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.2007年7月10日；581(17):3197-203.

doi:10.1016/j.febslet.2007.06.004。 Epub 2007年6月12日。

吡咯烷酰-tRNA合成酶的氨基末端结构域在体外是不必要的，但在体内活动是必需的

斯蒂芬妮·海岭¹, 亚历山大·安布罗杰利, 萨拉斯·冈德拉帕利, 帕特里克·奥多诺休, 卡拉·R·波利卡波, 迪特尔·索尔

附属公司

PMID： 17582401
预防性维修识别码：项目编号：C2074874
内政部： 2016年10月10日/j.febslet.2007.06.004

吡咯烷酰-tRNA合成酶的氨基末端结构域在体外是不必要的，但在体内活动是必需的

斯蒂芬妮·海岭等。 FEBS信函. 2007.

.2007年7月10日；581(17):3197-203.

doi:10.1016/j.febslet.2007.06.004。 Epub 2007年6月12日。

作者

斯蒂芬妮·海岭¹, 亚历山大·安布罗杰利, 萨拉斯·贡德拉帕利, 帕特里克·奥多诺休, 卡拉·R·波利卡波, 迪特尔·索尔

附属

¹耶鲁大学分子生物物理和生物化学系，美国康涅狄格州纽黑文06520-8114。

PMID： 17582401
预防性维修识别码：项目编号：C2074874
内政部： 2016年10月10日/j.febslet.2007.06.004

摘要

吡咯赖氨酸（Pyl）通过框架内UAG终止密码子共同翻译插入到甲烷癌科和脱硫杆菌hafniense中的蛋白质子集中。这种UAG密码子的抑制是由Pyl琥珀色抑制tRNA，tRNA（Pyl）介导的，其通过吡咯烷基tRNA合成酶（PylRS）与Pyl氨基酰化。我们比较了几种古生和细菌PylRS酶对tRNA（Pyl）的行为。平衡结合分析表明，古代PylRS蛋白与tRNA（Pyl。在氨基酰化中，古菌PylRS酶不能区分古菌和细菌tRNA（Pyl）物种，而细菌PylRS对同源同源tRNA表现出明显的偏好。我们还表明，古菌PylRS中存在的氨基末端延伸对于体外活性是可有可无的，但体内PylRS功能需要。

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数字

图1
tRNA的三叶草叶结构^派尔从巴克尔先生福萨罗，M.伯托尼，以及D.哈夫宁箭头表示巴克尔先生MS tRNA^派尔根据标准tRNA编号，圆圈代表缺失的核苷酸[23]。

图2
各种PylRS的活化和充电特性。（A） PylRS激活Cyc的时间进程巴克尔先生福萨罗(♦),巴克尔先生MS（▲），嗜热分枝杆菌(●),acetivorans支原体（□），和D.哈夫宁（○）.所有PylRS蛋白均在与赖氨酸（×）和无氨基酸（▹）的反应中进行分析，未观察到任何活化。体外tRNA的氨基酰化作用^派尔PylRS与Cyc的转录本来自：（B）巴克尔先生福萨罗（C）巴克尔先生理学硕士（D）acetivorans支原体，（E）嗜热分枝杆菌，（F）D.哈夫宁.tRNA^派尔来自巴克尔先生MS（■），巴克尔先生Fusaro（●），M.伯托尼（▲），以及D.哈夫宁（○）.反应条件见材料和方法。

图3
体内tRNA的氨基酰化作用^派尔如northern杂交所示。总tRNA提取自大肠杆菌携带质粒转化XAC/A24菌株巴克尔先生福萨罗派特或者巴克尔先生Fusaro PylRS突变体D2A（1巷）、K3A（2巷）、K4A（3巷）、D7A（4巷）、S11A（5巷）、T13A（6巷）、W16A（7巷）、D2A/K4A（8巷）、S11A/T13A巴克尔先生Fusaro PylRS（Wt），野生型D.哈夫宁PylRS（11号车道）和巴克尔先生Fusaro PylRS从其前106个氨基酸中截短（第12通道）。所有转化子均在10mM Cyc的存在下生长。将得到的tRNA产物加载到酸性凝胶上。转移到硝化纤维素膜上后，将样品与tRNA杂交^派尔特异性寡核苷酸探针。tRNA的位置^派尔和Cyc-tRNA^派尔显示。

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