Proteomic identification of Drosophila melanogaster male accessory gland proteins, including a pro-cathepsin and a soluble gamma-glutamyl transpeptidase

doi:10.1186/1477-5956-4-9

.2006年5月2日4时9分。

doi:10.1186/1477-5956-4-9。

果蝇雄性副腺蛋白质的蛋白质组学鉴定，包括前钙肽和可溶性γ-谷氨酸转肽酶

迈克尔·沃克¹, 卡罗琳·M·雷利特, 杰夫·N·基恩, 尼尔·奥德斯利, 穆罕默德·萨吉德, 艾伦·D·希尔拉斯, R Elwyn Isaac先生

附属公司

PMID： 16670001
预防性维修识别码：项目经理1462989
DOI（操作界面）： 10.1186/1477-5956-4-9

果蝇雄性副腺蛋白质的蛋白质组学鉴定，包括前钙肽和可溶性γ-谷氨酸转肽酶

迈克尔·沃克等。蛋白质组科学. 2006.

.2006年5月2日4时9分。

doi:10.1186/1477-5956-4-9。

作者

迈克尔·沃克¹, 卡罗琳·M·雷利特, 杰夫·N·基恩, 尼尔·奥兹利, 穆罕默德·萨吉德, Alan D Shirras公司, R Elwyn Isaac先生

附属

¹英国利兹大学生物科学学院，利兹，LS2 9JT。bgymjwa@leeds.ac.uk

PMID： 16670001
预防性维修识别码：项目经理1462989
DOI（操作界面）： 10.1186/1477-5956-4-9

摘要

背景：在黑腹果蝇中，男性精液中含有对生殖成功至关重要的蛋白质。这些蛋白质中的许多是由男性副腺体合成的，并分泌到副腺体腔中，在需要时储存在那里。以往对果蝇副腺产品鉴定的研究主要集中于黑腹果蝇和最近的模拟果蝇雄性特异性副腺cDNA的特征。在本研究中，我们使用了一种不带任何性别偏见的蛋白质组学方法来鉴定黑腹滨鹬副腺分泌物中的蛋白质。

结果：通过2D-gel电泳结合胰蛋白酶片段的质谱分析，鉴定了13种分泌型副腺蛋白，包括7种新的副腺蛋白。它们包括蛋白质折叠和应激反应蛋白、激素、脂肪酶、蛇毒蛋白、富含半胱氨酸的蛋白质和两种肽酶、组织蛋白酶K样半胱氨酸肽酶的前酶形式和γ-谷氨酸转肽酶。酶学研究证实，辅助腺体分泌物含有半胱氨酸肽酶酶原，该酶原可在低pH值下激活。该肽酶可能在女性和其他男性衍生蛋白质的加工中起作用，但不太可能参与性肽的加工。γ-谷氨酰转肽酶是II型完整膜蛋白；然而，已鉴定的AGγ-谷氨酰转肽酶（GGT-1）是不寻常的，因为它被预测为一种可溶性分泌蛋白，这一预测得到了生物化学证据的支持。GGT-1可能参与维持精子的保护性氧化还原环境。在分泌物中发现的强烈γ-谷氨酸转肽酶活性为观察到谷氨酸是黑腹果蝇附腺分泌物内最丰富的游离氨基酸提供了解释。

结论：我们应用了以前未使用过的生化方法来表征突出的黑腹滨鹬附属腺体产品。在本研究中报告的13种附腺分泌蛋白中，有6种存在于拟南芥雄性附腺EST文库中，该文库偏向于雄性特异基因。因此，本研究确定了7种新的分泌性副腺蛋白，包括GGT-1，该蛋白以前未被确认为分泌性副腺体产品。

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数字

图1
一个典型的二维凝胶（pH 4-7）用考马斯蓝染色，显示了从80个男性AG中分离出的蛋白质。在本实验中明确确定为分泌蛋白的蛋白斑点被标记。1、CG9429；2、CG4147；3、CG4847；4，CG17575。

图2
ClustalX氨基酸序列比对*D.黑腹果蝇*组织蛋白酶K（Dm cathepsin K，CG4847），*D.假遮蔽*组织蛋白酶K（Dp-cathepsinK，GA18475）和人组织蛋白酶K，S和L。活性位点残基，星；富含甘氨酸区域，虚线；预测卵裂产生成熟组织蛋白酶，填充阻塞箭头；通过质谱法鉴定的胰蛋白酶肽，下划线。保守的氨基酸是黑色的。

图3
ClustalX对齐*D.黑腹果蝇*GGT-1（CG6461）和人GGT-1。疏水信号序列/跨膜锚，虚线；预测GGT-1信号肽的裂解，填充方块箭头；预测活化所需的解理位点，开块箭头；活性位点Thr，*；质谱鉴定胰蛋白酶肽，下划线。保守的氨基酸是黑色的。

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