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.2009年2月26日;457(7233):1163-7.
doi:10.1038/nature07611。 Epub 2008年12月31日。

吡咯烷酰-tRNA合成酶-tRNA(Pyl)结构揭示了正交性的分子基础

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吡咯烷酰-tRNA合成酶-tRNA(Pyl)结构揭示了正交性的分子基础

野泽佳彦等。 自然. .

摘要

吡咯赖氨酸(Pyl)是第22种天然氨基酸,由UAG基因编码,并通过独特的抑制tRNA(Pyl)插入蛋白质中(参考文献1)。甲烷癌科产生Pyl并表达含有Pyl的甲基转移酶,允许在甲胺上生长。在两种细菌中也发现了同源甲基转移酶和Pyl生物合成和编码机制。Pyl编码由吡咯烷酰-tRNA合成酶(PylRS)维持,该酶催化Pyl-tRNA(Pyl)的形成(参考文献4、5)。Pyl并不是遗传密码的新成员。PylRS已经存在于最后一个普遍的共同祖先中;然后它在利用甲胺作为能源的生物体中持续存在。最近的蛋白质工程研究将非标准氨基酸添加到遗传密码中。该技术依赖于“正交”tRNA合成酶-tRNA对的定向进化,其中一个工程化的氨酰-tRNA合成素(aaRS)用非标准氨基酸特异且专一地酰化正交tRNA。对于派尔来说,大约30亿年前,自然进化过程发展出了这样一个系统。当转化为大肠杆菌时,巴氏甲烷八叠球菌PylRS和tRNA(Pyl)在体内作为正交对发挥作用。这里我们证明了脱硫杆菌PylRS-tRNA(Pyl)在体内外是一对正交的,并给出了这对正交的晶体结构。古老的PylRS-tRNA(Pyl)的出现使蛋白质和tRNA的独特结构特征得以进化。这些结构元素表现出复杂的、专门化的aaRS-tRNA相互作用表面,与任何其他已知的aaRS-tRNA复合物中观察到的表面截然不同;正是这种普遍性质奠定了正交性的分子基础。

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数字

图1
图1
整体结构。(a) DhPylRS亚单位a,显示为带状模型,由tRNA结合域1(1.68,蓝色)、催化域(69.96和128.266,米色)、突起域(97.127,黄色)和C末端尾部(267.288,浅绿色)组成,基序2环(160–170)呈红色,Pyl识别环(212–218)呈紫色。(b) 二聚体DhPylRS:tRNA派尔复杂结构,显示为带状模型。不对称单元包含一个PylRS二聚体和两个tRNA派尔分子;PylRS-A(颜色如面板A所示)、PylS-B(灰色)、tRNA-I(蓝色)和tRNA-II(粉红色)。(c) tRNA的结合派尔(带状表示)到DhPylRS的表面模型,结构域的颜色如(a)所示。
图2
图2
第一类(a)和第二类(b)tRNA合成酶:tRNA复合物在结构上是一致的。只显示催化核心结构域的单个单体,根据结构相似性进行颜色编码。从受体茎的主沟侧看,tRNA的磷酸骨架轮廓如图所示(tan),tRNA派尔以紫色显示。在空间填充表示法中,谷氨酰腺苷酸(a)和吡咯烷酰腺苷酸(b)分别突出了I类和II类活性位点囊。由于需要显示两个aaRS家族相对于tRNA的同一方向,小底物部分被蛋白质主干遮挡。
图3
图3
DhPylRS:tRNA派尔接口。(a) 显示通过DhPylRS的模体2环识别CCA末端的视图。(b)显示tRNA识别的视图派尔DhPylRS的受体螺旋。(c,d)显示tRNA识别的视图派尔DhPylRS堆芯结合表面的最小堆芯。
图4
图4
PylRS结构的比较:(a)DhPylRS:tRNA派尔复合物,(b)DhPylRS apo,(c)MmPylRS:Pyl-AMP复合物(PDB代码2zim)。结构根据B因子着色(表示更多[红色]或更少[蓝色]结构动态区域),面板a中标记了四个显示不同结构中构象变化的区域。为了清晰起见,只显示了二聚体的一个亚单位。

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