Identification of proteins within the nuclear factor-kappa B transcriptional complex including estrogen receptor-alpha

doi:10.1016/j.ajog.2006.12.033

比较研究

.2007年4月；196（4）:394.e1-11；讨论394.e11-3。

doi:10.1016/j.ajog.2006.12.033。

包括雌激素受体α在内的核因子-κB转录复合物中蛋白质的鉴定

伊尔夫·费尔德曼¹, 杰拉尔德·M·费尔德曼, 夏洛特·莫巴拉克, 杰弗里·邓克伯格, 金伯利·K·莱斯利

附属公司

PMID： 17403432
PMCID公司：项目经理2175481
内政部： 2016年10月10日/j.ajog.2006年12月33日

比较研究

包括雌激素受体α在内的核因子-κB转录复合物中蛋白质的鉴定

伊尔夫·费尔德曼等。美国妇产科杂志. 2007年4月.

.2007年4月；196（4）:394.e1-11；讨论394.e11-3。

doi:10.1016/j.ajog.2006.12.033。

作者

伊尔夫·费尔德曼¹, 杰拉尔德·M·费尔德曼, 夏洛特·穆巴拉克, 杰弗里·邓克伯格, 金伯利·K·莱斯利

附属

¹科罗拉多大学健康科学中心妇产科，丹佛，科罗拉多州，美国。

PMID： 17403432
PMCID公司：项目经理2175481
内政部： 2016年10月10日/j.ajog.2006年12月33日

摘要

目标：本研究的目的是确定雌激素受体（ER）和核因子-κB（NF-kappaB）之间是否发生串扰，评估ER/NF-kappaB-相互作用的功能后果，并确定可能参与NF-kapbaB转录复合物的其他未知调节蛋白。

研究设计：电迁移凝胶位移、报告基因分析和质谱用于鉴定与NF-kappaB脱氧核糖核酸（DNA）响应元件相互作用的蛋白质。

结果：ER和NF-kappaB的p65亚单位在DNA上共定位。这种相互作用抑制了ER转录活性。对与NF-kappaB/DNA复合物结合的蛋白质进行序列测定，确定了DNA修饰酶、支架蛋白、伴侣和核基质元素。

结论：这些研究已经确定了雌激素受体和NF-κB的p65亚基之间的抑制性相互作用，这对雌激素在妊娠和癌症中的作用具有意义。还发现了与NF-kappaB DNA反应元件上的蛋白质复合体结合的新的辅助蛋白质。

PubMed免责声明

数字

**图1。HTR8细胞滋养层细胞和石川子宫内膜癌细胞中的NF-κB亚型**
当蛋白质提取物与放射性标记的NF-κB DNA反应元件杂交时，在HTR8和石川H细胞中鉴定出三个复合物：p50/RelA（p65）带、中间复合物和p50/p50带。IL-1被用作NF-κB核活性的诱导剂。使用过冷（未标记）NF-κB DNA反应元件寡核苷酸竞争特异性复合物，使用冷雌激素反应元件竞争较少特异性带。未结合探针位于凝胶底部。

**图2。NF-κB和ER与反应元件的结合**
在前三个通道中，雌激素DNA反应元件（ERE）被标记并用作探针。在最后五个通道中，NF-κB DNA反应元件被用作探针。通过NF-κB p65亚单位和ER抗体的超移位带确保与探针的特异性结合。使用过多的冷寡核苷酸来确保带的特异性。请注意，在第二和第三通道中，p65从ERE探测器超移。相反，在第六通道中，ER从NF-κB反应元件超转移。

**图3。氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告基因检测**
如材料和方法所述，将雌激素驱动的启动子置于CAT基因上游。细胞单独用载体（第1车道）、白细胞介素-1（第2车道）、雌二醇（第3车道）和雌二醇+白细胞介素-1（第4车道）处理。用密度计测定CAT基因的折叠诱导。误差线=SEM，由三个独立实验计算得出。

**图4。NF-κB/DNA结合蛋白的鉴定**
众所周知，NF-κB作为一种转录因子，与应答基因启动子中的一致DNA反应元件结合。然而，NF-κB如何向由RNA聚合酶和其他成员组成的起始前复合物（PIC）发出信号尚不清楚。B.这些研究确定ER是一种当与DNA结合时能够与NF-κB的p65亚单位结合的蛋白质（左图）。当ER与雌激素反应元件结合时也证实了这一点（右图）。通过报告基因分析，这种相互作用抑制了ER介导的CAT基因转录。C.质谱鉴定出大量从NF-κB/DNA复合物中洗脱出来的蛋白质。这些蛋白质包括箭头上方列出的蛋白质以及肌动蛋白、肌动蛋白和冠状病毒，显示它们与核基质和RNA聚合酶接触。

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[2] Bacot SM，Lenz P，Frazier-Jessen MR，Feldman GM。朊蛋白肽PrP106-126激活可在人类单核细胞衍生的树突状细胞中诱导NF-kappaB驱动的促炎反应。白细胞生物学杂志。2003;74:118–25.-公共医学

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