外源性硫化氢通过抑制NO信号减轻成年小鼠手术诱导的神经炎性认知障碍
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尹丽君
中国天津市宝坻区广川路8号天津医科大学宝坻临床学院麻醉科，邮编301800
高顺利
中国天津市宝坻区广川路8号天津医科大学宝坻临床学院麻醉科，邮编301800
李昌坤
中国天津市宝坻区广川路8号天津医科大学宝坻临床学院麻醉科，邮编301800
中国天津市宝坻区广川路8号天津医科大学宝坻临床学院麻醉科，邮编301800
通讯作者。 #贡献均等。
接收日期：2019年8月29日；2019年12月30日验收。
- 数据可用性声明
本研究中使用和/或分析的数据集可根据合理要求从通讯作者处获得。
摘要
背景
目的探讨外源性硫化氢在手术诱导的神经炎性认知功能障碍中的作用及其机制。
方法
C57BL/6型 J雄性小鼠(n个 = 140），随机分为7组：假手术组、手术组、GYY4137组、L-NAME组、手术+GYY4.137组、手术+L-NAME和手术+GYY4137 + L-NAME组。干预后，进行旷场试验（OFT）和Morris水迷宫试验（MWM）以评估小鼠的学习和记忆能力。采用ELISA、硝酸还原酶测定和Western blots（WB）评估白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、丙二醛（MDA）和抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）水平。此外，通过免疫组织化学（IHC）检测海马CA1和CA3区小胶质细胞标记物电离钙结合适配器分子1（IBA）的表达水平，并使用末端脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记（TUNEL）染色试剂盒观察凋亡细胞。
结果
我们发现手术会导致神经炎性认知功能障碍、氧化应激、小胶质细胞激活和海马细胞凋亡。此外，手术后海马区NO和iNOS水平升高。值得注意的是，手术引起的所有影响都被H逆转了2S供体GYY4137或iNOS抑制剂N（γ）-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）。然而，GYY4137和L-NAME的联合应用并不优于单独使用两种药物的治疗，GYY4137的疗效与L-NAME相似。
结论
长效硫化氢供体GYY4137能够逆转颈动脉暴露手术引起的认知缺陷和炎症。这意味着NO信号通路可能参与这一过程。这些结果表明外源性H2S可能是POCD的一种有前途的治疗方法。
关键词：POCD、神经炎、H2S、 iNOS，否
背景
术后认知功能障碍（POCD）的特征是认知障碍，包括麻醉和手术后患者的学习和记忆障碍，约30%的年轻和老年患者在出院后会受到影响[1–三]. 除了沟通障碍、日常活动减少、生活质量和工作表现下降等负面因素外，POCD还与较高的发病率和死亡率、较长的住院时间和较大的经济支出有关[三–6]. 年龄、文化程度、手术创伤、麻醉、术后镇痛和感染是POCD发生的危险因素[7–9]. 值得注意的是，结构和生物化学的改变，例如海马体的神经发生减少和神经炎症的诱导，海马体是大脑中主要负责认知的区域，极易老化，很可能是POCD的潜在机制[10–13]. 动物研究表明，神经炎症可能是麻醉和手术导致认知功能障碍的主要原因[14,15]. 然而，POCD的病因和发病机制尚待全面研究。
一氧化氮（NO）在支持正常生理功能方面起着关键作用，但炎症等病理条件可刺激高浓度NO的产生，从而可能引发神经退行性变[16]. 此外，NO参与细胞修饰，如小胶质细胞激活、神经元细胞凋亡和氧化应激，NO的过度生成会损害认知功能。NO的生物利用度被认为是阿尔茨海默病（AD）和早期POCD的预测风险因素[17–19]. NO由一氧化氮合酶（NOS）合成，NOS分为三类：内皮型NOS（eNOS）、神经元型NOS和诱导型NOS。eNOS和nNOS分别与内皮细胞和神经细胞相关，并产生低浓度和瞬时浓度的NO。iNOS的产生不仅限于特定细胞，而是在不同刺激（如炎症）下表达，是炎症疾病中的主要促炎和破坏介质[20]. iNOS还促进突触可塑性和大脑功能缺陷，如认知缺陷[17,21]. L-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）是一氧化氮合酶（NOS）的抑制剂，可以抑制NO的合成，可以减轻脑功能障碍[22]. 因此，NO可能代表POCD的致病信号。
硫化氢（H2S） 是NO旁边的第三种气体递质，可以调节NO的释放，其与海马中NO的相互作用可以缓解脑功能障碍[22–24]. 此外，H2S具有促炎和抗炎作用[24]. 外源性硫化氢供体GYY4137诱导H的缓慢释放2并通过eNOS依赖性途径减少肠道炎症和防止肠缺血[25].
在本研究中，我们研究了H的作用效果和机制2S供体GYY4137在手术诱导成年小鼠神经炎性认知功能障碍模型中的应用。
方法
动物和群体
我们使用140名8周龄健康成年男性C57BL/6 体重25–30的J只小鼠 g、 购自中国医学科学院放射医学研究所动物实验中心。所有小鼠在25℃的温度控制室中保持至少1周 °C和60%相对湿度，12 h光循环，实验前免费获得标准的实验室饮食和水。根据中国医学科学院放射医学研究所动物实验中心的伦理准则对小鼠进行治疗，中国医学科学院放射医学研究所动物实验中心动物研究委员会批准了实验方案。将小鼠随机分为7组：假手术组（第0天所有手术均不暴露右颈动脉）、手术组（第一天暴露右颈动脉粥样硬化）、GYY4137组（腹腔注射50 mg/kg GYY4137，磷酸盐缓冲盐水（PBS）1 假手术前h），L-NAME组（饮水15 毫克/千克 假手术前第1天到手术后第3天饮用水中的L-NAME），手术+GYY4137组（腹腔注射50 毫克/千克GYY4137 1 颈动脉暴露前h），手术+L-NAME组（饮水15 颈动脉暴露前至术后第3天的L-NAME mg/kg）和手术+GYY4137 + L-NAME组。每组包括20只小鼠。
右颈动脉暴露致手术性炎症损伤模型
在用3%七氟醚麻醉小鼠后，如前所述，进行右颈动脉暴露手术[1,26]. 大约10点后 在完成全部手术后的min内，所有动物均接受含有25 mg丙胺卡因和25 mg利多卡因（中国北京紫光药物制造有限公司）敷于伤口。
开场试验（OFT）
在手术后的第二天，进行OFT以确定小鼠的自发运动活动，如前所述[26]. 简单地说，一个塑料开放式现场接线盒（50 × 50 × 23 cm）使用了16个相等的扇区基数。老鼠被放在角落里5次 适应的分钟，以及接下来的5分钟 min，当所有动物的四只爪子被放置在一个新的方块中时，记录交叉次数，并将前爪的抬起量记录为后爪的数量。在测试过程中，使用5%乙醇清洁盒子，以去除动物线索。
莫里斯水迷宫（MWM）
术后第3-8天，进行MWM测试以评估学习和记忆能力。实验于9:00–12:00使用水迷宫设备（中国上海吉良软件（DigBehv）技术公司）进行 每天上午6点 天，如前所述[26,27]. 前5个 定向导航天数用于测试小鼠的学习能力。记录了两个指标：一个是鼠标找到平台所用的时间，称为“逃逸延迟”，另一个是找到平台所需的距离，名为“游泳距离（路径长度）”。执行MWM时，将鼠标放在面向墙壁的水池中。然后，记录从老鼠被放入水中的时间和距离，直到它找到平台。如果超过60 经过时，它没有找到平台，鼠标被引导到平台上，并允许休息10分钟 平台上的秒，逃逸潜伏期记录为60 s.在最后一天使用太空探索测试小鼠的记忆能力。平台被移走了，老鼠被放在面向池壁的水中两次。然后，记录第三象限（目标象限）游泳的时间和距离。
海马组织制备
每组小鼠在1(n个 = 8), 4 (n个 = 6） 和8(n个 = 6） 手术后几天。将小鼠斩首，将海马从大脑中分离出来，放在冰上，并储存在− 80 °C，然后用于以下实验。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
按照制造商的说明，在术后第1天、第4天和第8天，使用ELISA测定海马组织中白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的浓度。采用的具体步骤和描述与之前的研究一致[26]. 为了量化，IL-1β和TNF-α的浓度根据450 分光光度计上的nm波长吸光度，表示为pg/mg蛋白质。
NO浓度检测
根据之前的报告，术后第1天，使用硝酸还原酶法检测海马组织中的NO浓度[28]. 简单地说，操作顺序符合制造商关于商用NO荧光测定试剂盒（中国南京建诚生物有限公司）的说明。NO的浓度表示为nmol/mg蛋白质，并使用550 nm吸收波长。
蛋白质印迹（WB）
24岁时进行WB评估海马组织iNOS蛋白含量 h手术后。简言之，从海马中提取蛋白质，然后用RIPA裂解缓冲液（Beyotime，中国）处理30 min，14000×离心克对于30 用10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等量的蛋白质，并转移到聚偏二氟乙烯膜（Millipore）。在室温下用含0.05%吐温-20（TBS-T）的Tris缓冲盐水中的5%牛奶封闭1天后 h、 膜在4时孵育 将主要iNOS抗体（1:500，Ab15323，Abcam，Cambridge，MA）和抗β-微管蛋白抗体（1:50，Ab6046，Abcam，Cambribridge（MA））隔夜用作对照。在用TBS-T洗涤并用第二抗体、结合了辣根过氧化物酶（HRP）的抗兔IgG（1:1000，A0545，Sigma-Aldrich，St.Louis，MO）在37 2°C h、 使用增强化学发光（ECL）试剂对斑点进行可视化。
氧化应激检测
根据制造商的说明，手术后20小时，使用南京建成生物工程研究所（A006-2，A001-3）的适当试剂盒测量海马组织中氧化产物丙二醛（MDA）和抗氧化酶超氧化物歧化酶（SOD）的浓度。
免疫组织化学（IHC）
在海马氨角（CA）1和CA3 1中检测到小胶质细胞标记物电离钙结合适配器分子1（IBA-1） 如前所述，术后第天使用IHC染色[29,30]. 简单地说，采集海马组织并进行固定。使用冷冻切片机（德国莱卡CM1900）切下厚度为4μm的切片，收集在24孔板中，然后冲洗。浸入0.01后 含5%山羊非免疫血清和0.3%TritonX-100溶液的M PBS，37 30°C 分钟，切片随后孵育48 4时为小时 °C，含山羊多克隆一级抗体抗IBA-1（1:100；WAKO）的2%山羊血清。将切片清洗并在试剂盒（Chemicon，Anti-Rabbit/Mouse Poly-HRP IHC Detection Kit，USA）的试剂I和试剂II中培养30分钟 最小值为37 摄氏度。将切片再次冲洗五次，每次5次 0.01中的最小值 M PBS-T。最后，用3,3′-二氨基联苯胺（DAB）染色检测切片。用2%的山羊血清替换一级抗体，以确定抗体染色的特异性，从而产生阴性对照。使用光学显微镜（德国莱卡DMIRB）和计算机辅助摄像机观察并拍摄免疫反应产物。
Tunel染色
术后第1天进行Tunel染色，检测海马CA1和CA3中的凋亡细胞。程序如下：冷冻后，50 将μl新稀释的蛋白酶K以20的浓度添加到组织中 μg/ml（147 μl，共10μl mM Tris-HCl添加至3 微升1 mg/ml蛋白酶K）。消化15次 37时最小值 °C，然后在0.01内清洗 M PBS三次5次 每分钟。然后，在室温下用0.1%焦碳酸二乙酯（DEPC）水冲洗切片30 最小PBS（0.01 M） 被用来清洗路段三次，共5次 每个最小值。从切片中去除多余的液体。加入溶液I和溶液II（体积比1:9，在冰上PE手套上制备，均匀分布）。制备了Tunel反应混合物。随后，新制备的3%H2O（运行）2-添加甲醇并与切片在室温下孵育15 分钟，然后用0.01清洗 M PBS三次5次 每个最小值。限制液体（50 μl 5%牛血清白蛋白），切片孵育30 37时最小值 摄氏度。然后，在不进行清洗的情况下除去限制性液体。转化剂-AP（50 μl）添加到每个切片中。然后，将切片放入湿盒中，孵育40 37时最小值 °C，然后用0.01清洗 M PBS三次5次 每个最小值。TVBT用于室温下的彩色生产。使用普通光学显微镜观察颜色5-10 min。用蒸馏水停止显色反应。这些部分在流动水下冲洗了10次 min清洁NBT颗粒。进行常规脱水和安装。光镜下观察Tunel染色结果。在阴性对照组中，加入不含溶液1的溶液II。用塑料盖盖住样品切片。然后，将样品放入一个湿盒中，并贴上1的标签 37小时 °C，然后在4℃下过夜 °C超过20 h.然后用0.01清洗样品 M PBS三次，每次三次 每个最小值。在阳性对照组中，添加Dnase l并在室温下孵育10 最后，观察细胞凋亡的数量和形态学特征。
统计分析
使用SPSS 17.0软件对数据进行分析，并表示为平均值 ± 标准偏差（SD）。在适当的情况下，采用单因素方差分析（ANOVA）或双向方差分析以及Bonferroni的多因素比较事后检验对多组进行比较。使用双向方差分析（治疗×试验时间）和重复测量（试验天数）分析MWM试验的数据。差异被认为具有统计学意义P（P） < 0.05.
结果
外源H2S逆转受损的认知功能，但不改变手术损伤引起的运动功能障碍，与L-NAME类似
在我们的研究中，使用OFT和MWM来评估认知表现。在OFT测试中，总移动距离和移动持续时间数据显示两组之间的运动活动没有明显差异（图a、 b）。MWM结果显示，与假手术组相比，手术降低了空间学习，延长了逃避潜伏期和路径长度，降低了目标象限的记忆能力，减少了时间百分比和长度。与假手术组相比，外源性H2S供体GYY4137显著提高空间学习记忆能力，与手术组相比，GYY41 37可以部分逆转手术损伤的影响。与假手术组相比，NOS抑制剂L-NAME单独使用并不影响学习和记忆能力，但与手术组相比它也部分逆转了手术诱导的学习和记忆下降。效果与GYY4137相似。同时，与GYY4137或L-NAME单独使用相比，GYY41 37和L-NAME的组合没有发挥额外的优势作用（图。c–f）。这些发现表明，空间学习和记忆中的认知缺陷并不是由于自发运动活动减少所致。
外源H2S在不改变运动表现的情况下逆转受损的认知功能，这与L-NAME类似。一和b术后第2天使用OFT评估运动活动，并测量总运动距离和运动持续时间。c（c）和d日在术后第3至7天使用MWM评估空间学习能力，并测量逃避潜伏期和路径长度。e（电子）和如果术后第8天使用MWM评估空间记忆能力，并测量目标象限的时间百分比和长度*P（P） < 0.05，与假手术组比较**P（P） < 0.01，与假手术组比较#P（P） < 0.05，与手术组比较##P（P） < 0.01，与手术组相比
外源H2S在术后第1天和第4天逆转手术诱导的神经炎症，但在术后的第8天没有逆转，这可能与海马中NO和iNOS浓度的降低有关，其作用类似于L-NAME
与假手术组相比，手术导致海马显著的神经炎症，IL-1β和TNF-α浓度升高。最高浓度出现在术后第1天，术后第4天神经炎症减轻。术后第8天，神经炎症状态基本恢复。各组间无显著差异。GYY4137和L-NAME均能抑制手术诱导的神经炎症，与GYY41 37或L-NAME单独使用相比，GYY4 137和L-NACE联合使用并没有产生更好的效果（图a、 b）。此外，我们在24小时检测到海马中的NO和iNOS 术后h，结果与IL-1β和TNF-α的结果一致（图。c、 d）。
外源H2S在术后第1天和第4天逆转手术诱导的神经炎，但在术后的第8天不逆转，这可能与海马NO和iNOS减少有关。一和b术后第1天、第4天和第8天通过ELISA检测海马中IL-1β和TNF-α的浓度。c（c）24小时时用硝酸还原酶法测定海马NO浓度 h手术后。d日24岁时WB检测到海马iNOS h手术后。IL-1β、IL-1β；肿瘤坏死因子α；NO、一氧化氮；iNOS，诱导型一氧化氮合酶*P（P） < 0.05，与假手术组比较**P（P） < 0.01，与假手术组比较#P（P） < 0.05，与手术组比较##P（P） < 0.01，与手术组相比
外源H2S逆转手术诱导的氧化应激、小胶质细胞激活和海马细胞凋亡，这与L-NAME类似
分别使用MDA和SOD试剂盒、IHC和Tunel染色评估术后20小时内的氧化应激、小胶质细胞激活和细胞凋亡。结果表明，手术在海马区引起氧化应激反应，MDA生成增加，SOD生成减少。GYY4137或L-NAME治疗减轻了氧化应激的程度。然而，GYY4137或L-NAME单独使用没有效果。此外，与GYY4137或L-NAME单独使用相比，GYY41 37和L-NAME的组合没有其他优势（图a） 。此外，与假手术组相比，手术组发现更多的小胶质细胞和凋亡细胞。GYY4137或L-NAME治疗的小鼠海马CA1和CA3区的小胶质细胞活化和细胞凋亡减弱。假手术组和GYY4137组之间，或假手术组与L-NAME组之间没有显著差异。此外，GYY4137和L-NAME的组合并不显著优于GYY41 37或L-NAME单独使用（图。b、 c）。这些数据表明GYY4137的保护作用与L-NAME相似。
外源H2S逆转手术诱导的氧化应激、小胶质细胞激活和海马细胞凋亡，这与L-NAME类似。一测定海马组织中的氧化产物MDA和抗氧化酶SOD。b术后第1天，用IHC染色在海马CA1和CA3区检测到小胶质细胞标记物IBA-1（棕色）。比例尺：× 100、200 微米；× 200, 100 μm。c（c）术后第1天用TUNEL染色检测海马CA1和CA3区神经元凋亡。比例尺：× 100, 200 微米；× 200, 100 μm*P（P） < 0.05，与假手术组比较#P（P） < 0.05，与手术组相比
讨论
在这项研究中，我们发现H2S供体GYY4137通过抑制海马中的NO和iNOS，在成年小鼠手术诱导的神经炎性认知障碍中发挥保护作用。右侧颈动脉暴露手术导致海马中促炎细胞因子IL-1β和TNF-α增加，并损害空间学习和记忆能力，但不影响运动活动。海马NO和iNOS的增加，氧化产物MDA的积累，海马抗氧化酶SOD的降低，海马CA1和CA3的小胶质细胞活化和细胞凋亡，都可以通过H2S供体GYY4137或iNOS抑制剂L-NAME。此外，GYY4137和L-NAME的联合应用并不优于各自的单独应用，GYY4137的效果与L-NAME相似。
临床资料表明，麻醉和手术创伤是POCD的主要原因，这可能会增加发病率和死亡率[三]. 此外，手术诱导的海马神经炎症与POCD密切相关[26]. 对动物进行的各种外科手术被用来模拟POCD[8,31,32]. Wang等人证明，如MWM测试所检测到的那样，右颈动脉暴露会导致空间学习和记忆方面的明显认知障碍，并缩短了FCS实验中的冷冻时间，但不会损害OFT中的运动活动，也不会减弱促炎细胞因子IL-1β、IL-6、，C57BL/6岁患者术后第4天海马中的TNF-α J雄性小鼠[26]. 另一项先前的研究也报道了颈动脉暴露诱导成年C57BL/6的POCD和神经炎症反应，以及神经发生减少 J老鼠。我们的研究使用成年C57BL/6 并模仿Wang等人使用的手术模型，以获得一致的结果。值得注意的是，H2S供体GYY4137和iNOS抑制剂L-NAME有效改善了手术诱导的神经炎症和认知功能障碍。
炎症刺激后过度生成NO，可能导致神经退化，加速认知能力下降和痴呆[33]. NO由NOS产生，iNOS的表达并不局限于特定细胞，它是炎症疾病中的主要促炎和破坏性介质[20]. 抑制iNOS发挥神经保护作用，包括减少男性C57BL/6的创伤性脑损伤诱导的突触可塑性和认知功能缺陷 J小鼠[21]. 在我们的研究中，手术在海马体中诱导了明显的神经炎症，并刺激了iNOS的高水平表达，从而促进了海马体中NO的过度合成。然而，GYY4137或L-NAME治疗逆转了炎症诱导的海马iNOS和NO的过度生成。GYY4137和L-NAME的联合应用没有产生额外的有益效果，GYY41 37的效果与L-NAME相似。这些结果表明外源性H2S通过抑制海马中的NO信号传导，缓解成年小鼠手术诱导的神经炎症性认知障碍。内源性和外源性H2S已被证明具有抗炎作用，可诱导炎症疾病（如结肠炎）的恢复[34]. 先前的一项研究表明，外源性H2S缓解AD患者的空间记忆障碍[35]. 外源H2研究还表明，S对脑水肿、神经行为功能（包括学习和记忆）以及蛛网膜下腔出血后的神经细胞死亡具有神经保护作用[36]. 此外，H2S可以调节NO的释放，与海马中NO的相互作用可以缓解脑功能障碍[22–24]. 在这里，我们是第一个证明外源性H2S通过抑制NO和降低海马iNOS水平改善手术诱导的POCD小鼠模型中的空间学习和记忆缺陷。
在当前的研究中，我们还发现外源性H2S逆转手术诱导的氧化应激、小胶质细胞激活和海马细胞凋亡，这与L-NAME的作用类似。此前的一项研究表明，氧化应激与认知能力下降密切相关，包括2型糖尿病患者的精神运动速度、心理灵活性和注意力下降[37]. 海马体的氧化损伤也与化疗引起的认知障碍有关[38]. 此外，氧化应激可介导海马的炎症和凋亡，从而促进海马损伤[39]. 重要的是，小胶质细胞的激活是神经炎症发病的标志，并有助于侧支脑损伤[40]. 小胶质细胞激活在认知障碍相关疾病（如AD）的发病中起着关键的致病作用[41]. 有趣的是，目前的证据表明，自噬、细胞凋亡、炎症和氧化应激在以神经元功能丧失为特征的神经退行性疾病的发病机制中可能发挥作用[42]. 此外，NO诱导神经元修饰，例如小胶质细胞激活、神经元细胞凋亡和氧化应激，高浓度NO对认知能力有害。NO的生物利用度被认为是AD和早期POCD的预测风险标志物[17–19]. 因此，手术诱导的炎症反应导致海马iNOS高水平表达，进而导致海马NO过度生成，随后促进氧化应激、小胶质细胞活化、神经元细胞凋亡和海马损伤，最终导致POCD的发生。使用GYY4137或L-NAME治疗可以部分恢复受损的认知功能。
结论
总之，我们发现长效硫化氢供体GYY4137能够逆转颈动脉暴露手术引起的认知缺陷和炎症。这意味着NO信号通路可能参与这一过程。结果表明，外源H2S可能是POCD的一种有前途的治疗方法。
缩写
| AD公司 | 阿尔茨海默病 |
| 方差分析 | 单向方差分析 |
| 加利福尼亚州 | 菊芋角 |
| 擦 | 二氨基联苯胺 |
| 环境保护部 | 焦碳酸二乙酯 |
| ECL公司 | 增强化学发光 |
| 酶联免疫吸附试验 | 酶联免疫吸附试验 |
| 电子NOS | 内皮一氧化氮合酶 |
| H（H）2S公司 | 硫化氢 |
| 人力资源计划 | 辣根过氧化物酶 |
| 国际建筑协会（IBA-1） | 电离钙结合适配器分子1 |
| 国际控股公司 | 免疫组织化学 |
| IL-1β | 白细胞介素-1β |
| iNOS系统 | 引发酶 |
| L名称 | L-硝基精氨酸甲酯 |
| MDA公司 | 丙二醛 |
| MWM公司 | 莫里斯水迷宫 |
| 无操作系统 | 神经元NOS |
| 不 | 一氧化氮 |
| 网络操作系统 | 一氧化氮合成酶 |
| 美国公共广播电视公司 | 磷酸盐缓冲盐水 |
| POCD公司 | 术后认知功能障碍 |
| 标准偏差 | 标准偏差 |
| 草地 | 超氧化物歧化酶 |
| 待定 | 含有0.05%吐温-20的Tris缓冲盐水 |
| 肿瘤坏死因子-α | 肿瘤坏死因子α |
| 工作分解结构 | 蛋白质印迹 |
作者的贡献
LY和CL构思并设计了研究。LY和SG进行了研究，分析了数据并撰写了手稿。CL审查并修订了手稿。所有作者审查并批准了最终稿。
数据和材料的可用性
本研究中使用和/或分析的数据集可根据合理要求从通讯作者处获得。
道德批准和参与同意
根据中国医学科学院放射医学研究所动物实验中心的伦理准则对小鼠进行治疗，中国医学科学院放射医学研究所动物实验中心动物研究委员会批准了实验方案。
脚注
出版商备注
施普林格自然公司在公布的地图和机构隶属关系中的管辖权主张保持中立。
尹立军和高顺丽对这部作品的贡献是一样的，应该被视为第一作者。
工具书类
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