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.2020年2月;15(2):364-397.
doi:10.1038/s41596-019-0242-7。 Epub 2020年1月13日。

多对照4C:复杂邻近连接产物的长分子测序,以揭示局部合作和竞争染色质拓扑

附属公司

多对照4C:复杂邻近连接产物的长分子测序,以揭示局部合作和竞争染色质拓扑

卡洛·弗默伦等。 Nat协议. 2020年2月.

摘要

我们提出了多接触4C(MC-4C)的实验方案和数据分析工具箱,这是一种新的邻近连接方法,专门用于研究选定基因组位点的高阶染色质接触模式。传统的染色质构象捕获(3C)方法利用片段近接连接产物高效分析成对DNA接触。相比之下,MC-4C设计用于保存和收集邻近连接性片段的大串联,以便在牛津纳米孔或太平洋生物科学平台上进行长分子测序。邻近连接产物的每个串联代表不同单个等位基因的快照拓扑,揭示其多向染色质相互作用。通过使用对感兴趣片段特异的引物进行反向PCR(观点)和DNA大小选择,测序被选择性地靶向包含这种观点的数千种不同的复杂相互作用。定制的统计分析工具箱能够从同一数据集生成背景模型和三向交互配置文件。这些图谱可用于区分两个以上调控序列之间的接触是相互排斥的,还是同时发生在染色质中心。整个过程可以在2周内完成,需要标准的分子生物学和数据分析技能和设备,以及第三代测序平台。

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