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.2013年4月;4(4):286-98.
doi:10.1007/s13238-013-2116-z。 Epub 2013年4月3日。

质膜钙ATP酶4b通过钙诱导的与神经元一氧化氮合酶的动态相互作用抑制一氧化氮的生成

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质膜钙ATP酶4b通过钙诱导的与神经元一氧化氮合酶的动态相互作用抑制一氧化氮的生成

段文娟等。 蛋白质细胞. 2013年4月.

摘要

必须严格控制中枢神经系统中Ca(2+)和钙调素非依赖性神经元一氧化氮合酶(nNOS)的激活和失活,以防止过量一氧化氮(NO)的生成。考虑到质膜钙ATP酶(PMCA)是nNOS的关键失活剂,本研究旨在确定PMCA在活细胞中失活nNOS的关键事件,以维持其细胞环境。利用时间分辨Förster共振能量转移(FRET)技术,我们测定了活细胞中Ca(2+)诱导的质膜钙ATP酶4b(PMCA4b)和nNOS之间蛋白质相互作用的发生。PMCA激活显著降低细胞内Ca(2+)浓度([Ca(2+)]i),从而使nNOS失活并减缓NO合成。在PMCA激活引起的基础[Ca(2+)]i下,PMCA4b与nNOS之间未观察到蛋白质相互作用。此外,nNOS的PDZ结构域和PMCA4b的PDZ结合基序对蛋白质相互作用至关重要。还研究了脂筏微结构域对PMCA4b和nNOS活性的影响。与其他PMCA亚型不同,PMCA4相对更集中于筏形部分。脂筏的破坏改变了PMCA4b的细胞内定位,并影响了PMCA4 b与nNOS的相互作用,这表明PMCA4独特的脂筏分布可能是其调节nNOS活性的原因。总之,脂质筏可以作为PMCA4b调节nNOS活性的平台,nNOS与PMCA4b的短暂连接负责nNOS的快速失活。

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