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.2015年3月24日；10（3）：e0120143。
doi:10.1371/journal.pone.012043。 2015年电子收集。

溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶1过度表达通过增强血小板活化因子的生物合成促进口腔鳞癌的进展

石田聪美（Tomomi Shida-Sakazume） 1, Yosuke Endo-Sakamoto公司 2, Motoharu Unozawa村 1, 福本纯治 1, Ken Shimada先生 2, 松下Kasamatsu 2, Katsunori Ogawara公司 2, 横井秀美 三, Masashi Shiiba先生 4, 田泽秀基 5, Katsuhiro Uzawa先生 5
附属公司

溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶1过度表达通过增强血小板活化因子的生物合成促进口腔鳞癌的进展

石田聪美（Tomomi Shida-Sakazume）等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

背景：溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶1（LPCAT1）是磷脂酰胆碱代谢重塑途径中的一种胞浆酶，与口腔鳞状细胞癌（OSCC）的相关性尚不清楚。我们研究了OSCC中LPCAT1的表达及其功能机制。

方法：我们分析了OSCC衍生细胞系中LPCAT1 mRNA和蛋白的表达水平。免疫组织化学检测LPCAT1表达水平与原发性口腔鳞状细胞癌临床病理状态之间的相关性。我们建立OSCC衍生细胞系（SAS，Ca9-22）的LPCAT1敲除模型进行功能分析，并检查LPCAT1表达与血小板活化因子（PAF）浓度和PAF受体（PAFR）表达之间的关系。

结果：与人类正常口腔角质形成细胞相比，OSCC衍生细胞系中LPCAT1 mRNA和蛋白显著上调（p<0.05）。免疫组织化学显示，与正常组织相比，原发性口腔鳞癌中LPCAT1的表达显著升高（p<0.05），并且LPCAT1阳性口腔鳞癌与肿瘤大小和区域淋巴结转移密切相关。在LPCAT1敲除细胞中，细胞增殖和侵袭性显著降低（p<0.05）；与对照细胞相比，细胞迁移受到抑制。LPCAT1的下调导致细胞间PAF浓度和PAFR表达降低。

结论：LPCAT1在口腔鳞状细胞癌中过度表达，并与细胞侵袭性和迁移性相关。LPCAT1可能参与口腔癌的肿瘤生长和转移。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1。LPCAT1在OSCC衍生细胞系和OSCC样本中的表达谱。
(A类)量化LPCAT1型通过qRT-PCR分析OSCC衍生细胞系中的mRNA水平。为了确定LPCAT1型，我们使用9个OSCC衍生细胞系（HSC-2、HSC-3、HSC-4、Sa3、SAS、Ca9-22、KOSC2、HO-1-N-1和HO-1-u-1）和HNOK进行qRT-PCR分析。LPCAT1型与HNOKs相比，mRNA在9个OSCC衍生的细胞系中显著上调。数据表示为三次分析值的平均值±SEM(*第页<0.05，Mann-WhitneyU型测试）。(B类)OSCC衍生细胞系和HNOK中LPCAT1的免疫印迹分析。为了研究LPCAT1的蛋白表达状态，我们在相同的OSCC衍生细胞系和HNOK中进行了免疫印迹分析。与HNOK相比，所有OSCC衍生细胞系中LPCAT1蛋白表达水平显著上调。密度测定LPCAT1蛋白数据归一化为GAPDH蛋白水平。这些值以HNOK的百分比表示。(C类)LPCAT1在主要OSCC样本上的IHC。显示了正常口腔组织（a，b）和初级口腔鳞癌（c，d）中LPCAT1蛋白的典型IHC结果。原始放大倍数为100×（a，c）和400×（b，d）。在原发性口腔鳞癌中检测到强烈的LPCAT1免疫反应。(D类)初级OSCC（n=55）和正常OSCC中LPCAT1蛋白表达状态。LPCAT1 IHC评分计算如下：IHC得分=1×（场区弱染色细胞数）+2×（场区中中度染色细胞数。正常口腔组织的LPCAT1 IHC评分范围为0.5至68.5，初级口腔鳞状细胞癌的评分范围为23.7至205.9。OSCC中LPCAT1蛋白表达水平显著(*第页<0.01，曼希特尼U型测试）高于正常口腔组织。
图2
图2。shLPCAT1转染细胞的建立。
(A类)的表达式LPCAT1型shMock和shLPCAT1转染细胞（SAS-和Ca9-22衍生的转染子）中的mRNA。LPCAT1型shLPCAT1转染细胞的mRNA表达显著(*第页<0.05，Mann-WhitneyU型试验）低于shMock转染细胞。(B类)shMock和shLPCAT1转染细胞（SAS和Ca9–22衍生转染体）中LPCAT1蛋白的免疫印迹分析。与shMock转染细胞相比，shLPCAT1转染细胞中LPCAT1蛋白的表达显著降低。
图3
图3。LPCAT1敲除对OSCC衍生细胞系的影响。
(A、 B类)shMock和shLPCAT1转染细胞（SAS-和Ca9-22衍生的转染子）的增殖测定。为了确定shLPCAT1对细胞增殖的影响，将shLPCAT1-和shMock转染的细胞接种在6厘米的培养皿中，密度为1×104活细胞/孔。两个转染细胞连续7天计数。5天后（120小时），与shMock转染细胞相比，shLPCAT1转染细胞（SAS和Ca9–22衍生转染剂）的细胞生长受到显著抑制。结果表示为三次分析值的平均值±SEM。星号表示重要(*第页<0.05，曼恩·惠特尼U型测试）shLPCAT1-和shMock转染的细胞之间的差异。(C、 D类)shMock和shLPCAT1转染细胞（SAS和Ca9–22衍生转染剂）的迁移试验。为了评估LPCAT1敲除对迁移的影响，在shLPCAT1和shMock转染细胞（SAS和Ca9–22衍生转染细胞）的融合培养中制作均匀伤口，并连续24小时每3小时目测封闭程度。平均值是根据从三个单独的腔室获得的数据计算得出的。伤口面积明显缩小(*第页<0.05，Mann-WhitneyU型试验），而shLPCAT1转染细胞中仍存在缺口。(E、 F类)shMock和shLPCAT1转染细胞（SAS和Ca9–22衍生转染剂）的侵袭性测定。为了评估LPCAT1基因敲除对侵袭力的影响，我们将其接种到2.5×105细胞在0.8-μm聚对苯二甲酸乙二醇酯膜的无血清培养基中插入跨阱装置，并在下室中添加补充血清的培养基作为化学引诱剂。在37°C下培养48小时后，将穿透孔的细胞固定、染色，并使用放大×100倍的光学显微镜进行计数。平均值是根据从三个单独的腔室获得的数据计算得出的。shLPCAT1转染细胞穿过孔隙的数量显著减少(*第页<0.05，Mann-WhitneyU型试验）与shMock转染细胞进行比较。
图4
图4。shLPCAT1转染细胞中PAF合成和PAFR表达减少。
(A类)shMock和shLPCAT1转染细胞（SAS和Ca9–22衍生转染剂）中细胞内PAF浓度的评估。为了测定细胞间PAF浓度，我们使用ELISA检测了细胞裂解物，并用蛋白质浓度标准化。根据从三个独立样本获得的数据计算平均值。shLPCAT1转染细胞中PAF的相对浓度显著降低(*第页<0.05，曼希特尼U型试验）与shMock转染细胞进行比较。(B类)评估shMock和shLPCAT1转染细胞（SAS和Ca9–22衍生转染剂）中PAFR的表达。免疫印迹分析表明，与shMock转染细胞相比，shLPCAT1转染细胞中PAFR蛋白的表达显著降低。
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