在哺乳动物囊胚中，内细胞团（ICM）分为外胚层和下胚层。牛植入前胚胎的体外培养通常最多进行有限的持续时间，直到胚泡形成，因此，尚不清楚ICM的分化是否以及何时在体外发生。在牛种中，外胚层的形成以中间丝蛋白波形蛋白的表达为特征。在本研究中，研究了波形蛋白在体外扩展培养（EIVC）条件下维持的牛囊胚中的时空表达。通过体外成熟、受精和培养产生的牛囊胚在体外进一步培养至第12天（受精=第0天）在改良的人工输卵管液中。第8天的早期囊胚、扩张囊胚或孵化囊胚以及第9天和第12天的孵化囊胚分别接受抗波形蛋白单克隆抗体的间接免疫荧光分析和半定量逆转录聚合酶链反应分析，以检查波形蛋白的表达。大多数囊胚（25/26）在第8天没有表现出任何明显的波形蛋白免疫染色。另一方面，在第9天和第12天，在孵化的囊胚中，波形蛋白分别占59.1%（13/22）和86.4%（19/22）。波形蛋白被检测为定位于ICM一部分内的细丝，其表达水平在胚胎中不同。在第8天，50%（3/6）的囊胚中未检测到波形蛋白转录物，而在第9天和第12天，所有囊胚中均检测到了波形蛋白。对第8天胚泡的检查表明，与缓慢发育的胚泡相比，快速发育的胚囊（在授精后168小时已经扩大的胚泡）的波形蛋白转录物水平明显更高。这些结果表明，正如波形蛋白的表达所反映的那样，在EIVC维持的牛囊胚中，ICM是动态分化的，波形蛋白表达较高可能反映了胚胎发育能力较高。
