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.2006年12月；25(6):989-1001.
doi:10.1016/j.immuni.2006.10.011。 Epub 2006年11月16日。

基质细胞网络调节淋巴结中淋巴细胞的进入、迁移和区域性

马克·巴杰诺夫 1, 杰克逊·G·伊根, 莉莉·Y·库, 让·皮埃尔·劳吉尔, Brau炸薯条, 尼古拉·格莱肯豪斯（Nicolas Glaichenhaus）, 罗纳德·N·日尔曼
附属公司

基质细胞网络调节淋巴结中淋巴细胞的进入、迁移和区域性

马克·巴杰诺夫等。 免疫. 2006年12月.

摘要

进入淋巴结（LNs）后，B细胞迁移至滤泡，而T细胞则留在副皮质，每种淋巴细胞类型在这些不同的区域内都表现出明显的随机迁移。除了趋化因子外，导致这种空间分离和观察到的淋巴细胞运动模式的因素特征很差。通过结合共焦显微镜、电子显微镜和活体显微镜，我们发现纤维母细胞网状细胞网络调节了原始T细胞进入副皮质的途径，并支持和定义了T细胞在该区域内的运动限制，而一个独特的滤泡树突状细胞网络同样是滤泡B细胞运动的基质。这些结果突出了间质显微解剖在协调LN内细胞迁移中的中心作用。

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图1
图1
T细胞与LN成纤维细胞网状网络密切相互作用。（A）Hu-CD2 GFP小鼠LN 10μm厚切片的共焦图像，其中所有T细胞均表达GFP（蓝色）。FRC分泌标记ERTR-7（绿色）和B细胞标记B220（红色）的位置用于显示ERTR-7-染色从B细胞滤泡中被排除。最初是用16倍物镜拍摄的。（B） 野生型LN切片的共聚焦图像，用于染色结蛋白（红色）和ERTR-7（绿色+FRC-衍生矩阵和结蛋白形成的网络+FRC纤维。最初是用63x物镜拍摄的。另请参阅电影S1。（C，D）野生型小鼠静脉注射10 x 106CFSE标记的T细胞（C）或未注射（D）。12小时后，两组小鼠均灌注固定液。（C） 受体LN切片的代表性共焦图像，显示转移的CFSE标记的T细胞（蓝色）与FRC纤维紧密结合（箭头指向迁移细胞中染料聚集的尾足动物）。最初是用63x物镜拍摄的。另请参阅电影S2和S3。（D） T细胞区与FRC纤维相关的淋巴细胞的典型SEM照片。可见包裹在FRC鞘内的胶原纤维（*），以及从T细胞延伸至FRC纤维的微绒毛。
图2
图2
T细胞在FRC网络上爬行。（A）产生具有GFP的嵌合小鼠的方案+财务报告准则。（B） 在结蛋白（蓝色）和ERTR-7（红色）染色后，用共焦显微镜检查嵌合体（绿色）小鼠20μm厚的LN切片。最初是用63x物镜拍摄的。另请参阅电影S4。（C） 20 x 106将SNARF-1标记的T细胞静脉注射到嵌合小鼠中。三到四小时后，使用活体2-P显微镜对腘窝淋巴结进行成像。数据显示，单个T细胞（红色）随时间在FRC纤维（绿色）上以12μm厚的体积移动的活体快照。最后一个面板显示了所有T细胞位置随时间的叠加，用虚线表示各个快照中的路径和细胞位置。另请参见图S5A和电影S5、S6和S8。（D） 在活体4D数据集中，T细胞的定量显示出其在嵌合体动物中GFP标记的基质纤维上或下的位置。
图3
图3
T细胞通过“出口坡道”离开HEV。（A，B）泛素-GFP嵌合体（绿色）LN切片的共聚焦图像，ERTR-7（红色）、PNAd（蓝色）（A）或结蛋白（蓝色）表达染色，显示HEV的厚内皮细胞和包膜FRC鞘。绿色内皮细胞内的大透明区域是迁移的淋巴细胞。最初使用16x和63x物镜进行成像。（C） 嵌合体的腘LN经手术制备用于活体成像和60 x 106静脉注射SNARF-1标记的T细胞。用2-P显微镜观察T细胞（红色）从HEV（绿色血管）向实质的渗出。数据显示，随着时间的推移，T细胞退出HEV的活体快照。另请参阅电影S9（D）HEV TEM图片，该图片显示T细胞在相邻FRC之间离开血管。
图4
图4
FRC网络定义了T细胞迁移范围（区域）。（甲、乙）20 x 106将CFSE标记的T细胞转移到野生型小鼠体内。（A） 12小时后，对20μm厚LN切片进行ERTR-7（红色）和B220（蓝色）染色，以分别显示纤维网络和B细胞区域以及重叠区域。图片显示了转移的T细胞（绿色）在T/B边界与网络接触的共焦图像。（B） T细胞定量/ERTR-7+B220中的网络关联+富集区。最初是用63x物镜拍摄的。
图5
图5
B细胞与LN滤泡树突状细胞网络密切相互作用。（A）Hu-CD2 GFP小鼠LN 10μm厚切片的共焦图像，其中所有T细胞均表达GFP（蓝色）。FDC网络（FDC-M2）的位置+，绿色）在B电池区域内（B220+，红色）最初是用16倍物镜拍摄的。（B） 野生型LN切片的共聚焦图像，染色为结蛋白（红色）和FDC-M2（绿色），最初使用63x物镜成像。（C） 野生型小鼠静脉注射10 x 106CFSE标记的B细胞。24小时后，用固定液对小鼠进行灌注。最初使用63x物镜对受体LN切片的代表性共焦图像进行成像，该图像显示转移的CFSE标记的B细胞（蓝色）与FDC纤维紧密相关。
图6
图6
B细胞在FDC网络上爬行。（A）20 x 106将SNARF-1标记的B细胞经静脉注射到嵌合小鼠体内。24小时后，使用活体2-P显微镜对腘窝淋巴结进行成像。图像显示了单个B细胞（红色）在12μm厚的FDC纤维（绿色）上随时间移动的活体快照。最后一个面板显示了所有B单元位置随时间的叠加。另请参阅电影S13。（B） 在活体4D数据集中，B细胞的定量显示出它们在嵌合体动物中GFP标记的基质纤维上或下的位置的变化。
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