质膜钙ATP酶4b通过钙诱导的与神经元一氧化氮合酶的动态相互作用抑制一氧化氮的生成

钙的活化和失活²⁺-必须严格控制中枢神经系统中的钙调素非依赖性神经元一氧化氮合酶（nNOS），以防止过量一氧化氮（NO）的生成。鉴于质膜钙ATP酶（PMCA）是nNOS的关键失活剂，本研究旨在确定PMCA在活细胞中失活nNOS以维持其细胞环境的关键事件。利用时间分辨Förster共振能量转移（FRET），我们确定了Ca的发生²⁺-在活细胞中诱导质膜钙ATP酶4b（PMCA4b）和nNOS之间的蛋白质相互作用。PMCA激活显著降低细胞内钙²⁺浓度（[Ca²⁺]_我)，使nNOS失活并减缓NO合成。基底下[Ca²⁺]_我在PMCA4b和nNOS之间没有观察到由PMCA激活引起的蛋白质-蛋白质相互作用。此外，nNOS的PDZ结构域和PMCA4b的PDZ结合基序对蛋白质相互作用至关重要。还研究了脂筏微结构域对PMCA4b和nNOS活性的影响。与其他PMCA亚型不同，PMCA4相对更集中于筏形部分。脂筏的破坏改变了PMCA4b的细胞内定位，并影响了PMCA4 b与nNOS的相互作用，这表明PMCA4独特的脂筏分布可能是其调节nNOS活性的原因。总之，脂质筏可以作为PMCA4b调节nNOS活性的平台，nNOS与PMCA4b的短暂连接负责nNOS的快速失活。