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.2015年12月29日16:24。
doi:10.1186/s12867-015-0052-6。

microRNA-150通过靶向FOXO4促进宫颈癌细胞生长和存活

附属公司

microRNA-150通过靶向FOXO4促进宫颈癌细胞生长和存活

李军(Jun Li)等。 BMC分子生物学. .

摘要

背景:microRNA-150(miR-150)的失调在实体瘤中常见,据报道参与多种重要的生物学过程,如细胞增殖、凋亡和转移。宫颈癌中也检测到miR-150水平升高,但其在癌症进展中的作用尚未研究。

方法:将miRNA-150在宫颈癌中的表达与正常宫颈组织进行比较,并使用qRT-PCR。分别使用流式细胞术、TUNEL分析、qRT-PCR和Western blot检测miR-150对细胞周期和凋亡的影响,以及周期和凋亡相关基因的表达。使用3'非翻译区(UTR)荧光素酶报告子分析确定miR-150的直接靶点。

结果:miR-150促进宫颈癌细胞的生存和生长,而抑制miR-150则抑制这些作用。miR-150还诱导细胞周期从G1/G0向S期进展,导致生长增强。miR-150调节了几个细胞周期和凋亡相关基因CyclinD1、p27、BIM和FASL。此外,miR-150通过靶向其3'UTR直接减少FOXO4的表达,FOXO5调节CyclinD1、p27、BIM和FASL的表达。

结论:综上所述,我们的数据表明,miR-150的升高以FOXO4的表达为靶点,从而调节多个基因的表达,从而导致宫颈癌细胞的生长和存活。

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数字

图1
图1
宫颈癌细胞表达较高水平的miR-150。采用RT-PCR检测10例患者宫颈癌和副癌组织中miR-150的表达。miR-150在宫颈癌组织中的表达与成对副癌组织中miR-150的表达通过直方图表示。b条miR-150在健康供体子宫颈组织中的表达(正常的,n=13)或来自患者的宫颈癌组织(n=108)中的miR-150表达,并且在正常化后向健康供体呈现相对miR-150表达。c(c)miR-150在健康供体子宫颈组织(n=13)或62例不同阶段患者子宫颈癌组织(23例处于二级,19在III级,20在四级)以及人宫颈癌细胞株C-33A中的细胞,通过RT-PCR进行评估
图2
图2
miR-150促进宫颈癌细胞的存活。用siRNA对照或miR-150模拟物(miR-150)或抑制剂转染C-33A细胞48 h,通过TUNEL法和PI染色检测细胞凋亡。给出了TUNEL分析的代表性图片。b条TUNEL阳性细胞的百分比通过直方图进行计数和表示。显示了3个独立实验的平均值±标准偏差(SD)
图3
图3
miR-150促进宫颈癌细胞的生长。miR-150在非转导性C-33A细胞中的表达(嘲弄)或与对照病毒转导后的稳定细胞(控制)或含有miR-150模拟物的病毒(miR-150基因)采用RT-PCR进行分析。这个酒吧代表3个独立实验。b条相同数量的C-33A细胞表达miR-150模拟物或抑制剂,或空载体转导的C-33A细胞(控制)接种于24孔培养皿中培养4d。每天统计细胞数量。显示了3个独立实验的平均值±SD。c(c)PI染色后,对三个稳定的C-33A亚细胞系进行了细胞周期分析,并给出了细胞周期的代表性DNA含量谱。d日分析了3个独立实验中不同细胞周期阶段的细胞百分比,并用直方图表示
图4
图4
miR-150影响参与细胞增殖和凋亡的蛋白质的表达。细胞周期相关基因CyclinD1和p27在三种C-33A亚细胞系中的mRNA表达(控制,miR-150型,miR-150抑制剂)通过RT-PCR测定。显示了3个独立实验的平均值±SD。b条通过RT-PCR评估3个独立实验的三个亚细胞系中凋亡相关基因FASL和BIM的mRNA表达。显示了3个独立实验的平均值±SD。c(c)用western blot检测细胞周期蛋白D1、p27、GAPDH和磷酸化pRb(p-pRb)在亚细胞系中的表达,并用直方图分析和表示这些蛋白的像素密度(底部). 显示了3个独立实验的平均值±SD。d日通过western blot检测FASL、BIM和GAPDH在亚细胞系中的表达,并从3个独立实验中分析这些蛋白的像素密度,并用直方图表示(底部)
图5
图5
miR-150直接靶向FOXO4的3′UTR。western blot检测FOXO4在三个C-33A亚细胞系中的表达。b条显示了用于荧光素酶报告子分析的FOXO4野生型和突变型3′UTR的序列。c(c)将含有FOXO4野生型或突变型3′UTR的报告质粒转染三株C-33A亚细胞系48 h,并测定荧光素酶活性。显示了3个独立实验的平均值±SD。d日miR-150如何通过靶向FOXO4促进宫颈癌细胞周期进展和生存的假设说明

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