

氧化性的测量方法应激相关生物标志物、抗氧化非酶蛋白血浆和/或红细胞中的抗氧化酶自我报告的超敏反应患者电磁场不耐受综合征。

作者，年份	生物标志物氧化应激	样品类型	（参考文献）
Londero和LoGreco，1996年	MDA公司	等离子	(24)
奥哈瓦等铝, 1979	TBARS（待定）	等离子	(25)
Akerboom和Sies，1981	GSSG公司	等离子	(26)
Ischiropoulos公司等铝, 1992	NTT公司 抗氧化非酶蛋白	等离子	(27)
Jocelyn，1987年	总硫醇	等离子	(28)
Akerboom和Sies，1981	谷胱甘肽	等离子	(26)
Akerboom和Sies，1981	谷氨酸 抗氧化酶	等离子	(26)
Marklund和马克隆德，1974年	草地	加拿大皇家银行	(29)
曼内维克，2001	希腊	血浆/红细胞	(30)
Günzler先生等铝, 1974	GPx公司	血浆/红细胞	(31)

GluT包括GSH和GSSG。MDA、丙二醛；TBAR，硫代巴比妥酸反应物质；硝基酪氨酸；GSSG，氧化谷胱甘肽；GSH，还原型谷胱甘肽；总GluT谷胱甘肽；超氧化物歧化酶；GR，谷胱甘肽还原酶；谷胱甘肽过氧化物酶；红细胞，红细胞。

氧化应激生物标志物

对于氧化应激评估，以下内容血浆中的生物标志物：所有硫代巴比妥耐酸物质（TBAR），尤其是其中一种，丙二醛（MDA），是脂质过氧化的标志物(21)；谷胱甘肽二硫化物（GSSG），是还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的标志(22)；和硝基酪氨酸（NTT），它是过氧亚硝酸盐诱导的氧化/亚硝化的标志应力(23).

为了测量MDALondero和Lo Greco(24)是已使用。当MDA与TBA反应时，MDA-TBA复合物被分离干扰物质，并使用反相高效液相色谱联用技术紫外/可见光检测。MDA根据其强度进行量化反应后的光吸收和荧光特性与TBA。结果表示为µM.对于测定脂质过氧化反应中间体、所有血浆总胆红素受体，包括MDA，使用与Ohkawa类似的方法等铝(25). 当前方法基于TBAR醛功能的反应在95°C下用TBA酸水解释放，形成TBAR-TBA有色络合物，用荧光法定量。结果是以表示µM.总谷胱甘肽（GluT）、GSH和氧化谷胱甘肽（GSSG）由酸性无蛋白上清液，根据Akerboom和Sies公司(26). GSSG的测定在添加2-乙烯基吡啶掩蔽GSH之后进行去蛋白提取物。进行了NTT分析根据Ischiropoulos的方法等(27)使用竞争性ELISA测试（OxiSelect™硝基酪氨酸ELISA试剂盒；目录号STA-305；细胞生物实验室Inc.，美国加利福尼亚州圣地亚哥）。为了最后的决定标记物（NTT），首先将血浆添加到硝化牛血清中白蛋白（BSA）（OxiSelect™硝基酪氨酸ELISA试剂盒；目录号。STA-319）预吸收酶免疫测定板。在简要介绍之后孵育，一种特定的抗硝基酪氨酸抗体（OxiSelect™硝基酪氨酸ELISA试剂盒；添加了零件号230502），然后是添加辣根过氧化物酶（HRP）共轭次级抗体[OxiSelect™硝基酪氨酸ELISA试剂盒；HRP结合物（部分编号231009）]。抗硝基酪氨酸抗体的稀释度为1:1000，二级抗体1:1000在室温下孵育1小时通过比较测定血浆样品中的NTT含量根据预先确定的标准曲线硝化BSA标准，结果表示为µ克/毫升。

抗氧化非酶蛋白

对于非酶抗氧化反应评估，总巯基分子，包括谷胱甘肽和半胱氨酸等肽-和/或血浆中测定了含同型半胱氨酸的蛋白质。对于总SH基团分子5,5′-二硫代双的剂量（2-硝基苯甲酸）用作试剂等离子体SH基团分子在412纳米。结果以U/l表示(28). GluT、GSH和GSSG的剂量使用Akerboom和Sies的方法计算血浆(26). 离心前（400 x克；10分钟；4°C），400µ我采集了全血3.6 ml隐喻酸。离心后，GluT和GSH在酸性无蛋白上清液中酶法测定。这个GSSG的测定在GSH掩蔽后通过添加2-乙烯基吡啶至脱蛋白提取物。类似于GluT和GSH、GSSG酶促测定。结果以表示µM。

抗氧化酶蛋白

抗氧化酶的测定是仅在红细胞中进行，或在红细胞和血浆中进行。测量Cu-Zn红细胞中超氧化物歧化酶（SOD1）活性，所述方法作者：Marklund和Marklund(29)它包括一个基于SOD1抑制邻苯三酚自氧化的能力。这个这种方法的原理是基于邻苯三酚的超氧阴离子自氧化（O）2−)以及对这个根式的肢解SOD1。在该方法中，邻苯三酚自氧化速率为根据吸光度的增加用分光光度法测定420 nm；1单位SOD1活性被定义为抑制邻苯三酚自氧化速率所需的酶50%. 结果以U/mg血红蛋白（Hb）表示。对于剂量谷胱甘肽还原酶（GR），标准Randox试剂盒使用比色法（目录号GR2368；Randox Laboratories，Crumlin，英国）。红细胞GR的结果以U/g Hb表示，以及血浆中GR的U/l(30). 在此外，还测定了谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）的活性根据Günzler的方法得出的方法，红细胞和血浆等(31). GPx测定基于还原烟酰胺二核苷酸的氧化磷酸盐（NADPH）到NADP+，它与340nm处吸光度降低。这种下降的速度是与样品中的GPx活性成正比。GPx公司随后以nM NADPH氧化/min为单位对活性进行评估RBC中GPx的结果以U/g Hb表示血浆中的GPx。

统计分析

总共进行了两次不同的统计测试使用：i）双尾学生t检验，用于比较患者值和正常对照参考值；和ii）皮尔逊相关检验用于统计分析不同变量之间的关联，包括氧化和抗氧化应激相关生物标志物。全部使用XLSTAT软件进行统计分析（XLSTAT 2018.1.49725；Addinsoft；https://www.xlstat.com). 考虑到双尾Student t检验用于进行三个比较（EHS患者总数值，数值高于上限的EHS患者正常极限和值低于正常下限的EHS患者极限），使用一个正常控制参考值数据集，应用了Bonferroni校正，将α截止值设置为显著性为0.05/3，即0.016。统计分析时使用皮尔逊相关检验对截止值进行检验α=0.05。

结果

人口统计数据

共纳入32名携带EMFIS的患者在这项针对氧化和抗氧化应激的前瞻性研究中生物标志物分析。平均年龄为50.6岁，介于32岁之间75年。总共有22名女性和10名男性男女性别比为69%。

然而，由于NTT仅在32人中的14人中进行了测量在本系列病例中，从伴随46名额外EHS自报告患者（平均年龄49岁年；女性/男性性别比例，71%女性），均符合添加了入选标准（见上文），因此结果为NTT提供的是基于对60名携带EMFIS的患者。人口统计数据见表III.

表III 人口统计数据。

表III

人口数据。

案例数量	平均年龄，年	年龄范围，年	性别比，F/M（%F）
32一	50.6	32–75	22/10 (69)
46b条	49	19–79	33/13 (71)
123c（c）	44	18–65	61/62 (50)

a测量32 EHS中的所有标记自我报告患者，但NTT除外，NTT在14患者。

b另外46名患者的NTT测量随之而来的一系列EHS自我报告患者。NTT公司，硝基酪氨酸；EHS，电过敏。

c这些历史上看似正常的控制是根据缺乏临床症状和医疗选择疾病史。

氧化应激生物标志物

结果如所示图1中的、和表IV和V（V）.图。1呈现了不同氧化的分布值EMFIS患者应激生物标志物的对比分析使用从健康对照组获得的正常范围值。作为如所示图1，表示数字例，TBAR、MDA、GSSG和NTT外周血水平值高于正常上限，这意味着这些病例与外周可检测到的氧化应激有关血液。这些数据在表四总体而言，与正常范围值，所有值的平均值（±标准偏差）32名受试者在统计学上显著增加TBAR（P=0.013），MDA和GSSG呈增加趋势（分别为P=0.053和P=0.051），但不适用于NTT（P=0.790）。然而，当分析仅限于携带EMFIS的患者时数值高于正常上限，相对于数值在正常健康对照组中获得（这涉及30–50%的患者，取决于所考虑的生物标记物）除MDA、，GSSG和NTT（P<0.0001）；也就是说，对于所有的氧化应激迄今为止分析的生物标记物。

图1 氧化应激生物标志物的价值在EHS自我报告患者的血浆中（电磁fields不耐受综合征患者）与正常范围值*数据来源于60名EHS自我报告患者。硫代巴比妥类TBAR耐酸物质；丙二醛；硝基酪氨酸；GSH，还原型谷胱甘肽；GSSG，氧化谷胱甘肽；环境、健康和安全，电过敏。

表四 电磁场不耐受性综合征相关氧化应激生物标志物在EHS自我报告患者的外周血，包括平均值所有患者的值（±SD），以及平均值（±标准偏差）、数字和平均值高于正常上限的患者百分比限制。

表四

电磁场不耐受性综合征相关氧化应激生物标志物在EHS自我报告患者的外周血，包括平均值所有患者的值（±SD），以及平均值（±标准偏差）、数字和平均值高于正常上限的患者百分比限制。

氧化应激生物标志物	正常值（范围）	EHS患者平均值±标准偏差	P值一	EHS患者值高于正常上限			P值b条
				案件数量	%总数的案例	平均值±标准偏差
TBARS（待定）	2.5±0.18(2.13–2.86)µM（M）	2.85±0.06	0.013	15/32	48.88	3.14±0.17	<0.0001
丙二醛	1.46±0.17(1.12–1.81)µM（M）	1.76±0.06	0.053	14/32	43.75	2.10±0.19	<0.0001
GSSG公司	12.4±3.4 (5.5–19.3)µM（M）	20.74±1.74	0.051	第13页，共32页	40.63	29.46±9.95	<0.0001
NTT公司	0.75±0.08 (0.6–0.9)µ克/毫升	0.78±0.35	0.790	20/60	33.33	1.19±0.21	<0.0001

a通过比较获得的P值EHS患者和对照组。Bonferroni校正集显著性的α截止值为0.016。

b比较获得的P值EHS患者的数值高于正常上限对照组。Bonferroni校正设置了显著性为0.016。丙二醛；硫代巴比妥类TBAR酸性反应物质；硝基酪氨酸；GSSG，氧化谷胱甘肽；EHS、电敏感性；SD，标准偏离。

表五 电磁场不耐受性综合征相关非酶蛋白生物标志物的测定EHS自我报告患者的外周血，包括平均值所有患者的值（±SD），以及平均值（±标准偏差）、数字和平均值高于正常上限的患者百分比限制。

表五

电磁场不耐受性综合征相关非酶蛋白生物标志物的测定EHS自我报告患者的外周血，包括平均值所有患者的值（±SD），以及平均值（±标准偏差）、数字和平均值高于正常上限的患者百分比限制。

氧化应激生物标志物	正常值（范围）	患有以下疾病的患者EHS平均值±SD	P值一	EHS患者值高于正常上限			P值b条
				案件数量	%总数的案例	平均值±标准偏差
谷胱甘肽	965±118 (729–1203)µM（M）	794.62±34.74	0.012	6/32	18.75	639.47±69.27	<0.0001
GSH/GSSG比率	84.15±29.35(40.1–155)µM（M）/µM（M）	46.92±3.68	<0.0001	13/32	40.63	29.77±4.72	<0.0001
GluT（胶）	989±120 (749–1228)µM（M）	873.47±27.85	0.041	6/32	18.75	669.83±9.67	<0.0001
GSH/GluT比值	99±0.19（94.1–99.9）%	95.25±0.33	0.0009	9/32	29.13	92.86±1.29	<0.0001
NTT公司	0.75±0.08 (0.6–0.9)µ克/毫升	0.78±0.35	0.790	20/60	33.33	0.41±0.14	<0.0001

a通过比较获得的P值EHS患者和对照组。Bonferroni校正集显著性的α截止值为0.016。

b比较获得的P值EHS患者的数值高于正常上限对照组。Bonferroni校正设置了显著性为0.016。硝基酪氨酸；GSSG，氧化谷胱甘肽；GSH，还原型谷胱甘肽；GluT，总谷胱甘肽；EHS、电敏感性；SD，标准偏差。

非酶蛋白相关生物标志物

相比之下，如中所示图1，考虑到接受调查的患者，总蛋白巯基的所有值在正常范围内。也没有血糖值高于谷胱甘肽正常上限GSH/GSSG比值、GluT和GSH/GluT比值；然而，在一个数字中例中，GSH相关生物标志物和NTT的血水平值低于正常范围值。这些数据很详细在里面表五。分析时一系列患者，所有研究的生物标志物除GluT和NTT外显著低于正常下限值。然而，当考虑到20-40%的患者的数值低于下限正常极限值，这一发现得到了证实生物标记物以及GluT和NTT（P<0.0001），表明某些氧化应激相关的生物分子过程导致GSH、GluT和NTT下降可能发生在这些特殊情况。

抗氧化应激酶

先前的氧化应激数据由测定一些与抗氧化应激相关的关键酶在红细胞和血浆中。结果如所示图2和表六.重要观察结果如所示图2是SOD1吗红细胞中测得的活性与高于约60%患者的正常上限，表明抗氧化应激诱导酶主要参与EMFIS携带者的氧化应激解毒过程患者。此外表六表明在考虑所有包含的案例时SOD1红细胞活性显著增加，虽然不是GPx（分别为P=0.002和P=0.044）血浆。同样，与法线范围值相比平均值（±标准偏差）在携带EMFIS的患者SOD1活性增加显示有统计学意义的增加（P<0.0001）。然而，当分析仅限于GPx和重心增加，如所示表不及物动词，与确定了红细胞和血浆中的正常对照参考值分别有19%和10%的患者出现GR~6%（P<0.0001），这意味着EMFIS的特征可能是抗氧化应激相关酶活性增加RBCs，主要涉及SOD1。

图2 的比活性值血浆中抗氧化解毒酶的测定电过敏自报患者的红细胞（电磁场不耐受综合征患者）与正常范围值进行比较。对于GPx和GR，患者血浆水平升高与血浆水平升高的患者不同红细胞水平。超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化物酶；GR，谷胱甘肽还原酶；红细胞，红细胞。

表六 电磁场不耐受性综合征相关抗氧化解毒酶活性在EHS自我报告的红细胞和血浆中测量患者，包括所有患者的平均值（±SD），以及平均值值（±SD）、平均值患者的数量和百分比高于正常上限。

表六

电磁场不耐受综合征相关抗氧化解毒酶活性在EHS自我报告的红细胞和血浆中测量患者，包括所有患者的平均值（±SD），以及平均值值（±SD）、平均值患者的数量和百分比高于正常上限。

抗氧化应激酶	正常值（范围）	EHS患者平均值±标准偏差	P值一	EHS患者值高于正常上限			P值b条
				案件数量	%总数的案例	平均值±标准偏差
超氧化物歧化酶（红细胞）	1.34±0.06（1.22–1.46）U/mg Hb	1.50±0.02	0.002	19/32	59.38	1.57±0.08	<0.0001
GPx（RBC）	44.1±8.2（27.8–60.5）U/g血红蛋白	51.92±1.62	0.044	6/32	18.75	66.70±4.76	<0.0001
GPx（血浆）	375±37.5 (300–450)U/l（单位/升）	379.28±9.30	0.83	3/32	9.38	469.67±26.31	<0.0001
GR（红细胞）	8.9±2.1 (4.7–13.2)单位/克血红蛋白	9.42±0.34	0.56	2/32	6.25	14.15±0.35	<0.0001
GR（血浆）	54±9 (33–75)U/l（单位/升）	61.69±9.17	0.16	0	0	–	–

a通过比较获得的P值EHS患者和对照组。Bonferroni校正集显著性的α截止值为0.016。

b比较获得的P值EHS患者的数值高于正常上限对照组。Bonferroni校正设置了显著性为0.016。超氧化物歧化酶；GR，谷胱甘肽还原酶；谷胱甘肽过氧化物酶；红细胞，红细胞。

总氧化应激发生率携带EMFIS的患者

表VII报告使用三个原则获得的总体结果本研究中使用的氧化应激生物标记物类别：TBAR/MDA、GSSG和NTT。图3总结结果：42.85%的EHS自我报告患者一个阳性的可检测氧化应激生物标志物，以及21.43和14.28%有2个或3个可检测到的阳性氧化应激生物标志物，也就是说，总的来说，80-90%的病例与至少一种可检测的氧化应激生物标志物相关在外周血中。然而，为了提供全面解释EMFIS的特点，目前的研究包括一项临时分子生物学分析获得的不同结果，如图4图5–6.

图3 电过敏百分比自我报告患者（电磁场不耐受患有综合征的患者）TBAR、GSSG和/或NTT阳性外周血中测定的氧化应激生物标志物。阳性生物标记物对应于高于上限的标记物水平正常极限；'total”对应于一个或多个患者阳性生物标志物。黑色条表示患者的百分比具有三个阳性生物标志物中的一个、两个或三个（TBARS，GSSG和NTT），在32例患者中的14例中检测到；白色条形图表示有一个或两个总32例患者中包括TBAR和GSSG。TBAR，硫代巴比妥酸反应物质；GSSG，氧化谷胱甘肽；NTT，硝基酪氨酸。

图4 Fenton和Haber-Weiss反应。还原形式的过渡金属（Mn）被氢氧化过氧化物转化为过渡金属的氧化形式[M（n+1）]，形成羟基自由基和水作为副产品。超氧化物自由基（O2•−）也可以与氧化形式的过渡金属[M（n+1）]在Haber-Weiss反应中导致还原态过渡金属的生产（Mn）。

图5 示意图显示GSH、SOD1、GPx、GR和Cat在氧化过程中的解毒作用强调。超氧化物自由基可以通过活化产生或作为异常的副产品产生细胞代谢，特别是线粒体代谢电子传输链。超氧化物歧化酶然后转化必须迅速清除的过氧化氢来自系统。这通常通过过氧化氢酶或过氧化物酶，如谷胱甘肽过氧化物酶谷胱甘肽（GSH）作为电子供体。替代铁（II）（存在于系统中）被过氧化氢氧化为铁（III），形成羟基自由基和氢氧化物离子。GSH，降低谷胱甘肽；SOD1、Cu-Zn超氧化物歧化酶；GPx、谷胱甘肽过氧化物酶；GR，谷胱甘肽还原酶；过氧化氢酶；NADPH、，还原烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。

图6 脂质示意图导致丙二醛的过氧化链式反应。丙二醛可能作为副产品在体内生成在烯丙基PUFA、脂质过氧自由基和脂质的生物合成氢过氧化物。PUFA，多不饱和脂肪酸。

表VII 电敏感性百分比自我报告患者（电磁场不耐受患有综合征的患者）TBAR、GSSG和/或NTT阳性外周血中测定的氧化应激生物标志物。

表VII

电过敏百分比自我报告患者（电磁场不耐受患有综合征的患者）TBAR、GSSG和/或NTT阳性外周血中测定的氧化应激生物标志物。

正极数量生物标志物	标记	百分比患者（%）
1	NTT公司	14.28
	GSSG公司	7.14
	待定资产评估	21.43
	NTT或GSSG或待定资产评估	42.85
2	TBAR和GSSG	7.14
	NTT和TBAR	7.14
	NTT和GSSG	7.14
	TBAR和GSSG，或NTT和TBAR，或NTT和GSSG	21.42
3	NTT和TBAR以及GSSG公司	14.28

[一]TBAR，硫代巴比妥酸活性物质；硝基酪氨酸；GSSG、，氧化谷胱甘肽。

搜索统计相关性

使用皮尔逊统计相关检验目前的研究试图确定到目前为止，研究了不同的生物学参数。

表VIII报告结果。观察到血浆MDA水平（众所周知的TBAR）与TBAR血浆呈正相关GSSG血浆水平正相关GSH和GluT血浆水平，以及GSH/GluT和GSH/GSSG比率。

表VIII 统计显著性分析氧化应激生物标志物、酶和非酶抗氧化应激蛋白，使用Pearson’s相关性检验。

表VIII

统计显著性分析氧化应激生物标志物、酶和非酶抗氧化应激蛋白，使用Pearson’s相关性检验。

变量	P值
	TBARS（待定）	MDA公司	GSSG公司	谷胱甘肽	谷胱甘肽/谷氨酸	GSH/GSSG公司	GluT（胶）	钠1	GPx血浆	GPx红细胞	GR血浆	GR红细胞
TBARS（待定）	–	<0.001	0.391	0.931	0.417	0.775	0.884	0.655	0.189	0.352	0.736	0.838
MDA公司	<0.001	–	0.373	0.923	0.551	0.736	0.540	0.811	0.157	0.581	0.432	0.542
GSSG公司	0.391	0.373	–	0.023	<0.001	<0.001	0.043	0.105	0.249	0.603	0.145	0.388
谷胱甘肽	0.931	0.923	0.023	–	0.201	0.030	0.070	0.611	0.014	0.371	0.625	0.339
谷胱甘肽/谷氨酸	0.417	0.551	<0.001	0.201	–	<0.001	0.963	0.062	0.725	0.870	0.102	0.180
GSH/GSSG公司	0.775	0.736	<0.001	0.030	<0.001	–	0.112	0.030	0.775	0.543	0.322	0.294
GluT（胶）	0.884	0.540	0.043	0.070	0.963	0.112	–	0.695	0.100	0.112	0.802	0.284
钠1	0.655	0.811	0.105	0.611	0.062	0.030	0.695	–	0.309	0.321	0.162	0.791
GPx血浆	0.189	0.157	0.249	0.014	0.725	0.775	0.100	0.309	–	0.183	0.673	0.770
GPx红细胞	0.352	0.581	0.603	0.371	0.870	0.543	0.112	0.321	0.183	–	0.854	0.401
GR血浆	0.736	0.432	0.145	0.625	0.102	0.322	0.802	0.162	0.673	0.854	–	0.012
GR红细胞	0.838	0.542	0.388	0.339	0.180	0.294	0.284	0.791	0.770	0.401	0.012	–

[一]MDA、，丙二醛；TBAR，硫代巴比妥酸反应物质；硝基酪氨酸；GSSG，氧化谷胱甘肽；GSH，降低谷胱甘肽；GluT，总谷胱甘肽；超氧化物歧化酶；GR，谷胱甘肽还原酶；谷胱甘肽过氧化物酶；红细胞，红色血细胞。

此外，还观察到GSH/GSSG比率与红细胞SOD1活性呈正相关GSH/GluT比率为（P=0.06）。这是另外的确定GSH血浆水平与血浆中的GPx活性水平，尽管与GPx活性无关红细胞计数（P=0.371）。

讨论

众所周知，氧化应激可能引起生物分子的深刻变化，包括脂质，蛋白质和核酸，因此可能改变细胞功能和结构(32,33). 这解释了为什么氧化应激与衰老和一些与年龄相关的疾病有关包括癌症、阿尔茨海默病、糖尿病和通过遗传和/或表观遗传的心血管疾病机械装置(34). 关注更多尤其是氧化应激在肿瘤发生中的作用最近提出了一般自由基理论，将氧化作用联系起来直接遗传毒性和DNA突变的压力，以及通过自由基诱导间接到表观遗传改变蛋白质表观突变(35). 这个目前的研究报告是第一次，尽我们所能知识，约80%的所谓EHS自我报告患者存在氧化应激，因此可能被认为是患有真正客观的病理性疾病癌症、阿尔茨海默病或其他疾病或病理条件。在本研究中，EMFIS一词被首选为EHS，因为根据使用的临床标准，它不是可以清楚地评估患者是否表现出暴露于电磁场时，公差阈值降低。此外，EMFIS一词优先于IEI-EMF使用由WHO提议，因为本研究包括所有患者明确报告的EMF相关临床症状(4).

在氧化应激期间，活性氧物种（ROS）是超氧阴离子（O）2°−)，过氧化氢（H）2O（运行）2)羟基自由基（OH°）和氢过氧化物自由基（O2H°）。此外，在氧化还原循环中，过渡金属包括铁、铜、镍和钴ROS形成中的作用(36).

铁是最常见的过渡金属，有三种经典反应类型。在第一步中，即Haber-Weiss反应，超氧阴离子减少铁离子转化为亚铁离子：Fe3个++O（运行）2°−→ 铁2++O（运行）2[A] ；而在第二步，即芬顿反应中，亚铁离子与过氧化氢反应生成羟基自由基氢氧化物离子：Fe2++H（H）2O（运行）2→铁3个++哦°+哦−[B] 。

最后，在第三个反应中，铁离子被还原通过与第二个过氧化氢反应生成亚铁离子分子，回收亚铁离子并形成氢过氧化物自由基和一个质子：铁3个++H（H）2O（运行）2→铁2++O（运行）2H°+H+[C] ●●●●。

[B]和[C]的净效应是两种ROS，OH°和O2H°，带H2O作为副产品。

然而，ROS很难直接测量他们的半衰期很短。这解释了为什么测量ROS引起的分子损伤产生的产物是评估和测量氧化应激的常用方法。为此，不同氧化应激和抗氧化反应生物标志物在本研究中选择了具有代表性的可能的生化途径和生物结构改变当生物体受到环境压力时发生(37).

TBAR，反映了非酶活性ROS相关脂质过氧化，其中MDA是最常见的副产品(38)，是常用的生物标志物脂肪氧化应激(21). 这个活性醛MDA是组织损伤的主要指标多不饱和脂肪酸的过氧化作用（PUFA）由参与脂质氧化应激：OH°和O2H°(39).

事实上，脂质过氧化导致许多醛类，其中某些醛类含量很高反应性，可被视为二级信使传播和放大最初的氧化应激。这是尤其是MDA，它是一种双功能的能够与亲核试剂强烈反应的亲电试剂，包括蛋白质中的氨基酸残基(39). 因此MDA加合物在生物学上是剧毒，因为它们会导致通过分子内创造生物分子的结构和功能或分子间蛋白质/DNA交联(40,41).

这可以解释为什么大多数分析已开发用于在其基础上测量MDATBA的衍生化因其相对缺乏特异性(42). 这个是因为TBA（除MDA外）能够做出反应在测试中出现大量其他分子试管；通过使用高温（90–100°C）获得TBA/MDA分光光度法测量冷凝产物、过程能够生成在体外进一步氧化(43). 在本研究中由Londero和Lo Greco开发(24)已使用，这被视为尽量减少由于程序本身造成的偏差，因此可能增加特异性。此外，还测量了TBAR和MDA在同一样品中同时进行，并获得这些值将两个生物标记物与获得的正常范围值进行比较健康对照组。使用该程序，可以证明40-50%的患者在统计学上显著增加TBAR和MDA相对于正常值的平均血浆值，a这一发现强烈表明这些患者存在外周可检测到脂质过氧化状态增加血液。此外，这些数据在总体样本中得到了证实在32名接受TBAR研究的患者中MDA公司。

事实上，这些数据可能并不局限于外周血，因为细胞膜和核膜主要由脂肪酸组成，包括PUFA。过去20年多年来，MDA被认为是一种可靠的脂质过氧化反应许多疾病中的标志物，包括癌症(44–47)，2型糖尿病(48)、心血管疾病(49,50)和阿尔茨海默病(51). 根据目前的数据，EMFIS也是如此，这一结果并不令人惊讶由于氧化应激，包括脂质过氧化在类似公认的病理条件下证明，包括慢性疲劳综合征(52–56)和MCS(57).

然而，如前所述，氧化应激是一个极其复杂的氧化还原循环过程，导致氧化/亚硝化自由基与分子物种攻击超越自然防御机制；因此，它可能不是只有一个生物标记物。除了TBAR和MDA本研究测量GSH，更具体地说，GSSG和NTT为氧化应激生物标志物。谷胱甘肽是主要化合物它决定细胞的氧化还原状态。这是一个原型抗氧化剂参与细胞对有害物质的保护氧化应激的影响，直接作为GPx的辅因子。这个含有硫醇的三肽存在于氧化（GSSG）和还原型（GSH），因此是亲核剂和还原剂能够与亲电和氧化物质反应，使细胞摆脱活性氧与临界分子靶点，包括蛋白质或核酸(58). GSH与GSSG的比率为细胞氧化还原状态的著名标记(59). 因此，GSH和GSSG测量并确定其比率（GSH/GSSG）和总和（GluT用于分析氧化应激和抗氧化应激响应。

在氧化应激期间，GSSG由两个GSH分子被一个过氧化氢分子氧化，根据以下公式：2GSH+H（H）2O（运行）2GSSG+2H型2O【D】；而两个GSH分子通常从GSSG的还原中回收，根据涉及辅酶NADPH:GSSG+NADPH的反应2GSH+NADP+[E] ●●●●。

值得注意的是，根据[D] 由GPx催化，而GSSG的还原根据[E] 被GR催化；因此，根据[D]和[E]红细胞和血浆中这两种关键酶的活性为仔细斟酌的。

本研究表明与正常范围值比较，GSSG等离子体平均值在40%的患者中显著增加，这意味着这些患者呈现出氧化还原状态在他们的外周血中可以检测到。然而，这些数据并不是确定了32名患者的总体样本，其平均GSSG血浆平均值无统计学意义增加。

根据[D]，假设GSSG增加可能导致谷胱甘肽消耗，从而导致抗氧化防御能力下降。这可能解释了以下结果：在所研究的全部患者样本中GSH、GSH/GSSG比值和GSH/GluT比值均为与正常值相比，统计学上显著下降控制值；20-40%的患者这些低于正常下限的生物标志物相比之下，平均值在统计学上显著降低结果也证实了EHS自我报告的患者表现出氧化应激。类似数据在红细胞中获得GSH，但不是GSSG/GluT比率，以德卢卡为单位等(57)研究表明GSSG、GSH/GSSG比率或GSH/GluT比率的测量可以与GSSG/GluT的测量相比，信息量更大EHS中用于评估氧化应激的红细胞比率自我报告患者。

由于GSSG的增加可能是由于GPx活性和/或GR活性下降，如图所示以上，本研究测量了这两个关键的活动红细胞和血浆中的酶。总平均GPx活动所有32例受试者在统计学上均无显著增加在红细胞和血浆中；除两种情况外，平均GR在所有研究的样本病例中，红细胞和血浆中的活性均正常。然而，考虑到18.75%和9.28%的患者红细胞和血浆中GPx活性增加，a差异具有统计学意义。因此，有人建议，GSSG平均水平在外周血可能与GPx活性增加有关约19%的患者，和/或GR活性较低或正常；根据[E]，后一种诱导酶的活性为不足以从GSSG中回收GSH。

在氧化还原过程中，GPx是一种重要的酶，作为过氧亚硝酸盐还原酶，它能够有效地减少过氧亚硝酸盐/过氧亚硝酸（ONOO−/ONOOH）转化为亚硝酸盐（NO），从而保护细胞免受氧化和硝化反应(60). 这个目前的数据与在德卢卡等(57)该研究显示，总体上具有统计显著性与正常值相比，红细胞中GPx活性增加。此外，由于GR活性未在后者中测量研究表明，不可能确认当前的准确性显示红细胞GR活性正常水平的数据血浆。在本研究中，氧化应激的证据然而，EHS自我报告患者得到了很大加强有证据表明，相对于正常值，SOD1意味着RBC值在统计学上显著当考虑到整体患者样本和60%的患者平均值高于正常值上限限制。

这些结果在MCS患者中得到了证实德卢卡等(57)研究，尽管不是针对EHS患者；然而，在这些患者的红细胞SOD1平均值。这种差异的原因在于与当前数据的比较尚不清楚，可能是由于不同的纳入标准，因为这些标准并不明确详细信息见De Luca等研究，和/或使用不同的剂量技术。

SOD1催化超氧物解毒将阴离子分解为过氧化氢和分子氧气。O（运行）2°−+O（运行）2°−+2小时+→ H（H）2O（运行）2+O（运行）2[F] ●●●●。

关于携带EMFIS的患者SOD1活性增加到[B]和[C]，过量生产H2O（运行）2可能会产生过量的OH°和O2H°自由基和哦−离子产生，因此可能会放大氧化压力导致的有害健康影响。这样的假设是这是合理的，因为在本研究中，观察到GPx活性仅在10-18%的病例中增加，从而限制了其H（H）2O（运行）2解毒能力。另一个解毒H的可能性2O（运行）2是过氧化氢酶。然而，本研究中未测量过氧化氢酶活性，尽管有报道称与正常对照组相比EHS自我报告中过氧化氢酶活性趋于下降病人(57)，意味着H（H）2O（运行）2过氧化氢酶的解毒能力可能是在这些患者中是不够的。

根据[D]和[F]，可以通过提供H2O（运行）2SOD1也可能间接促进了GSSG的形成，因为上述报告表明GPx活性正常或甚至增加了EHS自我报告患者。事实上，不管怎样SOD1增加对EHS自我报告的影响值得注意的是，SOD1水平也有类似的增加据报道，阿尔茨海默病患者的活动这种增加的水平已被考虑用于早期诊断以及对这种疾病的治疗监测(61). 这种情况也可能发生在携带EMFIS的患者。

在氧化过程中，过氧亚硝酸盐（ONOO公司−)也可能是由超氧阴离子与一氧化氮在氧化/硝化应激过程，如下所示公式：O2−°+NO→ONOO−[G] ●●●●。

在这个体内反应，自由基NO与O的耦合2−°以形成非自由自由基阴离子ONOO−速度足以超过SOD1的内源性保护作用。尽管NO被视为生理细胞调节剂，由于其快速组织内扩散也被认为是一个关键因素细胞损伤发生的介质炎症相关的病理状况，尤其是神经变性疾病，包括阿尔茨海默病(62). 由于NO产生于在大脑中大量存在，人们认为它可能为在放大过氧亚硝酸盐诱导的中枢神经系统的毒性，从而解释阿尔茨海默病与过氧亚硝酸盐相关氧化应激。事实上，与过去人们认为应激相关毒性作用可能归因于NO，这是知道在体外NO可抑制脂质过氧化(63)；现在很明显确定由于过氧亚硝酸盐每次NO和超氧化物碰撞时，过氧亚硝酸盐为真正有毒的组织损伤剂；过氧亚硝酸盐是一种强大的氧化剂，已被证明通过以相对较慢的速率相互作用和扩散限制细胞内脂质、蛋白质和DNA的容量(62).

这种选择性反应的一个很好的例子是蛋白质中酪氨酸残基的硝化及其形成NTT，因此可作为过氧亚硝酸盐形成的标志物(64)是…的标记氧化/硝化应激(65).

因此，本研究将NTT纳入使用了一系列氧化应激生物标记物。考虑到对60名EHS自我报告患者进行总体抽样调查可以根据他们的NTT值：三分之一的患者在正常范围值，另外三分之一显示值高于正常上限，而患者的数值低于正常下限。值得注意的是，这些发现得到了以下事实的证实：后两类患者的平均值异常，这些数值在统计学上显著增加或相对于正常值减少。

这些数据强烈表明接受研究的患者中，那些在统计学上显著增加的患者NTT平均值，表示为可检测的氧化/硝化外周血应激；总的来说，这些数据被调入质疑为什么三分之二的患者出现正常或在统计学上显著降低了NTT值。增加三分之一患者的NTT值很容易解释为过氧亚硝酸盐生成增加，而且谷胱甘肽（通常是过氧亚硝酸盐的有效清除剂）的减少(60)，可能会导致在过氧亚硝酸盐解毒中。此外，由于SOD1也可能催化过氧化亚硝酸盐介导的酪氨酸硝化(24)，可以假设在许多患者中发现的SOD1活性增加也可能有助于增加NTT检测患者。

解释中正常或降低的NTT值然而，三分之二的患者问题更大。A类似是而非的假设可能是，根据[F]SOD1活性可对机体的超氧物产生强烈的解毒作用阴离子，从而减少过亚硝酸根的形成NTT可能已归一化甚至降低的水平。如果这种假设有待验证，它可能会进一步证实这些患者存在氧化应激，因为解毒过程将涉及增加SOD1活性。A类第二个假设可能与清除由于如上所述，过亚硝酸根能够直接氧化低分子量硫醇，包括谷胱甘肽；这个假设与谷胱甘肽的减少是一致的患者体内观察到的生物利用度。最后，第三个假说可能涉及过氧亚硝酸盐对某些酶，通过诱导酪氨酸硝化和半胱氨酸氧化。与当前数据一致，这可能大多数患者发生GR，GPx和SOD1据报道，在其中一些细菌中，过氧化氢酶可能也是如此De Luca获得的数据等(57). 酪氨酸硝化确实可能影响选择性蛋白质的结构和功能(66)，因此必须考虑是过氧亚硝酸盐介导的毒性的中心过程。它是值得注意的是，酪氨酸硝化，尤其是谷胱甘肽与过氧亚硝酸盐毒性增加相关的消耗，已被提议对其发生和发展作出贡献许多炎症相关疾病，尤其是神经退行性疾病帕金森病(67)、阿尔茨海默病(68)和肌萎缩侧索硬化(69). 关键分子机制这可能是这些病理性疾病发生的原因可能涉及促炎症转录的激活因子核因子（NF）-κB通过过氧化氢(70)和/或过氧亚硝酸盐，可能通过NF-κB激酶依赖性细胞型的经典抑制剂特定途径(71). 进一步为了阐明氧化应激的分子因果作用炎症发作，尤其是，炎症相关疾病。

无论精确的分子机制是什么考虑到这一点，目前的数据强烈表明EHS自我报告患者，更确切地说是携带EMFIS的患者，存在氧化/硝化应激。这已经被证明了通过测量血浆中的TBAR、MDA、GSSG/GSH和NTT，以及红细胞中的诱导酶SOD1和红细胞和血浆中的GPx。这个搜索这些不同参数之间的相关性证实了目前分子解剖的一致性分析。

本研究的一个主要发现是使用有限数量的氧化应激生物标记物，70%–80%EHS自我报告患者的特征是氧化应激的存在。因此，正如许多慢性病理疾病，包括癌症(44–47)、糖尿病(48)、心血管疾病(49,50)、神经退行性疾病(51)和类似的病理学包括慢性疲劳综合征(51–55)和MCS(57)，目前的数据强烈表明EMFIS可能具有某种程度的慢性炎症(3,4)除了氧化应激。这个意味着EMFIS（对于MCS和CFS）是一种新的病理学值得国际生物医学界认可的疾病社区和WHO分类。

原因尚不清楚EHS自我报告患者氧化应激的起源。这个诺卡波效应最初可能是由氧化应激不太可能发生，因为这不可能解释在当前研究(4). 假设某些环境压力源可能与这种病理学的发病需要进一步研究。自先前已经证明MCS经常与EHS自我报告患者中的EHS(3)，理论上人造化学品可能就是这些环境压力源。然而，在本研究中，所有可能与EHS相关的MCS患者因此，根据患者的报告，EMF暴露可能是环境压力源。这一假设值得考虑，因为很多的在体外动物实验研究据报道，极低频（ELF）辐射暴露(72,73)，更重要的是射频（RF）EMF照射(74–79)与氧化有关压力发生，产生的生物效应包括分化变化(72,73)炎症反应和DNA损坏(77,80)；所有这些有害影响都会发生大脑中的频率更高(74,76–79).

最后，可以得出结论，无论因果起源，EMFIS可以被生物学表征为一种新的病理性疾病，因此可以在医学上诊断根据临床症状进行实践，并通过测量：炎症相关生物标记物，包括组胺，蛋白S100B和细胞应激伴侣蛋白Hsp70和Hsp27型(3)；氧化应激生物标志物，包括血浆中的TBAR、MDA、GSS和NTT；和抗氧化防御生物标志物，包括红细胞中的SOD和GSH血浆中的GPx。

致谢

作者向来自癌症治疗研究协会（ARTAC；法国巴黎）和Natalio Awaida博士Labo XV-Paris（法国巴黎）采集血液。作者还感谢Tony Tweedale先生用知识（风险）咨询，用于仔细审查手稿。

缩写：

基金

本研究得到了专项拨款的支持（批准号F13080012）由Osato研究所提供（日本岐阜）和非营利私人研究中心ARTAC（法国巴黎；网址：www.artac.info).

数据和材料的可用性

当前期间使用和分析的数据集可从通讯作者处获得关于合理请求。

作者的贡献

PI和DB设计研究并开发数据收集工具。DB作为首席调查员，领导了整个关于数据收集、数据管理、数据的研究分析和解释。PI和DC直接提供技术参与者选择、数据收集和数据分析和解释。DB写了手稿，PIDB直接提供关键输入，以确定手稿。所有作者阅读并批准了最终手稿。

道德批准和同意参与

本研究是治疗性临床研究的一部分发酵木瓜制剂治疗EHS的试验自我报告患者(4)，是经欧洲癌症与环境研究所同意（ECERI）科学/道德咨询委员会根据当前公认的道德准则，包括所有患者在包含。该调查也已在欧洲临床试验数据库（“EudraCT”）注册号2017-003937-27。

患者同意发布

不适用。

竞争性利益

作者声明他们没有竞争对手利益。

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