Microtubules, the ER and Exu: new associations revealed by analysis of mini spindles mutations

doi:10.1016/j.mod.2009.03.002

.2009年5月-6月；126(5-6):289-300.

doi:10.1016/j.mod.2009.03.002。 Epub 2009年3月19日。

微管、ER和Exu：通过分析小纺锤体突变发现的新关联

南希·乔·波克里夫卡¹, 安娜·佩恩·托宾, 凯萨琳·M·雷利-苏斯曼, 萨沙·斯瓦茨曼

附属公司

PMID： 19303437
预防性维修识别码： PMC2731561型
内政部： 2016年10月10日/j.mod.2009.03.002

微管、ER和Exu：通过分析小纺锤体突变发现的新关联

南希·乔·波克里夫卡等。机械开发. 2009年5月-6月.

.2009年5月-6月；126(5-6):289-300.

doi:10.1016/j.mod.2009.03.002。 Epub 2009年3月19日。

作者

南希·乔·波克里夫卡¹, 安娜·佩恩·托宾, 凯萨琳·M·雷利-苏斯曼, 萨沙·斯瓦茨曼

附属

¹美国纽约州波基普西Vassar学院生物系12604。napokrywka@vassar.edu

PMID： 19303437
预防性维修识别码： PMC2731561型
内政部： 2016年10月10日/j.mod.2009.03.002

摘要

在果蝇卵子发生过程中，有组织的微管网络协调特定RNA的定位、卵母细胞核的定位和卵质流事件。我们利用微管相关蛋白小纺锤体（msps）的突变来破坏微管在中、晚期发育过程中的功能，并表明msps是这些基于微管的事件所必需的。由于内质网（ER）组织受其他系统中微管的影响，我们假设使用msps改变微管动力学可能会影响护理细胞和卵母细胞中ER的结构和组织。使用GFP标记的网状蛋白样1和蛋白质二硫键异构酶监测内质网组织。对活细胞的分析表明，微管结合介导卵母细胞内内质网成分的运动。令人惊讶的是，卵母细胞中管状内质网的分布和行为与普通内质网不同，表明内质网这两个隔室与微管的相互作用不同。我们发现Exu颗粒的形态依赖于msps，并且Exu与msps突变体中的管状内质网特异性相关。我们的结果扩展了之前对海绵体和融合体的描述，表明两者都是与微管相互作用并在卵子发生过程中持续存在的动态结构的表现。

PubMed免责声明

数字

**图1。微管依赖性事件受以下因素影响毫秒突变**
野生型卵母细胞**（A-C）**和*毫秒^对/毫秒²⁰⁸* **（D-F）**雌性被固定并用Sytox Green染色以显示卵母细胞核（箭头）的位置，AlexaFluor-568卵磷脂用于显示肌动蛋白丝。野生型细胞核位于卵母细胞的前背角，其相对于背侧附属物的位置证明了这一点。在毫秒卵母细胞细胞核在第10阶段之后不再位于前面，尽管它似乎仍与细胞皮层保持接触（参见插图(E类)). 野生型10B期卵母细胞(**G公司**)和*毫秒^对/毫秒²⁰⁸*(我)将雌性动物解剖成卤素油27，并使用尼康共焦显微镜的荧光素通道成像。以10秒的间隔收集五个连续图像并进行合并。在实验的时间过程中位置发生变化的粒子显示为拖缆。野生型卵母细胞有明显的定向运动，但野生型卵卵母细胞无定向运动毫秒卵母细胞，表现出这些突变体中常见的分层细胞质。**（H、J）**单个粒子的运动被跟踪超过500秒/50帧。单个颗粒追踪用于计算野生型和*毫秒^对/毫秒²⁰⁸*10B期卵母细胞（见正文）。(**K（K）**)时间推移叠加用于计算wt和*毫秒^对/毫秒²⁰⁸*10b期卵母细胞（每个基因型20个）（底部）。条形图表示标准偏差。

**图2。卵巢细胞质中微管减少或缺失毫秒卵室**
野生型(**A、 C类**)或*毫秒^对/毫秒²⁰⁸*(**B、 D类**)卵巢被固定，并用荧光结合微管蛋白抗体和荧光结合2°抗体染色。第8/9阶段**（A、B）**，影响毫秒微管组织主要局限于护理细胞。完整10B期卵母细胞的横切面。微管在带有箭头的野生型卵母细胞中显示，在毫秒卵母细胞。

**图3。GFP-Exu在野生型和毫秒卵室**
野生型表达GFP-Exu的卵箱(**A、 C类**)或毫秒(**B、 D类**)女性。第8阶段的卵室如所示(**A、 B类**)和10期卵母细胞(**C、 D类**). 这个毫秒突变导致Exu蛋白聚集。秋水仙素喂食在*毫秒^对*/TM3卵室(F类)与对照TM3卵室相比(E类). 野生型鸡蛋(**G公司**)Exu蛋白在第14阶段降解，但Exu蛋白通常在毫秒卵母细胞(**H（H）**)以及在喂食秋水仙碱的雌性卵母细胞中(我).

**图4。PDI-GFP在野生型和毫秒卵室**
野生型PDI-GFP分布(**A-C公司**)，或毫秒(**D-F公司**)卵室（用指骨蛋白（红色）复染）。第9阶段(**A、 B类**)PDI在哺乳细胞中呈网状排列，在卵母细胞中浓度较高。*Msps公司*突变**（D、E）**导致PDI-GFP分布出现轻微扰动。在第10阶段，PDI在野生型卵母细胞中均匀分布(C)，但其分布在毫秒突变体(F类).（G-I）PDI-GFP的分布(**G公司**)和Exu(**H（H）**)在第9期的滋养细胞细胞质中毫秒对卵室进行了比较。只观察到信号中的部分重叠**（一）**.

**图5。Rtnl1-GFP在野生型和毫秒卵室**
野生型Rtnl1-GFP的分布(**A-C，G**)，或毫秒(**D-F公司**)卵室（用指骨蛋白（红色）复染）。第8和第9阶段(**A、 B类**)Rtnl1在滋养细胞中呈网状排列，在卵母细胞中浓度较高。用*表示的区域是通过环形渠道的横截面，在插图中进行了放大。在第10阶段，Rtnl1修饰长纤维，使人想起卵母细胞中的微管(C).消息突变**（D-F）**导致Rtnl1-GFP聚集，与Exu蛋白非常相似。

**图6。Rtnl1与微管和Exu的共定标**
野生型11期卵母细胞细胞质中的纤维被Rtnl1-GFP修饰**（A-D）**并在这些相隔40秒拍摄的实时图像中以波纹状的动作移动。表达Rtnl1-GFP的野生型10B期卵母细胞**（E）**微管蛋白染色**（F）**.Rtnl1与流卵母细胞中的微管共定位(**G公司**). 箭头表示该阶段典型的平行皮层下微管。毫秒表达Rtnl1-GFP的卵室(**H（H）**)被Exu抗体染色(我). Exu与Rtnl1在毫秒突变体(J型). 中的虚线**（J）**表示护士细胞边界。

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