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.2017年3月1日；58(3):1801-1810.
doi:10.1167/iovs.16-21392。

Fas小肽抑制剂Met12对碘酸钠损伤后视网膜色素上皮和光受体的保护作用

肖建辉 1, 姚靖宇 2, 林佳 2, 林成茂 2, 大卫·N·扎克 2
附属公司

Fas小肽抑制剂Met12对碘酸钠损伤后视网膜色素上皮和光受体的保护作用

肖建辉等。 投资眼科视觉科学. .

摘要

目的：黄斑变性的一个主要问题是无法减少RPE和感光细胞死亡。这些细胞分别死于坏死和凋亡，但这些死亡途径的上游激活物尚不清楚。在本研究中，我们使用碘酸钠（NaIO3）氧化应激模型来验证Fas受体激活导致RPE和光感受器死亡的假设。

方法：通过股静脉注射给Brown-Norway大鼠注射碘酸钠。RPE和视网膜的体内（眼底摄影、光学相干断层扫描和荧光素血管造影术）和离体（组织学、免疫组织化学、蛋白质印迹和RT-PCR）分析均在基线以及注射NaIO3后的不同时间进行。评估了玻璃体内注射Met12（一种Fas受体的小肽抑制剂）预防RPE和光感受器细胞死亡的能力。

结果：注射NaIO3导致Fas介导的RPE和感光细胞的凋亡和坏死激活。伴随着视网膜外侧小胶质细胞/巨噬细胞数量的显著增加。Met12显著降低Fas介导的死亡途径的激活，导致RPE和光感受器死亡减少，免疫反应降低。

结论：我们的结果表明，NaIO3激活了RPE和光感受器中Fas介导的细胞死亡，Fas受体的小肽拮抗剂Met12显著降低了这种细胞死亡的程度。这些发现表明Fas抑制在保护RPE和光感受器免受氧化应激所致死亡中发挥作用。

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数字

图1
图1
全身注射NaIO3会导致视网膜和RPE中的Fas活化。(一个，B类)暴露于NaIO3后1天和3天，Fas受体和caspase 3转录水平显著增加。(C类)免疫组化显示，Fas受体转录物增加导致视网膜中层和外层Fas受体增加。(D类，电子)分别通过RT-PCR和免疫组织化学检测，RPE中转录物和蛋白质水平的FasL水平均升高。值得注意的是，同型对照没有显示任何非特异性染色*对< 0.05, **对< 0.01.比例尺：20微米。INL，内核层；ONL，外核层；IS，内段；OS，外段；RPE65，分子量为65-kD的视网膜色素上皮蛋白。
图2
图2
全身注射NaIO3可激活RPE中的坏死下垂。(一个)免疫组织化学显示HMGB1蛋白移位出细胞核(红色箭头)全身注射NaIO3后3天。相比之下，对照眼未发现HMGB1移位(白色箭头). (B类)NaIO3处理也导致RIPK3表达增加**对< 0.01. ONL，外核层；IS，内段；OS，外段。比例尺：20微米。
图3
图3
全身给予NaIO3会导致RPE和光感受器显著退化，这可以通过使用Fas受体的小肽拮抗剂Met12进行预处理来预防。(一个)全身接触NaIO3后不同时间点动物视网膜的低倍和高倍显微照片。用玻璃体内注射Met12（a1–d1，a2–d2）或无活性的扰乱肽mMet12（a3–d3，a4–d4）对眼睛进行预处理。NaIO3暴露导致mMet12处理的眼睛（b3，b4）RPE显著破坏7天，这被Met12处理（b1，b2）阻止。在暴露于NaIO3后1个月，mMet12治疗眼（c3、c4、d3、d4）的上覆视网膜严重退化，而Met12治疗的眼（c1、c2、d1、d2）没有严重退化。(B类)视网膜皱褶数量显著减少，或(C类)与mMet12相比，经Met12预处理的眼睛在NaIO3暴露后从视神经测量的视网膜损伤程度*对< 0.05).比例尺：低倍图像200μm，高倍图像25μm。GCL，神经节细胞层；INL，内核层；ONL，外核层。
图4
图4
Met12可减少全身暴露于NaIO3引起的视网膜外变性和免疫细胞浸润。(一个)使用OCT可以在体内观察Met12的保护作用红色箭头显示视网膜外侧塌陷病灶。(B类)用Iba1染色的视网膜平铺物表明，NaIO3暴露导致阳性染色细胞显著增加，而Met12治疗可减少阳性染色细胞，但mMet12治疗不能减少阳性染色的细胞。Iba1阳性细胞位于视网膜内外部。视网膜外侧的圆形染色模式对应于视网膜外侧塌陷的区域。比例尺：100微米。
图5
图5
玻璃体内注射Met12可防止全身暴露于NaIO3引起的RPE损失。(一个)NaIO3暴露2周后眼底照相和荧光素血管造影RPE丢失和高荧光，Met12治疗（a1）可预防，但mMet12（a2）无法预防。在NaIO3暴露1个月后，mMet12治疗的眼睛（a4）不再出现荧光素血管造影的高荧光，可能是由于瘢痕(B类)ZO-1染色的NaIO3全身暴露1个月后采集的RPE平片显示，Met12保留了细胞的正常六边形结构，而mMet12处理则没有。Iba1对扁平支架的染色显示，与Met12治疗的眼睛相比，mMet12治疗眼睛中的小胶质细胞/巨噬细胞数量更多。比例尺：100微米。
图6
图6
玻璃体内注射Met12可显著降低NaIO3诱导的Fas受体激活。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8裂解是激活的Fas受体的第一个下游效应。通过RPE中caspase 8活性测定和Western blot检测到，玻璃体内注射Met12可阻止caspase 8.的裂解和激活(一个，C类)和视网膜(B类，D类)而mMet12没有。
图7
图7
Met12治疗可防止NaIO3诱导的HMGB1蛋白从RPE细胞细胞核移位(一个) (白色箭头)，而mMet12没有(B）(红色箭头).比例尺：20微米。
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