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J单元通信信号。2009年3月；3(1): 5–18.
2009年3月18日在线发布。 数字对象标识：2007年10月17日/12079-009-0043-9
预防性维修识别码：项目经理2686750
PMID：19294531

阻断结缔组织生长因子（CCN2）成纤维作用的策略：来自药理抑制在体外靶向siRNA治疗体内

大卫·R·布里斯托克通讯作者1,2
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

结缔组织生长因子（CCN2）是一种主要的促纤维化因子，经常作用于转化生长因子β（TGF-β）介导的纤维生成途径的下游。我们对CCN2在纤维化中的许多知识来自于其产生或活性被实验性减弱的研究。这两项研究在体外在动物模型中，已证明药物抑制剂（例如肿瘤坏死因子α（TNF-α）、前列腺素、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）激动剂、他汀类药物、激酶抑制剂）、中和抗体、反义寡核苷酸或小干扰RNA（siRNA）的效用探讨CCN2在纤维形成途径中的作用。这些研究使CCN2产生的调节机制得到了更明确的定义，表明CCN2是一个合理的抗纤维化靶点，并为开发有效的治疗干预方式建立了框架体内.

关键词：CCN2、结缔组织生长因子、CCN2，转化生长因子β、TGF-β、基因转录、纤维化、治疗性、抗纤维化、反义、中和、SiRNA、肝纤维化、CTGF

介绍

自从近20年前认识到结缔组织生长因子（CCN2）mRNA是通过转化生长因子β（TGF-β）在培养的成纤维细胞中诱导的（Brunner等人.1991)，一直在努力理解这种关系的机制基础，并探索其体内后果（利斯克和亚伯拉罕2003; Shi-Wen等人。2008; Leask等人。2009). 这一点在纤维化领域最为明显，目前纤维化代表了CCN2参与的最常见的病理生理学（Rachfal和Brigstock2005)TGF-β在其中也有广泛的作用记录（Verrecchia和Mauviel2007). 纤维化是由于正常伤口愈合反应无法终止而引起的，导致过度瘢痕形成，其特征是细胞外基质（ECM）的产生、沉积和收缩。这一过程通常会持续数月或数年，并可能导致器官功能障碍或死亡。主要观察结果包括：1）CCN2和TGF-β在许多纤维化病变中高度过度表达，并且具有时空相关性；2） CCN2诱导ECM蛋白的合成和分泌，尤其是作为纤维沉积的主要成分的纤维胶原；和3）TGF-β介导的胶原合成在体外被CCN2拮抗剂阻断。对TGF-β诱导轴的仔细分子解剖补充了这些观察结果，现已确定CCN2启动子中的重要响应元件参与CCN2 mRNA表达的调节，尽管它们的相对贡献因细胞类型而异（Shi-Wen等人.2008; Leask等人.2009).

另一方面，重要的是要注意几个警告。由于CCN2是一种多模块基质细胞蛋白，它可能存在于ECM中，或通过整合素、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖和其他受体与细胞表面相连，在这些受体中它可能作为其他细胞调节分子的结合伙伴（Chen和Lau2008). 因此，CCN2的促纤维化特性实际上可能反映了其增强对其他因素的纤维化反应的能力。例如，CCN2和TGF-β蛋白之间的结合作用已被报道（Abreu等人.2002)这种关联可以解释这些分子在皮肤纤维化小鼠模型中的协同作用，而CCN2单独不能驱动持续纤维化（Frazier等人。1996; Mori等人。1999; Chujo等人。2005). 此外，过度表达组织特异性CCN2转基因的小鼠的肝脏或肾脏没有纤维化，但CCN2基因的存在明显加剧了器官损伤后原纤维细胞类型、ECM沉积和/或纤维生成标记物的表达（Tong和Brigstock2005; Yokoi等人。2008). 因此，虽然大量数据支持CCN2在纤维化及其由TGF-β诱导中的中心作用，但我们实际上对其成纤维作用背后的各种信号事件和分子串扰的了解非常有限。

纤维化影响着全世界数百万人，造成了不可估量的发病率和死亡率。据估计，在美国，45%的死亡病例中，内脏纤维化是导致死亡的因素之一，但目前美国食品和药物管理局尚未批准使用抗纤维化药物。尽管如此，在过去十年中，有效抗纤维化治疗的前景迅速改善，其基础是以纤维化级联中的关键参与者为目标（Ghiassi-Nejad和Friedman2008). 因此，研究人员开始将靶向CCN2作为一种抗纤维化策略的潜在治疗益处进行研究也就不足为奇了（Blom等人。2002; Leask等人。2002). 这种方法的一个特别吸引人的地方是CCN2作用于TGF-β的下游，因此专注于防止CCN2产生或作用的靶向策略可以避免对重要的肿瘤抑制和免疫调节作用的潜在干扰，这些是TGF-自身。

本文描述了在细胞培养或动物模型中被证明有效阻断CCN2介导的纤维化途径的实验策略，并支持进一步研究抗CCN2治疗或预防人类纤维化的研究。

药物抑制剂

肿瘤坏死因子α（TNF-α）

TNF-α主要被认为是一种促炎细胞因子，但它也有抗纤维化作用在体外和体内（利斯克和亚伯拉罕2004)领导几位研究人员分析其对CCN2表达的影响。因此，TNF-α可降低牛主动脉内皮细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞的基础CCN2表达（Dammeier等人。1998; Lin等人。1998)以及TGF-β刺激的成纤维细胞或气道平滑肌细胞（Abraham等人。2000; Xie等人。2005; Beddy等人。2006)，地塞米松刺激Balb/c 3 T3细胞（Dammeier等人。1998)或组胺刺激的肺成纤维细胞（Kunzmann等人。2007). 然而，在胰腺星状细胞（PSC）或系膜细胞中，TNF-α的作用实际上是刺激CCN2表达（Cooker等人。2007; Karger等人。2008)而它对硬皮病成纤维细胞中组成型CCN2的表达没有影响（Abraham等人。2000)或葡萄糖刺激腹膜间皮细胞中CCN2的表达（Sakamoto等人。2005). 而TNF-α的抗纤维化作用最初归因于通过NF-κB介导的Smad7诱导或JNK介导的smad3抑制TGF-β途径的干扰（Leask和Abraham2004)现在的数据表明，在某些细胞类型中，这些通路在某些情况下是无效的。因此，必须对研究中的每个特定实验系统仔细验证TNF-α作为CCN2抑制剂的使用。

前列腺素（PG）

在成纤维细胞中，TGF-β或TNF-α分别诱导环氧合酶-1或-2（COX-1，COX-2）的表达，从而催化花生四烯酸产生PG。PG在某些系统中的一个有充分记录的作用是抗纤维化，这一特性归因于其激活蛋白激酶A和提高细胞内cAMP水平（Leask和Abraham2004). 事实上，早期研究表明，cAMP阻断剂，如霍乱毒素、福斯科林或8-Br-cAMP，可有效预防TGF-β诱导的NRK细胞CCN2生成和凤尾鱼非依赖性生长（Kothapalli等人。1998). Forskolin还阻断了TGF-β刺激的人肺或肾系膜细胞中CCN2 mRNA的表达（Black等人。2007). 此外，前列腺素E2（PGE2）抑制肺成纤维细胞或系膜细胞中TGF-β刺激的CCN2生成，肾系膜细胞中糖诱导的CCN2-水平，或气道平滑肌细胞或rat-1细胞中TGF-β诱导的CC氮气生成，后者通过EP-2受体介导（Ricupero等人。1999; Yu等人。2002; Makino等人。2003; Burgess等人。2006; Black等人。2007). Iloprost，前列环素PGI的合成类似物2用于缓解硬皮病患者的雷诺现象，升高cAMP水平，拮抗诱导CCN2所需的ras/MEK/ERK信号级联（Stratton等人。2001,2002; Leask等人。2003)，其对CCN2表达的抑制作用已应用于体内肝脏再生模型，以证明Thy-1+卵圆细胞募集的CCN2依赖性（Pi等人。2005). 9-顺维甲酸抑制硬皮病成纤维细胞中CCN2或胶原蛋白的生成是由于其诱导COX-2和PGE2的表达（Xiao等人。2008)而全反式维甲酸在肝脏中发挥抗纤维化作用，并与CCN2和TGF-β生成减少相关（Wang等人。2008). 此外，ras/MEK/ERK在CCN2表达中的参与允许使用特定激酶抑制剂（如U0126或PD98059）探索这些途径（Black等人。2007; 泡菜和租赁2007; Leask等人。2008).

应该强调的是，在一些实验系统中，PG如何影响CCN2表达的情况有例外。例如，PGF2α在猫虹膜中的作用与CCN2表达的增加有关（Liang等人。2003)而牙龈成纤维细胞对PG介导的CCN2抑制具有抵抗力，因为cAMP途径与ras/MEK/ERK途径耦合不良，并且PGE2通过EP3受体作用来升高JNK，JNK对抗cAMP介导的CCN2抑制（Black等人。2007). 因此，虽然PG及其上游或下游介质通常对CCN2表达具有抑制作用，但必须通过实验验证其实际效果，以考虑PG反应中的细胞或组织特异性变化。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）激动剂

PPAR-γ是一种核受体和配体激活的转录因子，在脂肪细胞中充当脂肪酸、二十烷酸或其代谢物的脂质传感器。然而，使用天然配体15-脱氧-Δ对PPAR-γ的实验研究12,14前列腺素J2或合成配体，如罗格列酮、吡格列酮或GW7845，表明PPAR-γ在多种细胞类型中发挥作用，在这些细胞类型中可以介导对基底或TGF-β刺激的胶原合成的抑制在体外或在里面活体（Ghosh等人。2004; Burgess等人。2005; Milam等人。2008). 积累的数据清楚地表明，在PPAR-γ刺激下，CCN2在许多细胞类型中减弱。例如，在活化的肝星状细胞（HSC）中，PPAR-γ抑制TGF-β介导的CCN2表达（Sun等人。2006)姜黄素刺激PPAR-γ表达后，其作用增强（郑和陈2006). 在血管平滑肌细胞中，PPAR-γ通过Smad依赖机制抑制TGF-β或血管紧张素诱导的平滑肌细胞CCN2表达（Fu等人。2001; Gao等人。2007). 其他在体外实验表明，PPAR-γ也抑制肾小管上皮细胞中CCN2的表达（Wei等人。2007年a,b条)，肾成纤维细胞（Wang等人。2007)和肝细胞（Gressner等人。2008)，后者由咖啡因促进，表明其作为抗纤维化的潜在用途（Gressner等人。2008; Leask公司2008).体内在结膜瘢痕和肺损伤模型中，服用PPAR-γ消毒剂导致CCN2生成减少（Aoki等人。2008; Yamanaka等人。2009).

他汀类药物

他汀类药物是一类降低胆固醇的药物，其作用是抑制HMG-CoA还原酶，即胆固醇生物合成甲羟戊酸途径的速率限制酶。然而，它们也具有抗炎、抗氧化和免疫调节作用，并且在大鼠肾间质纤维化模型中也被证明具有抗纤维化作用（Li等人。2004; 维埃拉等人。2005). 这些抗纤维化作用中的一部分可能是由于对CCN2表达的关注，CCN2在几个不同的系统中有记录，并且对多种他汀类药物有反应。体外辛伐他汀对系膜细胞、肺成纤维细胞或肾成纤维细胞的治疗抑制了CCN2的表达（Eberlein等人。2001; Goppelt-Struebe等人。2001; Heusinger-Ribeiro等人。2004; 瓦茨和斯皮特里2004; Watts等人。2005)、肾成纤维细胞或肌腱成纤维细胞与洛伐他汀（Eberlein等人。2001; Meyer-Ter-Vehn等人。2008)，肾小管上皮细胞与普伐他汀（Wei等人。2007年a)，使用氟伐他汀的正常大鼠肾细胞（Ikeuchi等人。2004)或使用阿托伐他汀的大鼠心脏成纤维细胞（Martin等人。2005). 此外，CCN2的表达在接受他汀类药物治疗的各种动物模型中受到抑制，包括氟伐他汀治疗的肾病（Song等人。2004)，Cervastatin治疗肾纤维化（Koepke等人。2007)阿托伐他汀治疗的血管纤维化（Ruperez等人。2007)普伐他汀治疗的肠纤维化（Haydon等人。2007)，或辛伐他汀治疗的肺纤维化（Ou等人。2008). 他汀类药物对CCN2表达的抑制归因于它们对Rock-Rho信号通路的干扰（Eberlein等人。2001; 瓦茨和斯皮特里2004; Haydon等人。2007; Ruperez等人。2007)被认为是潜在的抗纤维化靶点（森山和长谷由纪夫2004).

显然，已经积累了大量关于CCN2的药理抑制的数据，这些数据有助于理解CCN2在正常和病理过程中表达的上游或下游机制，这些发现可能有助于促进或证明这些化合物用于治疗人类纤维化疾病的治疗用途。另一方面，这些抑制剂通常不会以CCN2特有的方式发挥作用，因为它们调节多个信号通路和基因转录事件，而CCN2只是其中的一个成分。因此，当试图确定完全依赖CCN2的针点过程时，这种缺乏特异性是一个障碍。

阻断CCN2作用的中和抗体

据报道，用多种CCN2蛋白或肽免疫鸡、兔或小鼠产生的几种CCN2抗体具有中和活性。这些抗体包括：针对全长人类CCN2的多克隆鸡抗体（Kothapalli等人。1997); 针对与模块3和模块4之间的结构域相对应的合成肽的多克隆抗体，包括在鸡中饲养的抗CCN2[244-256]（HDLEENIKKGKKC）（Safadi等人。2003)以及在兔子体内饲养的抗CCN2[240-259]（RPCEADLEENIKKGKKCIRT）（Shimo等人。2001); 两种针对重组人CCN2的人源化单克隆抗体，对被称为“JMAb31”（人IgG2）和“FG-3019”（人免疫球蛋白G1κ）的模块2具有特异性，后者可识别残基142-157（Aikawa等人。2006; Shimo等人。2006); 以及用人类CCN2 cDNA对小鼠进行基因免疫产生的单克隆抗体，其对模块2或模块3或模块4具有特异性（Ikawa等人。2008).

一般来说，这些抗体并不普遍可用，只有在少数情况下，它们在处理CCN2纤维生成特性的系统中进行了测试。更常见的是，它们被用于探索CCN2在其他生物过程中的作用，如锚定非依赖性生长、肿瘤发生、转移性血管生成、骨生成和软骨生成（Kothapalli等人。1997; Shimo等人。2001,2006; Safadi等人。2003; Aikawa等人。2006; Dornhofer等人。2006). 考虑到CCN2分子的结构复杂性，多个模块中存在多个功能位点（例如整合素结合），其易被蛋白水解分解为更小的生物活性形式，以及对CCN2具有约束力的合作伙伴的广泛储备（其所有活动中的要求尚未得到系统解决）（Brigstock1999; 陈和刘2008)，“一种全尺寸”阻断抗体可能在技术上不可行，也可能无法为CCN2活性的所有不同读出结果提供明确的数据。事实上，任何上述抗体通过特异性阻断CCN2分子中的一个或多个功能位点而相对于“非特异性”空间位阻阻止CCN2刺激其各自靶细胞的程度尚未报道。虽然就发挥中和作用而言，这个问题的答案可能无关紧要本身，如果我们要从力学上了解CCN2介导的纤维生成级联的成分，这是至关重要的。

虽然CCN2中和抗体已用于在体外证明TGF-β诱导胶原蛋白生成的CCN2依赖性的实验（Duncan等人。1999; Blalock等人。2003)，只有少数已发表的报告支持其在纤维化研究中的应用体内据报道，FG-3019在啮齿动物肾纤维化模型中显示出疗效（Flyvbjerg等人。2004; Wang等人。2004年a)目前正在对人类肾或肺纤维化的I期试验进行评估（Mageto等人.2004; Adler等人。2006). 此外，在小鼠中对人CCN2 cDNA进行基因免疫产生了几种单克隆抗体，这些抗体在小鼠皮肤模型中减少了TGF-β依赖性纤维化和胶原沉积，其中最有效的是针对模块2（Ikawa等人。2008). 因此，通过中和CCN2抗体获得的公开数据非常有限，但确实为CCN2在纤维化中的作用提供了证据。尽管如此，这些数据表明模块2具有高度免疫原性，并且在某种程度上参与了纤维化（Aikawa等人。2006; Shimo等人。2006; Ikawa等人。2008)，我们必须注意，单独包含模块3或模块4的CCN2形式具有生物活性和纤维生成性（Gao等人。2004; 高和布里斯托克2004,2005,2006; Tong和Brigstock2006). 显然，关于CCN2中的功能域以及它们如何独立或相互依赖地支持或驱动纤维化，我们还有很多要学习的。

缺乏易于获取和/或经验证的CCN2中和抗体代表了该领域的巨大挫折。为了避免这个问题，许多研究人员转而关注使用互补DNA或RNA序列对抗CCN2 mRNA——为此，试剂在各个相关实验室中更容易开发和验证。因此，利用CCN2反义寡核苷酸或小干扰RNA（siRNA）成功而广泛地研究了CCN2 mRNA表达在成纤维途径中的作用及其对TGF-β的依赖或非依赖性。

体外CCN2反义寡核苷酸或siRNA的使用

CCN2反义寡核苷酸的使用有助于确定CCN2在TGF-β诱导的几种细胞类型（如肾系膜细胞、正常大鼠肾细胞、角膜成纤维细胞和结膜成纤维细胞）胶原生成中的作用（Duncan等人。1999; Yokoi等人。2001,2002; Blalock等人。2003; Kanemoto等人.2003; Yamanaka等人。2008). 类似在体外研究表明硬皮病成纤维细胞胶原合成减少（Xiao等人.2006)，减少血管平滑肌细胞中的ECM生成（Liu等人。2007)或TGF-β刺激皮肤成纤维细胞、成骨细胞或大鼠HSC胶原生成的拮抗作用（Wang等人。2004年b; Arnott等人。2007; Li等人。2008)在用CCN2 siRNA处理靶细胞后。表达短发夹RNA的质粒被证明扰乱了培养大鼠HSC中CCN2基因的表达，并导致胶原蛋白III和IV、层粘连蛋白和透明质酸的产生显著减弱（Yuhua等人。2008). 最后，设计用于切割CCN2 mRNA的锤头状核酶阻断了TGF-β介导的真皮成纤维细胞增殖（Blalock等人。2004)以及基础或TGF-β刺激的胶原合成和进入人类HSC的S期（D.R.B和R.Gao，未发表的观察结果）。

体内CCN2反义寡核苷酸或siRNA的使用

一些报告支持抗CCN2 mRNA策略治疗肝纤维化的疗效体内.四氯化碳（CCl4)-皮下注射反义CCN2寡核苷酸可诱导大鼠肝纤维化，导致CCN2的肝脏mRNA水平和I型胶原mRNA水平降低，尽管肝纤维化的数量实际上并未减少，这可能是由于金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-1的高表达所致（Uchio等人。2004). 另一方面，在CCl门静脉注射CCN2 siRNA4-经治疗的大鼠降低了CCN2、1型、2型、3型胶原、层粘连蛋白、TIMP-1和TGF-β的肝脏表达，减少了α-SMA染色评估的活化HSC的数量，并进一步降低了血清3型前胶原、肝羟脯氨酸和肝纤维化分期（Li等人。2006). 在N-亚硝基二甲胺诱导的大鼠肝纤维化中也观察到类似的改善，CCN2 siRNA被发现在预防和治疗纤维化模型中都有效（George和Tsutsumi2007).

其他模型系统也报告了类似的结果，尤其是肾纤维化。例如，在大鼠肾纤维化的单侧输尿管梗阻模型中，通过反义寡核苷酸阻断CCN2的活性可减少CCN2诱导，进而减少ECM基因及其相应蛋白的诱导（Yokoi等人。2004). 尽管TGF-β持续表达，CCN2反义寡核苷酸也显著阻断了亚全肾切除小鼠残肾模型中CCN2的表达和肾间质纤维化的发生（Okada等人。2005). 其他体内研究表明，向大鼠输送CCN2 siRNA是移植后肾移植的有效抗纤维化治疗（Luo等人。2008). 最后，CCN2反义寡核苷酸已被证明在减少ECM扩张和乳房植入物周围瘢痕形成方面有效（Mazaheri等人。2003).

很明显，我们见证了一个时代的到来，在这个时代，通过阻断CCN2 mRNA可以实现明确的抗纤维化作用体内这一研究无疑还处于初级阶段，但显示出巨大的前景，尽管使用了不同的模型系统，但仍有一些显著且可重复的治疗效果。

作者实验室的新数据：靶向CCN2 mRNA沉默体内

以前的研究表明，环肽C*GRGDSPC*选择性地结合激活的HSC（Marcelino和McDevitt）上的VI型胶原受体（CVIR）1995)，可作为一种归巢装置，靶向纤维化肝脏中的HSC（Beljaars等人。2000). 这种方法引起了人们的关注，因为它提供了一种靶向策略，即尽管抗纤维化药物的丰度相对较低，但可以更有效地将其输送到高度原纤维化的HSC。最近，有报道称，干扰素-α1b在脂质体中的脂质体包被一种稍加修饰的CVIR结合肽，可以高效地传递给活化的HSC体内在大鼠肝纤维化胆管结扎模型中具有抗纤维化作用（Du等人。2007). 在本实验室进行的同时进行的实验中，CVIR结合的环肽共价结合到修饰脂质体的表面（图1a） 并用于在CCl小鼠模型中传递CCN2 siRNA4-诱导性肝纤维化（劳伦西亚和布里斯托克2008). 在执行之前体内实验中，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术（图1b） ●●●●。对于体内研究中，Balb/c小鼠接受了CCl的静脉注射4每周连续4天，1周（预防型）或3周（治疗型）。在接下来的2周内，小鼠继续接受CCl4在相同的给药方案下，再加上小鼠CCN2 siRNA，通过静脉注射每周4次，以靶向或非靶向脂质体的形式。对照小鼠接受任何一种油而不是CCl4或靶向脂质体中扰乱的CCN2 siRNA序列。

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一靶向脂质体的生产.合成的环状C*GRGDSPC*肽在其自由N端用双功能连接剂琥珀酰亚胺-S-乙酰硫代乙酸盐（SATA）修饰，其硫醇基团允许随后在修饰的脂质配方（1,2-二油酰基）中偶联到马来酰亚胺连接剂-锡-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[4-（对马来酰亚胺甲基）环己烷-甲酰胺]；18:1 PE-MCC）。用小鼠CCN2 siRNA负载靶向脂质体（正义：5'-CCGCAGAUUGGCGUGGUGCtt；反义：5'-GCCACCAAUCUGGtt；核苷酸546-566）。b条靶向脂质体中的CCN2-siRNA减弱TGF-β刺激的小鼠HSC CCN2生成在体外第2天，用2µM CCN2 siRNA或使用靶向口红的打乱siRNA（SsiRNA）转染原代小鼠HSC 6小时。第二天，用20 ng/ml TGF-β刺激细胞24小时，然后分别用流式细胞术或RT-PCR（插入）分析CCN2蛋白或mRNA（Leask等人.2008; 劳伦西亚等人.2009). CCN2 siRNA（而非SsiRNA）可有效阻断TGF-β诱导的CCN2 mRNA和蛋白

在两种预防措施中（图2)和治疗（图三)模型、αSMA免疫组化染色（活化HSC的标记物）和胶原三色染色显示，在对照油处理动物中，每个分子的水平都很低（图2,​,3,三和大量αSMA和胶原（桥接纤维化）对CCl的反应4（图2,​,3,三，面板b）。这种染色模式在靶向干扰CCN2 siRNA存在时保持不变（图2,​,3,三，面板c）。CCl公司4-非靶向反义CCN2 siRNA降低了αSMA和胶原的诱导水平（图2,​,3,三，第d组），但靶向反义CCN2 siRNA方法更有效，因为αSMA和胶原水平降低到背景水平（图2,​,3,三和基本上无法与经油处理的动物区分。

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靶向CCN2 siRNA抑制预防性纤维化模型中αSMA或胶原沉积的积累。给油后，对肝脏进行切片和处理，以检测αSMA（上片；棕色染色）或胶原沉积（下片；蓝色染色）一或CCl4持续3周b条-e（电子）后2周同时进行治疗b条，在靶向脂质体中扰乱CCN2 siRNAc（c）非靶向脂质体中的CCN2 siRNAd日，或靶向脂质体中的CCN2 siRNA（E）。CCl公司4静脉注射4次30μl剂量（1:1 CCl4：橄榄油）。每周通过静脉注射给予4次siRNA治疗（0.1 mg/kg）。通过图像分析（50个切片；5只小鼠各取10个切片）评估染色强度，并显示在条形图中。所示数据表示来自3个单独实验的数据

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靶向CCN2 siRNA可防止治疗性纤维化模型中的αSMA积聚或胶原沉积。给药后，对肝脏进行切片和处理，以检测αSMA（上片；棕色染色）或胶原沉积（下片；蓝色染色）一或CCl4持续5周b至e后2周同时进行治疗b条，在靶向脂质体中扰乱CCN2 siRNAc（c）非靶向脂质体中的CCN2 siRNAd日或靶向脂质体中的CCN2 siRNAe（电子）.CCl公司4静脉注射4次30μl剂量（1:1 CCl4：橄榄油）。每周通过静脉注射给予4次siRNA治疗（0.1 mg/kg）。通过图像分析（50个切片；5只小鼠各取10个切片）评估染色强度，并显示在条形图中。所示数据表示来自3个单独实验的数据

通过RT-PCR评估，在两种纤维化模型中，CCN2靶向治疗显著减弱了关键纤维化标记物的表达。预防和治疗模型的数据（图4)表明CCl高度诱导胶原α1（I）、αSMA、TGF-β或CCN2的转录水平4按预期处理。这些表达水平在靶向干扰CCN2 siRNA的存在下仍如预期的那样保持较高，并且仅被非靶向CCN2 siRNA略微降低。然而，靶向CCN2-siRNA导致胶原α1（I）、αSMA、，TGF-β或CCN2降低到背景水平，因此与经油处理的对照组无明显区别。因此，这些数据与每个模型的组织学结果一致（图2,​,3三)

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纤维化相关基因的表达。给药后，小鼠的肝脏被切除一或CCl4b条-e（电子）持续3周(预防性模型;上部面板)或5周(治疗模型;下部面板). 在每个模型小鼠的最后2周内，没有接受任何治疗b条，在靶向脂质体中扰乱CCN2 siRNAc（c）非靶向脂质体中的CCN2 siRNAd日或靶向脂质体中的CCN2 siRNAe（电子）提取RNA并进行RT-PCR，以确定所示纤维化标记基因的表达水平（Lawrencia等人。2009). 绘制了与β-肌动蛋白表达相关的数据

一方面，这些数据表明，携带CCN2 siRNA的非靶向脂质体确实表现出治疗效果，正如最近在N-亚硝基二甲胺诱导的大鼠肝纤维化中所证明的那样（George和Tsutsumi2007)这大概反映了这样一个事实，即肝脏是注射后脂质体倾向于积聚的主要器官之一（奥斯特罗和库利斯1989). 另一方面，即使在持续存在纤维化损伤的情况下，靶向脂质体在预防或逆转纤维化和减弱纤维化相关基因表达方面也比非靶向脂质体内更有效。虽然这些发现加强了CCN2肝纤维化的中心作用，但事实上，HSC在纤维化损伤中产生较高水平的CVIR，并且是这些研究中靶向肽的假定结合位点，这表明HSC来源的CCN2在驱动肝纤维化方面可能特别重要体内数据进一步强调了使用靶向脂质体将其他治疗性siRNAs传递到受损肝脏HSC的潜在多功能性。事实上，最近描述了一个类似的系统，在该系统中，维生素a包被脂质体被证明在向大鼠gp46（一种与人类热休克蛋白47同源的胶原蛋白伴侣）递送siRNA后，优先与HSC结合，逆转急慢性纤维化，并延长大鼠的生存期（Sato等人。2008). 还描述了针对其他器官系统如肾脏的靶向策略（Prakash等人。2008)但尚不确定这种复杂程度是否真的是成功实施人类抗纤维化治疗所必需的（弗里德曼2008).

结论

在许多实验系统中已经开发出了多种CCN2拮抗策略，这些实验系统证明CCN2在纤维化形成中起着核心作用，反过来也表明，以CCN2表达或作用为靶点是纤维化病理的合理治疗方法。已经描述了多种有效阻断CCN2的技术，但重要的是要了解其各自的局限性，并注意研究CCN2机制的替代方法。例如，CCN2-null小鼠能够优雅地探索CCN2-依赖途径体内（Ivkovic等人。2003; Chuva de Sousa Lopes等人。2004; Kuiper等人。2007,2008; Nishida等人。2007; Kawaki等人。2008年a,b条)对这些CCN2缺乏动物的特定细胞类型的分析有望进一步明确CCN2依赖机制在体外包括与纤维化相关的疾病（Chen等人。2004; Shi-wen等人。2006; Kennedy等人。2007; Kawaki等人。2008年a; Mori等人。2008; Pala等人。2008; 克劳福德等人。2009). 尽管如此，减少纤维化组织中CCN2生成的能力仍然是一个合理和现实的目标。关于人类的抗纤维化策略，未来的挑战将是确定哪些纤维化病理（如果有的话）最适合CCN2靶向治疗（可能与其他纤维化介质靶向治疗相结合），并确定这种治疗的最佳形式。

致谢

DRB得到了Ben Bryer Trust和NIH拨款5R01AA016003和5R01AA 015554的支持。

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缩写

αSMAα-平滑肌肌动蛋白
CCl公司4四氯化碳
CCN2型结缔组织生长因子
考克斯环氧合酶
CVIR公司VI型胶原受体
发动机控制模块细胞外基质
HSC公司肝星状细胞
PG公司前列腺素
产品分成合同胰腺星状细胞
逆转录聚合酶链反应反转录酶聚合酶链反应
小干扰RNA小干扰RNA
转化生长因子-β转化生长因子β
TIMP公司金属蛋白酶组织抑制剂
肿瘤坏死因子-α肿瘤坏死因子α

工具书类


  • Abraham DJ，Shiwen X，Black CM，Sa S，Xu Y，Leask A（2000）肿瘤坏死因子α通过转化正常和硬皮病成纤维细胞中的生长因子β抑制结缔组织生长因子的诱导。生物化学杂志275:15220–15225。doi:10.1074/jbc.275.20.15220[公共医学]

  • Abreu JG，Ketpura NI，Reversade B，De Robartis EM（2002）结缔组织生长因子（CTGF）通过BMP和TGF-β调节细胞信号传导。自然细胞生物学4:599–604[PMC免费文章][公共医学]

  • Adler SG、Schwartz SM、Williams ME、Arauz-Pacheco C、Bolton WK、Lee TH、Coker G、Sewell KL（2006）1/2型糖尿病和微量白蛋白尿患者FG-3019、抗CTGF单克隆抗体的I期剂量递增研究。美国肾脏病杂志17:157A。doi:10.1681/ASN.2006111191[PMC免费文章][公共医学]

  • Aikawa T，Gunn J，Spong SM，Klaus SJ，Korc M（2006），结缔组织生长因子特异性抗体在原位胰腺癌小鼠模型中抑制肿瘤生长、转移和血管生成。《Mol Cancer Ther》5:1108–1116。doi:10.158/1535-7163.MCT-05-0516[公共医学]
  • 青木Y，Maeno T，青木K，上野M，青木F，青木N，中川J，Sando Y，清水Y，Suga T，Arai M，Kurabayashi M（2008）吡格列酮，过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体，抑制博莱霉素诱导的急性肺损伤和纤维化。呼吸。数字对象标识代码：10.1159/000168676[公共医学]

  • Arnott JA、Nuglozeh E、Rico MC、Arango-Hisijara I、Odgren PR、Safadi FF、Popoff SN（2007）结缔组织生长因子（CTGF/CCN2）是TGF-beta1诱导成骨细胞产生细胞外基质的下游介体。《细胞生理杂志》210:843–852。doi:10.1002/jcp。20917 [公共医学]

  • Beddy D、Mulsow J、Watson RW、Fitzpatrick JM、O'Connell PR（2006）通过转化生长因子β和肿瘤坏死因子α在克罗恩病患者狭窄部位分离的成纤维细胞中表达和调节结缔组织生长因子。英国外科杂志93:1290–1296。doi:10.1002/bjs.5431[公共医学]

  • Beljaars L、Molema G、Schuppan D、Geerts A、De Bleser PJ、Weert B、Meijer DK、Poelstra K（2000）使用识别VI型胶原受体的环状肽修饰的白蛋白成功靶向大鼠肝星状细胞。生物化学杂志275:12743–12751。doi:10.1074/jbc.275.17.12743[公共医学]

  • Black SA Jr，Palamakumbura AH，Stan M，Trackman PC（2007），纤维化牙龈中CCN2/CTGF持续存在的组织特异性机制：cAMP和MAPK信号通路之间的相互作用，以及PGE2-EP3受体介导的c-jun-N末端激酶激活。生物化学杂志282:15416–15429。doi:10.1074/jbc。M610432200个[PMC免费文章][公共医学]

  • Blalock TD、Duncan MR、Varela JC、Goldstein MH、Tuli SS、Grotendorst GR、Schultz GS（2003），人类角膜成纤维细胞培养物和大鼠角膜屈光性角膜切除术后结缔组织生长因子的表达和作用。《眼科科学投资》44:1879–1887。doi:10.1167/iovs.02-0860[公共医学]

  • Blalock TD，Yuan R，Lewin AS，Schultz GS（2004）以结缔组织生长因子mRNA为靶点的锤头状核酶阻断转化生长因子-β介导的细胞增殖。实验眼睛研究78:1127–1136。doi:10.1016/j.exe 2004年1月12日[公共医学]

  • Blom IE，Goldschmeding R，Leask A（2002）结缔组织生长因子的基因调控：抗纤维化治疗的新靶点？《基质生物学》21:473–482。doi:10.1016/S0945-053X（02）00055-0[公共医学]

  • Brigstock DR（1999）结缔组织生长因子/富含半胱氨酸的61/肾母细胞瘤过度表达（CCN）家族。Endocr修订版20:189–206。doi:10.1210/er.20.189[公共医学]

  • Brunner A，Chinn J，Neubauer M，Purchio AF（1991）通过转化生长因子-β调节的基因家族的鉴定。DNA细胞生物学10:293–300[公共医学]

  • Burgess HA、Daugherty LE、Thatcher TH、Lakatos HF、Ray DM、Redonnet M、Phipps RP、Sime PJ（2005）PPARgamma激动剂抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞分化和胶原生成：对肺纤维化治疗的影响。美国生理学杂志肺细胞摩尔生理学288:L1146–L1153。doi:10.1152/ajplung.00383.2004年[公共医学]

  • Burgess JK，Oliver BG，Poniris MH，Ge Q，Boustany S，Cox N，Moir LM，Johnson PR，Black JL（2006）体外，磷酸二酯酶4抑制剂抑制气道基质蛋白沉积。《过敏与临床免疫学杂志》118:649–657。doi:10.1016/j.jaci.2006.05.019[公共医学]
  • Chen CC，Lau LF（2008）CCN基质细胞蛋白的功能和作用机制。国际生物化学与细胞生物学杂志。doi:10.1016/j.biccel.2008.1007.1025[PMC免费文章][公共医学]

  • Chen Y、Abraham DJ、Shi-Wen X、Pearson JD、Black CM、Lyons KM、Leask A（2004）CCN2（结缔组织生长因子）促进成纤维细胞对纤维连接蛋白的粘附。分子生物学细胞15:5635–5646。doi:10.1091/mbc。E04-06-0490号[PMC免费文章][公共医学]

  • Chujo S、Shirasaki F、Kawara S、Inagaki Y、Kinbara T、Inaoki M、Takigawa M、Takehara K（2005）结缔组织生长因子导致小鼠纤维化模型中转化生长因子β诱导的持续原α2（I）胶原基因表达。《细胞生理杂志》203:447–456。doi:10.1002/jcp。20251 [公共医学]
  • Chuva de Sousa Lopes SM、Feijen A、Korving J、Korchynskyi O、Larsson J、Karlsson S、ten Dijke P、Lyons KM、Goldschmeding R、Doevendans P、Mummery CL（2004）小鼠心脏发育和心肌梗死期间结缔组织生长因子表达和Smad信号传导。戴夫·戴恩231:542–550。doi:10.1002/dvdy.20162[公共医学]

  • Cooker LA、Peterson D、Rambow J、Rister ML、Riser RE、Najmabadi F、Brigstock D、Rister BL（2007）TNF-α，但不是IFN-γ，调节CCN2（CTGF）、I型胶原和系膜细胞增殖：在肾纤维化进展中的可能作用。美国生理肾脏生理杂志293:F157–F165。doi:10.1152/ajprenal.00508.2006[公共医学]
  • Crawford LA、Guney MA、Oh YA、Deyoung RA、Valenzuela DM、Murphy AJ、Yancopoulos GD、Lyons KM、Brigstock DR、Economides A、Gannon M（2009），结缔组织生长因子（CTGF）失活导致胰岛细胞系分配和胚胎发育期间β细胞增殖缺陷。摩尔内分泌。doi:10.1210/me.2008-0045[PMC免费文章][公共医学]

  • Dammeier J，Beer HD，Brauchle M，Werner S（1998）地塞米松是一种新型的有效的结缔组织生长因子表达诱导剂。糖皮质激素治疗的意义。生物化学杂志273:18185–18190。doi:10.1074/jbc.273.29.18185[公共医学]

  • Dornhofer N、Spong S、Bennewith K、Salim A、Klaus S、Kambham N、Wong C、Kaper F、Sutphin P、Nacalumi R、Hockel M、Le Q、Longaker M、Yang G、Koong A、Giaccia A（2006），结缔组织生长因子特异性单克隆抗体治疗抑制胰腺癌生长和转移。癌症研究66:5816–5827。doi:10.1158/008-5472.CAN-06-0081[公共医学]

  • Du SL，Pan H，Lu WY，Wang J，Wu J，Wang JY（2007）用于大鼠肝纤维化靶向药物治疗的环状精氨酸-赖氨酸-肽标记脂质体。《药理学实验与治疗杂志》322:560–568。doi:10.1124/jpet.107.122481[公共医学]

  • Duncan MR、Frazier KS、Abramson S、Williams S、Klapper H、Huang X、Grotendorst GR（1999）结缔组织生长因子介导转化生长因子β诱导的胶原合成：cAMP下调。美国财务会计准则委员会期刊13:1774–1786[公共医学]

  • Eberlein M，Heusinger-Ribeiro J，Goppelt-Struebe M（2001）HMG-CoA还原酶抑制剂（他汀类）对结缔组织生长因子（CTGF）诱导的Rho-依赖性抑制。英国药理学杂志133:1172–1180。doi:10.1038/sj.bjp.0704173[PMC免费文章][公共医学]

  • Flyvbjerg A，Khatir D，Jensen JN，Lomongsod E，Liu DY，Rasch R，Usinger WR（2004），中和结缔组织生长因子（CTGF）抗体对肥胖2型糖尿病小鼠长期肾脏的影响。《美国医学会肾病杂志》15:261A。doi:10.1097/01.ASN.0000107560.80107.19

  • Frazier K、Williams S、Kothapalli D、Klapper H、Grotendorst GR（1996），结缔组织生长因子刺激成纤维细胞生长、基质生成和肉芽组织形成。《皮肤病杂志》107:404–411。doi:10.1111/1523-1747.ep12363389[公共医学]

  • Friedman SL（2008）以siRNA为靶点阻止纤维化。国家生物技术公司26:399–400。doi:10.1038/nbt0408-399[公共医学]

  • Fu M，Zhang J，Zhu X，Myles DE，Willson TM，Liu X，Chen YE（2001）过氧化物酶体增殖物激活受体γ通过干扰Smad3抑制转化生长因子β诱导的结缔组织生长因子在人主动脉平滑肌细胞中的表达。生物化学杂志276:45888–45894。doi:10.1074/jbc。M105490200型[公共医学]

  • Gao DF，Niu XL，Hao GH，Peng N，Wei J，Ning N，Wang NP（2007）罗格列酮抑制血管平滑肌细胞中血管紧张素II诱导的CTGF表达-PPAR-gamma在血管纤维化中的作用。生物化学药理学73:185–197。doi:10.1016/j.bcp。2006.09.019 [公共医学]

  • Gao R，Ball DK，Perbal B，Brigstock DR（2004），结缔组织生长因子通过p44/42 MAP激酶在原代大鼠肝星状细胞中诱导c-fos基因激活和细胞增殖。肝病杂志40:431–438。doi:10.1016/j.jhep。2003.11.012 [公共医学]

  • Gao R，Brigstock DR（2004）结缔组织生长因子（CCN2）通过其C末端结构域与整合素αβ3和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖结合，诱导大鼠活化的肝星状细胞粘附。生物化学杂志279:8848–8855。doi:10.1074/jbc。M313204200型[公共医学]

  • Gao R，Brigstock DR（2005）大鼠胰腺星状细胞功能中的结缔组织生长因子（CCN2）：整合素α5beta1作为一种新的CCN2受体。胃肠病学129:1019–1030。doi:10.1053/j.gastro.2005.06.067[公共医学]

  • Gao R，Brigstock DR（2006）结缔组织生长因子（CCN2/CTGF）模块4中的新型整合素α5beta1结合域促进活化胰腺星状细胞的粘附和迁移。肠道55:856–862。doi:10.1136/gut.2005.079178[PMC免费文章][公共医学]

  • George J，Tsutsumi M（2007）siRNA介导的结缔组织生长因子的敲除可预防N-亚硝基二甲胺诱导的大鼠肝纤维化。基因疗法14:790–803。doi:10.1038/sj.gt.3302929[公共医学]

  • Ghiassi-Nejad Z，Friedman SL（2008）抗纤维化治疗进展。专家修订胃肠肝素2:803–816[PMC免费文章][公共医学]

  • Ghosh AK、Bhattacharyya S、Lakos G、Chen SJ、Mori Y、Varga J（2004）过氧化物酶体增殖物激活受体γ对正常皮肤成纤维细胞转化生长因子β信号传导和纤维化前反应的干扰。大黄性关节炎50:1305–1318。doi:10.1002/art.20104[公共医学]

  • Goppelt-Struebe M，Hahn A，Iwanciw D，Rehm M，Banas B（2001）人类系膜细胞结缔组织生长因子（ccn2；ctgf）基因表达的调节：HMG-CoA还原酶抑制剂（他汀类药物）的调节。《分子病理学》54:176–179。doi:10.1136个/mp.54.3.176[PMC免费文章][公共医学]

  • Gressner OA、Lahme B、Rehbein K、Siluschek M、Weikirchen R、Gressner AM（2008）咖啡因的药理应用通过PPARgamma和SMAD2/3依赖性途径抑制TGF-β刺激的结缔组织生长因子在肝细胞中的表达。肝病杂志49:758–767。doi:10.1016/j.jhep。2008.03.029 [公共医学]

  • Haydon V、Bourgier C、Pocard M、Lusinchi A、Aigueperse J、Mathe D、Bourhis J、Vozenin-Brotons MC（2007）普伐他汀抑制人纤维化外植体中的Rho/CCN2/细胞外基质级联，改善大鼠辐射诱导的肠纤维化。《临床癌症研究》13:5331–5340。doi:10.1158/1078-0432.CCR-07-0625[公共医学]

  • Heusinger-Ribeiro J，Fischer B，Goppelt-Struebe M（2004）辛伐他汀对系膜细胞的差异作用。肾脏Int 66:187–195。文件编号：10.1111/j.1523-1755.2004.00710.x[公共医学]

  • Ikawa Y、Ng PS、Endo K、Kondo M、Chujo S、Ishida W、Shirasaki F、Fujimoto M、Takehara K（2008）人结缔组织生长因子单克隆抗体中和可改善转化生长因子-β诱导的小鼠纤维化。《细胞生理杂志》216:680-687。doi:10.1002/jcp。21449 [公共医学]

  • Ikeuchi H、Kuroiwa T、Yamashita S、Hiramatsu N、Maeshima A、Kaneko Y、Hiromura K、Ueki K、Nojima Y（2004）氟伐他汀降低肾成纤维细胞增殖和III型胶原的生成：对肾小管间质纤维化的治疗意义。肾单位，实验肾单位97:E115–E122。doi:10.1159/000079176[公共医学]

  • Ivkovic S、Yoon BS、Popoff SN、Safadi FF、Libuda DE、Stephenson RC、Daluiski A、Lyons KM（2003），结缔组织生长因子在骨骼发育过程中协调软骨生成和血管生成。发展130:2779–2791。doi:10.1242/dev.00505[PMC免费文章][公共医学]

  • Kanemoto K、Usui J、Tomari S、Yokoi H、Mukoyama M、Aten J、Weening JJ、Nagata M（2003）结缔组织生长因子参与新月体肾炎瘢痕形成。实验室投资83:1615–1625。doi:10.1097/01.LAB.000096711.58115.46[公共医学]

  • Karger A、Fitzner B、Brock P、Sparmann G、Emmrich J、Liebe S、Jaster R（2008）大鼠胰腺星状细胞中结缔组织生长因子作用的分子见解。细胞信号20:1865–1872。doi:10.1016/j.cellsig.2008.06.016[公共医学]

  • Kawaki H、Kubota S、Suzuki A、Lazar N、Yamada T、Matsumura T、Ohgawara T、Maeda T、Perbal B、Lyons KM、Takigawa M（2008a）软骨中CCN家族蛋白的综合分析显示CCN2和CCN3对软骨细胞分化的协同调节。《骨矿工研究杂志》23:1751–1764。doi:10.1359/jbmr.080615[PMC免费文章][公共医学]

  • Kawaki H、Kubota S、Suzuki A、Yamada T、Matsumura T、Mandai T、Yao M、Maeda T、Lyons KM、Takigawa M（2008b）CCN2对胚胎小鼠膜内骨形成的功能要求。生物化学与生物物理研究通讯366:450–456。doi:10.1016/j.bbrc.2007.11.55[PMC免费文章][公共医学]

  • Kennedy L，Liu S，Shi-Wen X，Chen Y，Eastwood M，Sabetkar M，Carter DE，Lyons KM，Black CM，Abraham DJ，Leask A（2007）CCN2对小鼠胚胎成纤维细胞的功能是必要的。实验细胞研究313:952–964。doi:10.1016/j.yexcr.2006.12.006[公共医学]

  • Koepke ML，Weber M，Schulze-Lohoff E，Beirowski B，Segerer S，Gross O（2007）HMG-CoA还原酶抑制剂Cervastatin在Alport综合征进行性肾纤维化小鼠模型中的肾脏保护作用。肾拨号移植22:1062–1069。doi:10.1093/nt/gfl810[公共医学]

  • Kothapalli D，Frazier KS，Welply A，Segarini PR，Grotendorst GR（1997）转化生长因子β通过结缔组织生长因子依赖的信号通路诱导NRK成纤维细胞的锚定非依赖性生长。细胞生长差异8:61–68[公共医学]

  • Kothapalli D，Hayashi N，Grotendorst GR（1998）通过cAMP抑制TGF-β刺激的CTGF基因表达和锚定非依赖性生长，确定了细胞周期中的CTGF-依赖性限制点。美国财务会计准则委员会J 12:1151–1161[公共医学]

  • Kuiper EJ、Roestenberg P、Ehlken C、Lambert V、van Treslong-de Groot HB、Lyons KM、Agostini HJ、Rakic JM、Klaassen I、van Noorden CJ、Goldschmeding R、Schlingemann RO（2007）结缔组织生长因子（CTGF）敲除小鼠的血管生成未受损。组织化学-细胞化学杂志55:1139–1147。doi:10.1369/jhc.7A7258.2007年[PMC免费文章][公共医学]

  • Kuiper EJ、van Zijderveld R、Roestenberg P、Lyons KM、Goldschmeding R、Klaassen I、van Noorden CJ、Schlingemann RO（2008）糖尿病小鼠视网膜毛细血管基底膜增厚需要结缔组织生长因子。组织化学与细胞化学杂志56:785-792。doi:10.1369/jhc.2008.950980[PMC免费文章][公共医学]

  • Kunzmann S、Schmidt-Weber C、Zingg JM、Azzi A、Kramer BW、Blaser K、Akdis CA、Speer CP（2007）肺成纤维细胞中的组胺调节结缔组织生长因子的表达：组胺在气道重塑中的潜在作用。《过敏与临床免疫学杂志》119:1398–1407。doi:10.1016/j.jaci.2007.02.018[公共医学]

  • Lawrencia C，Brigstock DR（2008）将结缔组织生长因子siRNA靶向传递至活化的肝星状细胞，以解决小鼠实验性肝纤维化。肝病学48:908A
  • Lawrencia C，Charrier A，Huang G，Brigstock DR（2009）乙醇介导小鼠胰腺星状细胞中结缔组织生长因子（CCN2）的表达。生长因子27:91–99。doi:10.1080/08977190902786319[公共医学]

  • Leask A（2008）星巴克就在这里：这是一个Smad世界。J电池通信信号2:1–2。doi:10.1007/s12079-008-0025-3[PMC免费文章][公共医学]

  • Leask A，Abraham DJ（2003）结缔组织生长因子（一种多功能基质细胞蛋白）在成纤维细胞生物学中的作用。生物化学细胞生物学81:355–363。doi:10.1139/o03-069[公共医学]

  • Leask A，Abraham DJ（2004）TGF-β信号转导与纤维化反应。FASEB J 18:816–827。doi:10.1096/fj.03-1273版本[公共医学]

  • Leask A，Chen S，Pala D，Brigstock DR（2008）活化肝星状细胞中CCN2 mRNA表达和启动子活性的调节。J细胞通讯信号2:49–56。doi:10.1007/s12079-008-0029-z[PMC免费文章][公共医学]

  • Leask A，Holmes A，Abraham DJ（2002），结缔组织生长因子：纤维化发病机制中的一个新的重要因素。《当前风湿病报告》4:136–142。文件编号：10.1007/s11926-002-0009-x[公共医学]

  • Leask A，Holmes A，Black CM，Abraham DJ（2003）CTGF基因调控：TGFbeta 2在成纤维细胞中诱导CTGF的要求。生物化学杂志278:13008–13015。doi:10.1074/jbc。M210366200号[公共医学]
  • Leask，A.、Parapuram，S.K.、Shi-Wen，X.和Abraham，D.J.（2009）结缔组织生长因子（CTGF，CCN2）基因调控：纤维增生性疾病的有效临床生物标志物？J细胞通讯信号，doi:10.1007/s12079-12009-10037-12077[PMC免费文章][公共医学]

  • Li C，Yang CW，Park JH，Lim SW，Sun BK，Jung JY，Kim SB，Kim YS，Kin J，Bang BK（2004）普伐他汀治疗减轻慢性环孢素诱导肾病大鼠模型的间质炎症和纤维化。美国生理肾脏生理杂志286:F46–F57。doi:10.1152/ajprenal.00428.2002[公共医学]

  • Li G，Li D，Xie Q，Shi Y，Jiang S，Jin Y（2008）RNA干扰结缔组织生长因子阻止大鼠肝星状细胞活化和细胞外基质生成。《基因医学杂志》10:1039–1047。doi:10.1002/jgm.1223[公共医学]

  • Li G，Xie Q，Shi Y，Li D，Zhang M，Jiang S，Zhou H，Lu H，Jin Y（2006）siRNA抑制结缔组织生长因子可预防大鼠肝纤维化。《基因医学杂志》8:889–900。doi:10.1002/jgm.894[公共医学]

  • Liang Y，Li C，Guzman VM，Evinger AJ 3rd，Protzman CE，Krauss AH，Woodward DF（2003）《前列腺素F2{alpha}，Bimatoprost（前列腺素）和Butaprost（EP2激动剂）对Cyr61和结缔组织生长因子基因表达的比较》。生物化学杂志278:27267–27277。doi:10.1074/jbc。M301009200号[公共医学]

  • Lin J、Liliensiek B、Kanitz M、Schimanski U、Bohrer H、Waldherr R、Martin E、Kauffmann G、Ziegler R、Nawroth PP（1998）牛主动脉内皮细胞、成纤维细胞和平滑肌细胞中TNF-α差异调节基因的分子克隆。心血管研究38:802-813。doi:10.1016/S0008-6363（98）00055-8[公共医学]

  • Liu X，Luo F，Pan K，Wu W，Chen H（2007）高糖上调人血管平滑肌细胞中结缔组织生长因子的表达。BMC细胞生物学8:1。doi:10.1186/1471-2121-8-1[PMC免费文章][公共医学]

  • Luo GH，Lu YP，Song J，Yang L，Shi YJ，Li YP（2008）小干扰RNA抑制结缔组织生长因子可预防慢性移植肾肾病大鼠肾纤维化。移植程序40:2365–2369。doi:10.1016/j.transproceed.2008.07.100[公共医学]

  • Mageto Y，Flaherty K，Brown K，Fong A，Raghu G（2004）特发性肺纤维化患者抗连接组织生长因子人类单克隆抗体FG-3019的安全性和耐受性。胸围126:7735a

  • Makino H、Mukoyama M、Sugawara A、Mori K、Suganami T、Yahata K、Fujinaga Y、Yokoi H、Tanaka I、Nakao K（2003）结缔组织生长因子和前列腺素在早期链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏中的作用：阿司匹林治疗的作用。临床实验肾病7:33–40。doi:10.1007/s10157030004[公共医学]

  • Marcelino J，McDevitt CA（1995），关节软骨软骨细胞与VI型胶原组织形式的粘附。生物化学生物物理学报1249:180–188[公共医学]

  • Martin J，Denver R，Bailey M，Krum H（2005）阿托伐他汀对心脏成纤维细胞的体外抑制作用：对心室重塑的影响。临床实验药理学32:697–701。文件编号：10.1111/j.1440-1681.2005.04256.x[公共医学]

  • Mazaheri MK，Schultz GS，Blalock TD，Caffee HH，Chin GA（2003）结缔组织生长因子在乳房植入弹性体囊形成中的作用。《整形外科年鉴》50:263–268。doi:10.1097/01.SAP.000046781.75625.69[公共医学]

  • Meyer-Ter-Vehn T，Katzenberger B，Han H，Grehn F，Schlunck G（2008）洛伐他汀抑制TGF-β诱导的人肌腱成纤维细胞转分化。《眼科科学投资》49:3955-3960。doi:10.1167/iovs.07-1610[公共医学]

  • Milam JE、Keshamouni VG、Phan SH、Hu B、Gangireddy SR、Hogaboam CM、Standiford TJ、Thannickal VJ、Reddy RC（2008）PPARγ激动剂抑制人肺成纤维细胞的促纤维化表型和博来霉素诱导的肺纤维化。美国生理学杂志肺细胞分子生理学294:L891–L901。doi:10.1152/ajplung.00333.2007年[PMC免费文章][公共医学]

  • Mori T、Kawara S、Shinozaki M、Hayashi N、Kakinuma T、Igarashi A、Takigawa M、Nakanishi T、Takehara K（1999），结缔组织生长因子与转化生长因子β在持续性纤维化中的作用和相互作用：小鼠纤维化模型。《细胞生理杂志》181:153–159。doi:10.1002/（SICI）1097-4652（199910）181:1&lt；153:：AID-JCP16&gt；3.0.CO；2公里[公共医学]

  • Mori Y、Hinchcliff M、Wu M、Warner-Blankenship M、Lyons KM、Varga J（2008）结缔组织生长因子/CCN2-小鼠胚胎成纤维细胞保持完整的转化生长因子-β反应性。实验细胞研究314:1094–1104。doi:10.1016/j.yexcr.2007.12.010[PMC免费文章][公共医学]

  • Moriyama T，Nagatoya K（2004）Rho-ROCK系统作为预防间质纤维化的新治疗靶点。《药物新闻展望》17:29-34。doi:10.1358/dnp。2004.17.1.829023 [公共医学]

  • Nishida T、Kawaki H、Baxter RM、Deyoung RA、Takigawa M、Lyons KM（2007）CCN2（结缔组织生长因子）对软骨细胞的细胞外基质生成和整合素信号传导至关重要。J小区通信信号1:45–58。doi:10.1007/s12079-007-0005-z[PMC免费文章][公共医学]

  • Okada H、Kikuta T、Kobayashi T、Inoue T、Kanno Y、Takigawa M、Sugaya T、Kopp JB、Suzuki H（2005）肾小管上皮中表达的结缔组织生长因子在肾纤维化中起着关键作用。《美国肾脏病杂志》16:133–143。doi:10.1681/ASN.2004040339[公共医学]

  • Ostro MJ，Cullis PR（1989）脂质体作为注射给药系统的使用。美国医院药学杂志46:1576–1587[公共医学]

  • Ou XM，Feng YL，Wen FQ，Huang XY，Xiao J，Wang K，Wang T（2008）辛伐他汀减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化。《中国医学杂志》（英语）121:1821–1829[公共医学]

  • Pala D，Kapoor M，Woods A，Kennedy L，Liu S，Chen S，Bursell L，Lyons KM，Carter DE，Beier F，Leask A（2008），局部黏附激酶/Src抑制早期软骨形成：CCN2的中心作用。生物化学杂志283:9239–9247。doi:10.1074/jbc。M705175200型[PMC免费文章][公共医学]

  • Pi L，Oh SH，Shupe T，Petersen BE（2005）大鼠2-AAF/PHx后肝脏再生过程中结缔组织生长因子在卵圆细胞反应中的作用。胃肠病学128:2077–2088。doi:10.1053/j.gastro.2005.03.081[PMC免费文章][公共医学]

  • Pickles M，Leask A（2007）《PANC-1细胞中CCN2启动子活性的分析：ras/MEK/ERK的调节》，《细胞通讯信号》1:85–90。doi:10.1007/s12079-007-0008-9[PMC免费文章][公共医学]

  • Prakash J，de Borst MH，van Loenen-Weemaes AM，Lacombe M，Opdam F，van Goor H，Meijer DK，Moolenaar F，Poelstra K，Kok RJ（2008）转化生长因子-βI型受体激酶抑制剂对近端肾小管细胞的细胞特异性递送，以治疗肾纤维化。药学研究25:2427–2439。doi:10.1007/s11095-007-9515-x[公共医学]

  • Rachfal AW，Brigstock DR（2005）CCN蛋白质的结构和功能特性。维塔姆霍姆70:69–103。doi:10.1016/S0083-6729（05）70003-0[公共医学]

  • Ricupero DA、Rishikof DC、Kuang PP、Poliks CF、Goldstein RH（1999）前列腺素E对结缔组织生长因子表达的调节（2）。美国生理学杂志277:L1165–L1171[公共医学]

  • Ruperez M、Rodrigues-Diez R、Blanco-Colio LM、Sanchez-Lopez E、Rodriggez-Vta J、Esteban V、Carvajal G、Plaza JJ、Egido J、Ruiz-Ortega M（2007）HMG-CoA还原酶抑制剂降低血管紧张素Ⅱ诱导的血管纤维化：RhoA/ROCK和MAPK通路的作用。高血压50:377–383。doi:10.1161/高血压AHA.107.091264[公共医学]

  • Safadi FF，Xu J，Smock SL，Kanaan RA，Selim AH，Odgren PR，Marks SC Jr，Owen TA，Popoff SN（2003）骨中结缔组织生长因子的表达：其在体外成骨细胞增殖和分化以及体内骨形成中的作用。《细胞生理杂志》196:51–62。doi:10.1002/jcp。10319 [公共医学]

  • Sakamoto N、Sugimura K、Kawashima H、Tsuchida K、Takemoto Y、Naganuma T、Tatsumi S、Nakatani T（2005）葡萄糖和炎症细胞因子对人类腹膜间皮细胞TGF-beta1和CTGF mRNA表达的影响。国际分子医学杂志15:907–911[公共医学]

  • Sato Y、Murase K、Kato J、Kobune M、Sato T、Kawano Y、Takimoto R、Takada K、Miyanishi K、Matsunaga T、Takayama T、Niitsu Y（2008）《使用维生素A偶联脂质体传递siRNA对抗胶原蛋白特异性伴侣的肝硬化决议》。国家生物技术26:431–442。doi:10.1038/nbt1396[公共医学]

  • Shi-Wen X，Leask A，Abraham D（2008）结缔组织生长因子/CCN2在组织修复、瘢痕形成和纤维化中的调节和功能。细胞因子生长因子修订版19:133–144。doi:10.1016/j.cytogfr.2008.01.002[公共医学]

  • Shi-wen X、Stanton LA、Kennedy L、Pala D、Chen Y、Howat SL、Renzoni EA、Carter DE、Bou-Gharios G、Stratton RJ、Pearson JD、Beier F、Lyons KM、Black CM、Abraham DJ、Leask A（2006）CCN2对于胚胎成纤维细胞中转化生长因子-beta1的粘附反应是必要的。生物化学杂志281:10715–10726。doi:10.1074/jbc。M511343200型[公共医学]

  • Shimo T、Kubota S、Yoshioka N、Ibaragi S、Isowa S、Eguchi T、Sasaki A、Takigawa M（2006），结缔组织生长因子（CTGF/CCN2）在乳腺癌溶骨转移中的致病作用。《骨矿工研究杂志》21:1045–1059。doi:10.1359/jbmr.060416[公共医学]

  • Shimo T、Nakanishi T、Nishida T、Asano M、Sasaki A、Kanyama M、Kuboki T、Matsumura T、Takigawa M（2001）CTGF（一种肥大软骨细胞特异性基因产物）参与肿瘤血管生成。肿瘤学61:315–322。数字对象标识代码：10.1159/000055339[公共医学]

  • Song Y，Li C，Cai L（2004）氟伐他汀可能通过抑制结缔组织生长因子介导的细胞外基质积聚来预防肾病。实验分子病理学76:66-75。doi:10.1016/j.yexmp。2003.08.002 [公共医学]

  • Stratton R、Rajkumar V、Ponticos M、Nichols B、Shiwen X、Black CM、Abraham DJ、Leask A（2002）前列环素衍生物通过抑制Ras/MEK/ERK途径防止TGF-β的纤维化反应。FASEB J 16:1949-1951年[公共医学]

  • Stratton R、Shiwen X、Martini G、Holmes A、Leask A、Haberberger T、Martin GR、Black CM、Abraham D（2001）Iloprost抑制成纤维细胞和硬皮病患者皮肤中结缔组织生长因子的生成。临床研究杂志108:241–250[PMC免费文章][公共医学]

  • Sun K，Wang Q，Huang XH（2006）PPARγ抑制大鼠肝星状细胞的生长和TGF-β诱导的结缔组织生长因子的表达。《药物学报》27:715-723。数字对象标识代码：10.1111/j.1745-7254.2006.00299.x[公共医学]

  • Tong ZY，Brigstock DR（2005）过度产生肝细胞结缔组织生长因子的转基因小鼠的肝脏炎症和纤维化。肝病学42（补充1）：A1031

  • Tong ZY，Brigstock DR（2006）结缔组织生长因子中血小板反应蛋白结构同源重复序列的内在生物活性。内分泌杂志188:R1–R8。doi:10.1677/joe.1.06719[公共医学]

  • Uchio K，Graham M，Dean NM，Rosenbaum J，Desmouliere A（2004）实验性肝纤维化期间结缔组织生长因子反义寡核苷酸对结缔组织增长因子和I型胶原mRNA表达的下调。创伤修复再生12:60–66[公共医学]

  • Verrecchia F，Mauviel A（2007）转化生长因子-β和纤维化。世界胃肠病学杂志13:3056–3062[PMC免费文章][公共医学]

  • Vieira JM Jr、Mantovani E、Rodrigues LT、Delle H、Noronha IL、Fujihara CK、Zatz R（2005）辛伐他汀可减轻单侧输尿管梗阻大鼠的肾脏炎症、肾小管转分化和间质纤维化。肾拨号移植20:1582–1591。doi:10.1093/ndt/gfh859[公共医学]

  • 王华，丹姿，江华（2008）全反式维甲酸对大鼠胆总管结扎所致肝纤维化的影响。华中科技大学医学杂志28:553–557[公共医学]

  • Wang JF、Olson ME、Ma L、Brigstock DR、Hart DA（2004a）结缔组织生长因子siRNA调节正常和TGF-β1刺激的猪皮肤成纤维细胞中分子子集的mRNA水平。伤口修复再生12:205–216。doi:10.1111/j.1067-1927.2004.012113.x[公共医学]

  • 王强，郭刚，刘德，张伟，Usinger W，Li D，Brenner M，Yeowell D，Lin A（2004b）用抗结缔组织生长因子（CTGF）单克隆抗体FG-3019治疗糖尿病（DM）大鼠肾缺血再灌注（IR）诱导的糖尿病肾病（DN）的改善。《美国肾脏病杂志》15:737A

  • Wang W，Liu F，Chen N（2007）过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-gamma）激动剂减弱TGF-β1在肾间质成纤维细胞中诱导的纤维化前反应。调解人激怒2007:62641[PMC免费文章][公共医学]

  • Watts KL，Sampson EM，Schultz GS，Spiteri MA（2005）辛伐他汀抑制肺成纤维细胞中的生长因子表达并调节促纤维化标记物。美国呼吸细胞分子生物学杂志32:290–300。doi:10.1165/rcmb.2004-0127OC[公共医学]

  • Watts KL，Spiteri MA（2004）辛伐他汀通过Rho信号机制消除了通过转化生长因子-β的结缔组织生长因子表达和诱导。美国生理学杂志肺细胞分子生理学287:L1323–L1332。doi:10.1152/ajplung.00447.2003[公共医学]

  • Wei JL，Ma CY，Zhang YD，Li Y（2007a）普伐他汀和吡格列酮对转化生长因子-beta1诱导的肾小管上皮细胞的协同作用。细胞生物学国际期刊31:451–458。doi:10.1016/j.cellbi.2006.11.008[公共医学]

  • Wei JL，Peng YM，Liu F（2007b）TGF-β1诱导肾小管上皮细胞结缔组织生长因子和纤维连接蛋白分泌：曲格列酮的抑制作用。细胞生物学国际31:30–34。doi:10.1016/j.cellbi.2006.09.004[公共医学]

  • Xiao R、Kanekura T、Yoshida N、Higashi Y、Yan KL、Fukushige T、Kanzaki T（2008）9-Cis-维甲酸通过诱导硬皮病成纤维细胞中环氧合酶-2的表达和前列腺素E2的产生而表现出抗纤维化活性。临床实验皮肤病33:484–490。doi:10.1111/j.1365-2230.2008.02727.x[公共医学]

  • 肖润，刘凤英，罗建业，杨晓杰，文海峰，苏玉伟，闫吉隆坡，李永平，梁玉生（2006）小干扰RNA对系统性硬化患者皮肤成纤维细胞结缔组织生长因子和I型和III型胶原表达的影响。英国皮肤病杂志155:1145–1153。doi:10.1111/j.1365-2133.2006.07438.x[公共医学]

  • Xie S，Sukkar MB，Issa R，Oltmanns U，Nicholson AG，Chung KF（2005）《TGF-β1诱导的气道平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的调节》。美国生理学杂志肺细胞分子生理学288:L68–L76。doi:10.1152/ajplung.00156.2004年[公共医学]

  • Yamanaka O、Miyazaki K、Kitano A、Saika S、Nakajima Y、Ikeda K（2009）通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因转移抑制小鼠损伤诱导的结膜瘢痕形成。《眼科科学投资》50:187–193。doi:10.1167/iovs.08-2282[公共医学]

  • Yamanaka O、Saika S、Ikeda K、Miyazaki K、Kitano A、Ohnishi Y（2008）结缔组织生长因子调节人结膜下成纤维细胞的细胞外基质生成及其体外增殖和迁移。《眼科杂志》52:8-15。doi:10.1007/s10384-007-0497-3[公共医学]

  • Yokoi H、Mukoyama M、Mori K、Kasahara M、Suganami T、Sawai K、Yoshioka T、Saito Y、Ogawa Y、Kuwabara T、Sugawara A、Nakao K（2008）足细胞中结缔组织生长因子的过度表达会加重小鼠的糖尿病肾病。肾脏Int 73:446–455。doi:10.1038/sj.ki.5002722[公共医学]

  • Yokoi H、Mukoyama M、Nagae T、Mori K、Suganami T、Sawai K、Yoshioka T、Koshikawa M、Nishida T、Takigawa M，Sugawara A、Nakao K（2004）通过反义治疗减少结缔组织生长因子可改善肾小管间质纤维化。《美国肾脏病杂志》15:1430–1440。doi:10.1097/01.ASN.0000130565.69170.85[公共医学]

  • Yokoi H、Mukoyama M、Sugawara A、Mori K、Nagae T、Makino H、Suganami T、Yahata K、Fujinaga Y、Tanaka I、Nakao K（2002）结缔组织生长因子在纤维连接蛋白表达和小管间质纤维化中的作用。美国生理学杂志肾脏生理学282:F933–F942[公共医学]

  • Yokoi H、Sugawara A、Mukoyama M、Mori K、Makino H、Suganami T、Nagae T、Yahata K、Fujinaga Y、Tanaka I、Nakao K（2001）结缔组织生长因子在转化生长因子β促纤维化作用中的作用：预防肾纤维化的潜在靶点。美国肾脏病杂志38:S134–S138。doi:10.1053/ajkd.2001.27422[公共医学]

  • Yu J，Prado GN，Schreiber B，Polgar P，Taylor L（2002），前列腺素E（2）EP受体和cAMP在结缔组织生长因子表达中的作用。Arch Biochem Biophys 404:302–308。doi:10.1016/S0003-9861（02）00276-X[公共医学]

  • Yuhua Z，Wanhua R，Chenggang S，Jun S，Yanjun W，Chunqing Z（2008）短发夹RNA对结缔组织生长因子的干扰抑制肝星状细胞中胶原合成和细胞外基质分泌。肝脏Int 28:632–639[公共医学]

  • Zheng S，Chen A（2006）姜黄素通过抑制结缔组织生长因子的基因表达，抑制活化肝星状细胞中细胞外基质基因的表达。美国生理学杂志胃肠道试验肝脏生理学290:G883–G893。doi:10.1152/ajpgi.00450.2005[公共医学]
文章来自细胞通信与信号学杂志由以下人员提供国际CCN协会