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.2024年1月26日；19（1）：e0297525。
doi:10.1371/journal.pone.0297525。 eCollection 2024年。

Jagged 2抑制通过Sirtuin 1信号减轻低氧诱导的线粒体损伤和肺动脉高压

刘汉汉（Hanhan Liu） 1, 周攀（音） 2, 吴晓峰 三, 成功 4, 胡俊波 1
附属公司

Jagged 2抑制通过Sirtuin 1信号减轻低氧诱导的线粒体损伤和肺动脉高压

刘汉汉（Hanhan Liu）等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

Notch通路在肺动脉高压（PH）的病理生理中起着重要作用。然而，作为Notch配体之一的Jagged 2（Jag2）的作用仍有待阐明。因此，确定Jag2对PH的贡献及其对肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的影响是本研究的目的。采用腺相关病毒介导的Jag2抑制，探讨Jag2在慢性缺氧（10%O2，4周）诱导的肺动脉高压大鼠模型中评估的外周肺血管重塑中的作用。体外，测定Jag2沉默对低氧（1%O2，24h）诱导的大鼠PASMCs的影响。两组采用双侧非配对Student t检验，多组采用单因素方差分析评估组间差异。利用公开的基因表达数据、实验性PH大鼠模型和低氧诱导大鼠PASMCs，首次证实持续低氧诱导PH的大鼠体内Jag2上调。在慢性低氧诱导的PH大鼠模型中，Jag2缺乏可降低氧化应激损伤、外周肺血管重构（0.276±0.020 vs.0.451±0.033μm，P<0.001，<50μm）和右心室收缩压（36.8±3.033 vs.51.8±4.245 mmHg，P<0.001）。此外，Jag2敲除降低低氧处理大鼠PASMCs的增殖（1.227±0.051 vs.1.45±0.07，P=0.012），增加凋亡（16.733%±0.724%vs.6.56%±0.668%，P<0.001），并抑制线粒体损伤。抑制Jag2可恢复Nrf2/HO-1通路的活性，而Sirtuin 1缺乏则可消除该通路。这些发现表明，Jag2对调节肺血管功能障碍和加速PH至关重要，抑制Jag2表达可抑制PH的进展和发展。

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数字

图1
图1。低氧治疗大鼠和PASMCs中Jag2表达上调。
（A） 的可视化Jag2型GSE85618数据集中的表达式。（B） 通过qRT-PCR、免疫组织化学和western blotting检测正常和低氧治疗大鼠肺组织中Jag2 mRNA和蛋白（C）的表达。N=6只/组。（D） 正常和低氧处理大鼠肺组织α-SMA和Jag2免疫荧光双重染色。比例尺，10μm。（E）Jag2型通过qRT-PCR、免疫荧光（F）和免疫印迹（G）在正常和低氧处理的PASMC中表达mRNA和蛋白。每组N=3，每组进行三次生物复制以进行细胞实验。比例尺，25μm。所示数据为平均值±SD***P<0.001。
图2
图2。抑制Jag2可有效改善大鼠缺氧诱导的PH值。
（A） 气管内滴注AAV.1Jag2四周后肺组织的荧光显微镜图像，绿色荧光表示AAV1在肺组织中的表达和定位。DAPI将细胞核染成蓝色。比例尺=10μm。（B） 对照组和AAV1.Jag2组中Jag2蛋白表达的代表性免疫印迹图像和定量分析。（C） 指定组RVSP（mmHg）的波形图和定量分析。（D） 对照组、HPH和HPH+Jag2i大鼠远端肺血管H&E染色、α-SMA和Masson三色免疫染色的代表性显微图像。比例尺=10μm。（E） 三组的Fulton指数RV/（LV+S）。（F） 相对中膜厚度表示为（总血管面积-管腔面积）与总血管面积（中膜/CSA）的比值。N=6只/组。所示数据为平均值±SD**P<0.01，***P<0.001。
图3
图3。缺乏Jag2可减轻大鼠缺氧诱导的氧化应激损伤。
（A） 对照组、HPH和HPH+Jag2i处理的大鼠肺组织样品中DHE染色和定量分析的比较。（B）不同组的肺SOD、MPO和MDA活性的比较。（C） 对照组、HPH和HPH+Jag2i大鼠中Nrf2和HO-1蛋白表达的代表性免疫印迹图像和定量分析。N=6只/组。所表达的数值为平均值±标准偏差。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
图4
图4。Jag2缺乏可阻止低氧治疗PASMC的增殖并促进凋亡。
（A） 用Si-NC或Si-Jag2转染PASMCs，并通过qRT-PCR和western blotting（B）进行分析。（C） 采用CCK8法检测对照组、低氧组和低氧+Si-Jag2组PASMC活性。（D） 所示组PASMC的EdU分析。（E） 流式细胞术和细胞凋亡的定量分析。（F） 三组中Bax/Bcl2的典型western blots和定量分析*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，每组N=3。每组进行三次生物复制以进行细胞实验。
图5
图5。Jag2敲低可改善缺氧引起的线粒体功能障碍。
（A） 对照组、缺氧组和缺氧+Si-Ag2组的细胞内线粒体膜电位的JC-1染色。JC-1聚集体产生红色荧光；JC-1单体产生绿色荧光。红绿色荧光相对比率的增加表明线粒体去极化。（B） 使用MitoSOX分析和流式细胞术检测三组细胞内线粒体超氧化物水平。（C） 三组Coxiv和Tom20的典型western blots和定量分析（D）*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，每组N=3。每组进行三次生物复制以进行细胞实验。
图6
图6。Jag2通过Sirt1信号调节低氧诱导的PASMCs线粒体损伤。
（A） 通过qRT-PCR比较对照组、缺氧组和缺氧+Si-Jag2组Sirt1-6 mRNA的表达。（B） 缺氧+Si-Jag2和缺氧+Si-Gag2+Si-Sirt1组Sirt1蛋白表达的代表性western blots和定量分析（C）。（D） JC-1染色和所示组细胞内线粒体膜电位的定量分析（E）。（F） 使用MitoSOX分析和流式细胞术检测两组细胞内线粒体超氧化物水平。（G） 两组Coxiv和Tom20的典型western blots和定量分析（H）*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，每组N=3。每组进行三次生物复制以进行细胞实验。
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