Yeast telomerase RNA: a flexible scaffold for protein subunits

doi:10.1073/pnas.0403641101

.2004年7月6日；101(27):10024-9.

doi:10.1073/pnas.0403641101。 Epub 2004年6月28日。

酵母端粒酶RNA：蛋白质亚基的柔性支架

大卫·C·扎普拉¹, 托马斯·切赫

附属公司

PMID： 15226497
预防性维修识别码：项目经理454382
内政部： 10.1073/pnas.0403641101

酵母端粒酶RNA：蛋白质亚基的柔性支架

大卫·C·扎普拉等。美国国家科学院程序. 2004.

.2004年7月6日；101(27):10024-9.

doi:10.1073/pnas.0403641101。 Epub 2004年6月28日。

作者

大卫·C·扎普拉¹, 托马斯·切赫

附属

¹美国科罗拉多大学霍华德·休斯医学院化学与生物化学系，科罗拉多州博尔德市，邮编80309-0215。

PMID： 15226497
预防性维修识别码：项目经理454382
内政部： 10.1073/pnas.0403641101

摘要

在酿酒酵母中，1.2-kb端粒酶RNA（TLC1）的不同区域与催化亚单位Est2p和辅助蛋白结合。特别是，突起的茎结构结合必需的调节亚单位Est1p。我们现在表明，RNA的Est1p-结合域可以移动到三个遥远的位置，并在体内保留端粒酶功能。基于热力学考虑和四个物种序列的比较分析，我们在整个TLC1 RNA二级结构的工作模型背景下提出了Est1p重定位实验。TLC1的模型有三个长准螺旋臂，它们结合Ku、Est1p和Sm蛋白质。这些臂来自包含模板和Est2p结合区域的中心催化核心。缺失突变提供了Sm臂存在于体内的证据，并且可以缩短42个预测的碱基对并保留功能；因此，Sm蛋白（如Est1p）在端粒酶中不需要精确定位。在最受研究的核糖核蛋白酶核糖体中，RNA具有定向功能元件的特定三维结构。就酵母端粒酶而言，我们认为RNA具有非常不同的功能，为蛋白质亚单位提供了灵活的系链。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
的工作模型*酿酒酵母*端粒酶RNA二级结构。假设具有不同3′端的两种形式的TLC1（≈1261和1167nt）分别是前体和成熟形式（15，32，33）。每个核苷酸的系统发育数据来源于*酿酒酵母*,*帕拉多克斯链球菌*(*S.p.公司。*),*S.mikatae公司*(*S.m.公司。*)、和*巴亚努斯链球菌*(*S.b.公司。*)（图5）。用于逆转录的模板和Sm₇已知复合结合位点是单链RNA区域（厚黑色轮廓线）。以前标识的绑定Est1p或Ku的二级结构元素用黑框框起来。对端粒酶RNA模板功能重要的RNA元素由黑色虚线标识。红色方框突出显示了RNA中受到系统发育分析有力支持的区域。灰色虚线框表示包含模板和Est2p催化亚基结合区域的中心核心区域。

**图2。**
端粒酶可耐受Est1p结合位点的重新定位。(A类)示意图显示了结合Est1p所需的凸起阀杆的位置（箭头）（10）以及Est1p结合部位（方框区域）的重新定位位置。(B)具有Est1p结合位点的细胞在约100代后生长到三个非自然位置。每个TLC1克隆显示两个独立的分离物。(C类)含有重新定位的Est1p结合位点的TLC1 RNA的细胞端粒DNA的Southern blot。基因组DNA用*Xho公司*我探测了端粒重复序列。第二个探针识别出第四号染色体（Chr.IV）的一个片段，作为相对流动性的内部控制，用于更准确地量化最小端粒限制片段（端粒）的长度。左边的数字表示尺寸标记（bp）。(D类)重新定位没有突起的Est1p位点不能拯救Est1p结合缺陷RNA。显示了四个独立的分离物。

**图3。**
测试终端臂的存在性和要求。(A类)示意图显示了每个单个突变体和双突变体中的核苷酸替换。核苷酸22–102替换为序列（CG）₅，预测双突变体（ΔΔ）与（CG）配对₅它取代了预测的末端臂另一侧的核苷酸846–914。(B)每个突变体的四个独立菌株在≈100代后生长。(C类)螺旋替换突变体的端粒DNA长度。左边的数字表示尺寸标记（bp）。(D类)Northern blot显示TLC1 RNA在末端突变体中的表达。U1小核RNA的第二个探针被用作负载和相对迁移率的内部对照。在收获之前，将细胞生长到静止阶段。

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