跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2023年7月3日；14(11):1946-1955.
doi:10.7150/jca.84170。 电子收集2023。

内质网应激通过PERK-ATF4途径激活TAp73α促进结肠癌细胞凋亡

孙胜南 1 2, 勇毅 1, 志雄Jim Xiao 1, 胡晨 三
附属公司

内质网应激通过PERK-ATF4途径激活TAp73α促进结肠癌细胞凋亡

孙胜南等人。 J癌症. .

摘要

结直肠癌（CRC）是全球第四大确诊癌症。43%的CRC有p53突变。肿瘤抑制因子p53诱导细胞生长停滞和/或凋亡，以应对应激，包括内质网应激。有文献表明，p53基因在50%以上的人类肿瘤中发生突变，并失去其抑癌功能，这表明内质网应激诱导的凋亡可能不依赖于p53。在这项研究中，我们发现内质网应激的激活促进了p53缺失的结肠癌细胞凋亡，同时TAp73α蛋白（p53的同源物）水平增加在体外和体内敲除TAp73α可部分恢复内质网应激诱导的细胞凋亡，表明内质网胁迫以依赖于TAp73β而非p53的方式刺激细胞凋亡。此外，我们发现内质网应激通过PERK信号传导激活TAp73αmRNA和蛋白表达，PERK是未折叠蛋白反应（UPR）的一个分支。此外，PERK通过上调转录因子ATF4的表达来促进TAp73α的表达。ATF4直接激活TAp73α的转录。与这一发现一致的是，ATF4敲低抑制了PERK或ER应激诱导的TAp73α的表达。我们的研究结果表明，内质网应激通过PERK-ATF4信号激活TAp73α促进结肠癌细胞凋亡。因此，延长内质网应激或上调TAp73α可能是结肠癌的治疗策略。

关键词：ATF4；细胞凋亡；内质网应激；PERK公司；TAp73α。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：作者声明不存在竞争利益。

数字

图1
图1
内质网应激诱导独立于p53的癌细胞凋亡。（A-E）具有完整p53（HCT116）的结直肠癌细胞系HCT116第53页+/+)和p53缺失（HCT116第53页-/-)用二甲基亚砜或2μg/mL BFA或TM（内质网应激诱导剂）处理24小时。（A）通过相差显微镜获得细胞形态图像。比例尺=100μm。（B） 通过MTS分析测定细胞活力。（C-D）细胞接受FACS进行凋亡检测（C）和三个独立实验的定量（D）。（E） 如图所示，对细胞进行GRP78、TAp73α、p53和凋亡标记物的western blot分析。根据总半胱氨酸蛋白酶3（T-caspase3）或GAPDH对裂解半胱氨酸酶3（C-caspase2）进行定量。结果表示为三个独立实验的平均值±SD**P<0.01。
图2
图2
内质网应激通过TAp73α诱导癌细胞凋亡。（甲-B）HCT116第53页-/-用或不用ER应激诱导剂（BFA和TM）处理细胞24小时（A）或2μg/mL浓度处理不同时间（B），然后进行western blot分析。将稳定表达shC或shp73的（C-F）p53缺失HCT116细胞用ER应激诱导剂或不加ER应激诱导物处理24 h，然后进行western blot分析，其中根据总caspase 3（T-caspase3）或GAPDH（C）、MTS分析（D）和FACS分析（E）对裂解caspase 3.（C-caspase3.）进行定量，并对三个独立实验的FACS数据进行定量分析（F）。（G） HCT116衍生的全细胞裂解物第53页+/+，HCT116第53页-/-对用TAp73α、TAp73β或ΔNp73α瞬时转染的细胞和HEK-293T细胞进行蛋白质印迹分析。（H-K）HCT116型第53页-/-稳定表达空载体（EV）或TAp73α，然后进行western blot分析，其中切割型caspase 3（C-caspase3）根据总caspase 2（T-caspase2）或GAPDH（H）、MTS分析（I）和FACS分析（J）进行定量，并对三个独立实验（K）的FACS数据进行定量分析。结果显示为三个独立实验的平均值±SD；**，P<0.01。
图3
图3
内质网应激通过PERK途径激活TAp73α。（A） HCT116型第53页-/-用或不用内质网应激诱导剂处理细胞24小时，然后进行qPCR分析。（B） HCT116型第53页-/-对稳定表达shC、shPERK、shATF6α或shIRE1α的细胞进行western blotting。（C） HCT116型第53页-/-对稳定表达shC或shPERK的细胞进行qPCR分析。（D-E）HCT116第53页-/-对稳定表达空载体（EV）或PERK的细胞进行western blot分析（D）和qPCR分析（E）。结果表示为三个独立实验的平均值±SD**P<0.01。
图4
图4
PERK通过ATF4上调TAp73α的表达。（甲-B）HCT116第53页-/-对稳定表达shC或shATF4的细胞进行western blot分析和qPCR分析（B）。（C-D）HCT116第53页-/-对稳定表达空载体（EV）或ATF4的细胞进行western blot分析，其中裂解型caspase 3（C-caspase3）根据总caspase 2（T-caspase2）或GAPDH（C）和qPCR分析（D）进行定量。展示了ATF4结合图案（顶部面板）。用JASPAR（底部面板）预测ATF4在TP73启动子上的推测结合位点，并与ATF4对CHOP启动子（E）的结合位点进行比较。HCT116型p53基因-/-用TM（2μg/mL）处理细胞24小时，然后进行ChIP分析。（G） HCT116型第53页-/-用编码shATF4或shC的慢病毒载体转导稳定表达PERK的细胞，然后进行western blot分析，其中裂解型caspase 3（C-caspase3）根据总caspase 2（T-caspase2）或GAPDH定量。（H） HCT116型第53页-/-稳定表达shATF4或shC的细胞用或不用TM处理24 h，然后进行western blot分析，其中裂解caspase 3（C-caspase3）根据总caspase 2（T-caspase2）或GAPDH定量。结果表示为三个独立实验的平均值±SD**P<0.01。
图5
图5
内质网应激激活抑制结直肠癌生长并促进凋亡体内.（A） 给结肠癌PDX模型小鼠服用或不服用TM（0.25 mg/kg，每周3次）三周。采集肿瘤进行成像，并测量体积（B）和重量（C），然后将其包埋在石蜡中进行IHC分析（D）。（E） 一个工作模型显示，内质网应激通过PERK-ATF4信号激活TAp73α以促进细胞凋亡。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 艾哈迈德·M·结肠癌：2019年临床医生的观点。胃肠病学研究。2020;13:1–10.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 莱文·AJ。p53：8亿年的进化和40年的发现。《自然》杂志评论癌症。2020;20:471–80。-公共医学
    1. Liebl MC，Hofmann TG.p53信号转导在大肠癌中的作用。癌症（巴塞尔）2021；13:2125。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Muller PA，Vousden KH，癌症中的p53突变。自然细胞生物学。2013;15:2–8.-公共医学
    1. Kastenhuber ER，Lowe SW公司。将p53置于上下文中。单元格。2017;170:1062–78.-项目管理咨询公司-公共医学