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.2012年6月6日;134(22):9157-9.
doi:10.1021/ja302474a。 Epub 2012年5月24日。

白色念珠菌中硫胺素嘧啶的生物合成:组氨酸与磷酸吡哆醛的显著反应

附属公司

白色念珠菌中硫胺素嘧啶的生物合成:组氨酸与磷酸吡哆醛的显著反应

Rung-Yi Lai先生等。 美国化学会志. .

摘要

在酿酒酵母中,硫胺素嘧啶由组氨酸和磷酸吡哆醛(PLP)形成。所有嘧啶原子的起源都已通过标记研究确定,并表明嘧啶是通过显著的化学作用形成的,这是没有化学或生物化学先例的。在这里,我们报道了密切相关的白色念珠菌嘧啶合酶(THI5p)的过度表达以及酶活性的重建和初步表征。白色念珠菌THI5p的结构显示,PLP通过一个亚胺与靠近PLP的Lys62和His66结合在活性位点。我们的数据表明,THI5蛋白的His66是嘧啶形成的组氨酸来源,嘧啶合成酶是一种单转换酶。

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数字

图1
图1
硫胺素焦磷酸的生物合成酿酒酵母.
图2
图2
THI5催化反应的重组。A) 重组反应需要PLP和Fe(III),但与添加的组氨酸无关。绿色痕迹中显示的少量HMP-P是由于产品与THI5铜化而非合成。B) HMP-P形成反应需要氧气。
图3
图3
使用A)形成HMP-P的MS分析14N-THI5p和B)15N-THI5p。
图4
图4
THI5p在尿素中变性并复性后具有活性。红色痕迹:尿素变性前由THI5p产生的HMP。蓝色痕迹:THI5p在8M尿素中变性并通过缓慢透析复性后产生的HMP。
图5
图5
的活动站点白色念珠菌THI5p显示PLP通过亚胺与紧邻PLP的Lys62和His66结合。
图6
图6
从PLP和活性位点His66形成HMP-P的机械建议。

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引用人

工具书类

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