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.1997年11月21日;272(47):29859-64.
doi:10.1074/jbc.272.47.29859。

氟二硝基苯修饰半胱氨酸残基使大鼠肝黄嘌呤脱氢酶由脱氢酶型转化为氧化酶型

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氟二硝基苯修饰半胱氨酸残基使大鼠肝黄嘌呤脱氢酶由脱氢酶型转化为氧化酶型

T西野等。 生物化学杂志. .
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摘要

当大鼠肝脏黄嘌呤脱氢酶与氟二硝基苯(FDNB)在pH 8.5下孵育时,总酶活性随着两个赖氨酸残基的修饰逐渐降低到初始活性的极限值,其方式与用FDNB修饰牛乳黄嘌呤氧化酶的方式类似(Nishino,T.,Tsushima,K.,Hille,R.和Massey,V.(1982)J.Biol。化学。257, 7348-7353). 经FDNB修饰后,从钼蝶呤结构域经蛋白水解消化后分离出两个含有二硝基苯基赖氨酸的肽段,并对肽段进行测序,鉴定为Lys754和Lys771。在这些赖氨酸残基的修饰过程中,发现黄嘌呤脱氢酶在培养的早期转化为氧化酶形式。将3H-二硝基苯基并入酶半胱氨酸残基中的量为0.96 mol/酶FAD,68%转化为氧化酶形式。通过与二硫苏糖醇孵育,将修饰酶重新转化为脱氢酶形式,同时释放3H-二硝基苯化合物。用3H-FDNB修饰后,在变性条件下进行羧甲基化,用蛋白酶消化酶。分离并测序了三个3H-二硝基苯基标记肽。经鉴定,修饰后的残基为Cys535、Cys992和Cys1324。这些残基在所有已知哺乳动物酶中是保守的,但Cys992和Cys1324在鸡酶中不保守。通过有限的蛋白水解实验,发现大鼠酶的Cys1324不参与脱氢酶向氧化酶的转化,但似乎与FDNB交替修饰的Cys535和Cys992似乎参与了转化。

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