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细胞生物学杂志。2001年3月5日；152(5): 1079–1086.
数字对象标识：10.1083/jcb.152.5.1079年10月10日
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PMID：11238462

Caveolin-2靶向细胞中一种新的“膜结构域”——脂滴

藤本丰史,一 Hiroshi Kogo公司,一 石黑敏子,b条 Kumi Tauchi公司,一和野村良治一
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摘要

Caveolin-1和-2在非肌肉细胞中构成小窝的框架。在本研究中，我们通过免疫荧光和免疫电子显微镜以及亚细胞分离表明，小窝蛋白-2，尤其是其β亚型，靶向脂质滴（LD）的表面。布雷费尔丁A处理诱导LD中小窝蛋白-2和小窝蛋白-1的进一步积累。对小鼠小窝蛋白-2缺失突变体的分析表明，中心疏水结构域（残基87–119）和NH2-末端（残基70-86）和COOH末端（残基120-150）亲水结构域都是LD中定位所必需的。NH2-COOH末端结构域似乎分别与膜结合和内质网退出有关，这意味着小窝蛋白-2被合成并作为膜蛋白转运到LD。结合最近发现LD含有非酯化胆固醇和raft蛋白，结果表明LD表面可能起到膜结构域的作用。这也表明LD与小窝蛋白介导的脂质分子贩运有关。

关键词：脂滴，小窝蛋白-2，小窝素-1，膜结构域，布氏蛋白A

介绍

小泡是质膜的微小内陷，被认为在信号转导、胆固醇转运和内吞中发挥重要作用(安德森1998;Fujimoto等人，1998年;Okamoto等人，1998年). 小窝蛋白对上述功能至关重要，并形成小窝的结构框架(Parton 1996年). 在小窝蛋白家族成员中，小窝蛋白-1足以诱导小窝形成，与胆固醇结合，并与信号分子相互作用。小窝蛋白-3在有限种类的细胞中表达，被认为与小窝蛋白-1起着类似的作用。相比之下，小窝蛋白-2的功能还没有被详细定义，除了最近的结果表明它参与了深小窝内陷的形成(Scheiffele等人，1998年;Fujimoto等人，2000年).

在本研究中，我们发现小窝蛋白-2可以靶向脂滴（LD）的表面。LD不仅存在于脂肪细胞中，在各种条件下也存在于许多其他细胞中。一个显著的例子是粥样斑块中的泡沫细胞，但LD的功能意义尚不清楚。我们的结果与LD表面是由磷脂单层组成的“半膜”的假设一致。有趣的是，据报道LD含有非酯化胆固醇(Prattes等人，2000年)和与信号传导相关的raft蛋白(Yu等人，1998年,Yu等人，2000年). 基于这些发现，我们提出LD的表面具有膜结构域的功能。

材料和方法

细胞培养

细胞生长在含有10%FCS的DME[HepG2、正常大鼠肾脏（NRK）和人成纤维细胞]、含有10%马血清和2.5%FCS（Y-1）的Ham’s F-12/DME或含有5%马血清和激素（FRTL-5）的Ham's F-12/Coon’s培养基中。为了诱导LD的形成，用油酸与BSA（OA/BSA）复合培养细胞(Brasaemle等人，1997年)持续2天。

转染

通过磷酸钙或DEAE-右旋糖酐方法进行瞬时细胞转染。使用LipofectAMINE 2000试剂制备稳定转染细胞，并通过G418（GIBCO BRL）进行筛选。用逆转录聚合酶链反应从人成纤维细胞和3T3-L1细胞中克隆Caveolins；用标准PCR构建各种突变蛋白，并对其进行测序控制。增强型绿色荧光蛋白（EGFP）被标记到NH2通过使用pEGFP载体（CLONTECH Laboratories，Inc.）获得小窝蛋白-2分子的末端。

抗体

小窝蛋白-2（转导实验室）、小窝蛋白-1（圣克鲁斯生物技术公司）、嗜脂蛋白（孕激素）和钠的抗体+/K（K）+-购买ATP酶（亲和生物试剂）。GM130抗体(Nakamura等人，1995年)，急诊室(Louvard等人，1982年)和钙网蛋白(Ioshii等人，1995年)分别由中村信弘博士（日本金泽金泽大学）、丹尼尔·卢瓦德博士（法国巴黎居里研究院）和吉田俊一博士（日本Mie大学）捐赠。二级抗体购自Jackson ImmunoResearch Laboratories和Amersham Pharmacia Biotech。

亚细胞分离和Western印迹

LD按所述从氮气空化物中分离(Yu等人，2000年). TCA沉淀的组分用SDS-PAGE分离，用硝酸纤维素纸印迹，并用抗体检测。与HRP结合抗体孵育后，通过化学发光观察反应。蛋白质含量通过BCA分析（Pierce Chemical Co.）测定。

免疫荧光显微镜

为了定位小窝蛋白-2，用3%甲醛固定的细胞用Triton X-100渗透，以标记LD和高尔基体，或用甲醇标记质膜。LD用苏丹红III（Chroma）染色，并观察到橙红色荧光。一些细胞在固定前用BFA（钙生物化学）和诺卡唑（ICN-Biomedicals）处理。通过常规或共焦荧光显微镜观察样品。

免疫电子显微镜

将细胞固定在1%甲醛中15–30分钟。对于超薄冷冻切片，用德川法处理渗入2.3 M蔗糖的细胞颗粒(德意志1986). 对于冷冻断裂复制品，用30%甘油渗透的细胞颗粒进行冷冻断裂，并按照前面所述标记铂/碳复制品(藤本1995).

结果

Caveolin-2靶向LD

HepG2缺乏小窝蛋白，并且在标准培养条件下具有显著的LD。转染HepG2的人小窝蛋白-2β呈圆形标记，苏丹红III染色显示其位于LD周围(图1a） 。LD周围出现间断性小窝蛋白-2标记。四个稳定表达小窝蛋白-2β的细胞株给出了相同的结果，大多数实验使用克隆A-8。小窝蛋白-2的表达似乎没有改变HepG2中LD的大小和数量。相反，转染HepG2的人小窝蛋白-1出现在细胞表面，与LD无关(图1b） ●●●●。转染的小窝蛋白-2也出现在其他细胞类型的LD中。在FRTL-5中，LD在正常培养条件下不存在，转染的小窝蛋白-2在高尔基体中可见（未显示；Mora等人，1999年). 但当OA/BSA诱导LD时，在其周围观察到caveolin-2(图1c） ●●●●。

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HepG2稳定表达小窝蛋白-2β（a）和小窝蛋白-1（b）的共焦显微镜。Caveolins（绿色），LD被Sudan III染色（红色）。小窝蛋白-2在LD周围不连续出现，而小窝蛋白-1沿着细胞边缘出现，与LD无关。（c） FRTL-5瞬时转染全长caveolin-2 cDNA并与OA/BSA培养2 d。在LD（红色）周围观察到caveolin-2（绿色）。用小窝蛋白-2β（d）或全长小窝蛋白2（e）cDNA稳定转染HepG2后，标记小窝蛋白-2（绿色）和GM130（红色）。与GM130重叠的小窝蛋白-2β标记很少（d），而细胞中主要亚型小窝蛋白2α主要定位于高尔基体（e）。箭头表示LD周围的标签。棒材，10μm。

HepG2中的Caveolin-2β几乎只定位于LD，并且标记与高尔基体蛋白GM130共存(Nakamura等人，1995年)是稀缺的(图1d） ●●●●。另一方面，全长caveolin-2 cDNA的转染引起了显著的高尔基体标记，LD仅偶尔被标记(图1e） ●●●●。Western blotting显示这些细胞中主要的小窝蛋白-2α和少量的小窝素-2β（未显示）。在上述任何细胞系中，抗GM130或抗ER抗体均未标记LD（未显示）。

免疫电镜证实小窝蛋白-2在LD中的定位。在冷冻切片中，标记是沿着LD边缘定位的，而不是在相邻的细胞器中(图2a） 。值得注意的是，大多数金颗粒都是在小团簇中出现的。LD在冷冻断裂复制品中的定位更为明显。通过类离子形态鉴定LD；小窝蛋白-2的标记也出现在集群中，仅在LD的P面上可见，而在LD E面上未见(图2b） ●●●●。

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（a和b）表达小窝蛋白-2β的HepG2的免疫电子显微镜（克隆a-8）。条形，500 nm。（a） 超薄冷冻切片。在LD边缘观察到标记小窝蛋白-2的金颗粒，呈小簇状（箭头）；LD的内容看起来是空的。（b） 冻结断裂复制副本。LD的P面上观察到小窝蛋白-2的金颗粒呈簇状（箭头），呈类离子形态。LD（E）的E面没有标记。（c） HepG2克隆A-8亚细胞组分的蛋白质印迹。图表显示了各部分的蛋白质含量。前两个组分（#1和#2）几乎不含蛋白质，但显示小窝蛋白-2和嗜脂蛋白的阳性信号。GM130、66-kD蛋白质和钠+/K（K）+-ATP酶（高尔基体、ER和质膜标记物）仅存在于底部组分中。

亚细胞分离也证实了LD的定位(图2c） ●●●●。通过超速离心获得的前两个组分仅含总蛋白的1.3%，并且没有ER、高尔基体和质膜的标记。但这些组分对嗜脂蛋白（一种LD特异性蛋白）呈阳性反应，并且含有大量的小窝蛋白-2。

即使Caveolin-1同时表达，在LD中也可以看到Caveolin-2。转染NRK和Y-1的EGFP小鼠caveolin-2被招募到LD(图3a） 。小窝蛋白-2的LD定位也见于用未标记小窝蛋白-1和-2双重转染的HepG2（克隆6；图3b和图c). LD存在于大多数细胞中，但小窝蛋白-2的LD定位并不常见。值得注意的是，在LD中显示小窝蛋白-2的细胞中，LD中没有观察到小窝蛋白-1的标记，而是出现在质膜中。从双转染HepG2获得的LD组分中缺乏小窝蛋白-1信号证实了这一结果(图3d） ●●●●。

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（a） NRK表达EGFP–小窝蛋白-2以及内源性小窝蛋白-1和-2，与OA/BSA培养。LD（红色）周围可见EGFP-caveolin-2（绿色）（箭头）。（b和c）稳定表达小窝蛋白-1和-2的HepG2（克隆6）。Caveolin-1（红色）和-2（绿色）在质膜（b）中显示共定位，在一些细胞中仅在LD（红色）周围观察到Caveolin-2（绿色）（箭头）（c）。分别用甲醇和Triton X-100处理b和c细胞，以显示质膜（b）和细胞内（c）标记。棒材，10μm。（d） HepG2克隆6亚细胞组分的蛋白质印迹。LD组分（#1和#2）中只检测到caveolin-2，而没有检测到cavelolin-1。

Brefeldin A引起LD中Caveolins的积累

亚细胞组分的免疫荧光标记和Western印迹均无法检测到NRK、Y1或人成纤维细胞LD中的内源性小窝蛋白-2（未显示）。α对β亚型的优势(Scherer等人，1997年)可能是负面结果的原因。然而，当表达HepG2的小窝蛋白-2α用5μg/ml布雷费尔丁A（BFA）处理时，LD分布在2小时内急剧增加(图4a） 。当BFA应用于负载OA/BSA的人成纤维细胞时，内源性小窝蛋白-1和-2均在LD中标记(图4b和图c). 与小窝蛋白-1相比，小窝蛋白-2的LD标记更早出现。结果表明，当BFA干扰正常运输时，LD中可以检测到内源性小窝蛋白-2。

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（a） 用BFA处理稳定转染全长小窝蛋白-2 cDNA的HepG2 2小时。在大多数细胞中，小窝蛋白2（绿色）局限于LD（红色）（箭头）。（b和c）用BFA处理人类成纤维细胞16小时。在LD（红色）（箭头）周围观察到小窝蛋白-2（b）和小窝蛋白-1（c）（绿色）。（d） HepG2稳定转染全长小窝蛋白-1 cDNA。在BFA治疗7小时后，偶尔在LD（红色）周围的细胞中可以看到小窝蛋白-1（绿色）（箭头所示）。棒材，10μm。

有趣的是，BFA治疗也在仅表达caveolin-1的HepG2中招募caveolin-1到LD(图4d） ●●●●。但小窝蛋白-1向LD的重新分布很慢，在2小时时无法检测到。即使在7小时时，也仅在偶尔的细胞中看到，大多数标记仍停留在细胞表面。

靶向LD所需的序列

为了确定靶向LD所需的分子域，构建了小鼠小窝蛋白-2突变体(图5a） 并瞬时转染HepG2。首先，为了检查小窝蛋白-2α是否进入LD，用亮氨酸取代第二个甲硫氨酸（残基14）以消除β亚型的产生。突变体（M14/L）在高尔基体和LD中呈现双重分布，证明α亚型可以分布在LD中(图5b） ●●●●。制作了另一个用丙氨酸（G2/A）取代甘氨酸（残基2）的突变体，以检测NH的可能影响2-靶向上的末端肉豆蔻酰化。G2/A的分布类似于完整的α亚型，因此肉豆蔻酰化不能解释高尔基体的优先定位(图5b） ●●●●。结果表明，α亚型特有的13个氨基酸可能降低了对LD的亲和力，或者可能是高尔基体定位的强烈信号。

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（a） 小窝蛋白-2突变体及其在HepG2瞬时表达中的分布图。（b–e）通过抗小窝蛋白-2标记（b、d和e）或EGFP（c）（绿色）观察突变体的分布，并与LD、Golgi或ER标记（红色）进行比较。箭头标记明显围绕LD的标签。棒材，10μm。（b） 单个氨基酸替换物用于检查α和β亚型之间的差异。即使当第二个翻译起始位点蛋氨酸-14被亮氨酸（M14/L）取代，或假定的肉豆蔻酰化位点甘氨酸-2被丙氨酸（G2/a）取代时，其分布与小窝蛋白-2α的分布并无不同。（c） NH公司2-末端缺失突变体融合到EGFP的COOH末端。多达69个残基（70-162）的缺失并不影响LD的定位，但进一步截断（71-162）会导致细胞溶质分布。（d） COOH末端缺失突变体。对于α和β亚型，当序列保持到第150个残基时，其分布没有改变。随着更多氨基酸被删除，LD和高尔基体中的定位变得不那么明显，网络状标记增多。后一种标记与钙网蛋白类似（显示14-127的结果）。当诺卡唑使内质网从细胞边缘（箭头）收缩时，突变体的标记显示出匹配的重新分布。（e） 缺乏中心疏水结构域[βTM（−）]的Caveolin-2β定位于高尔基体，被抗-GM130标记。从caveolin-2α中删除相同的结构域得到了相同的结果。

第二，NH2caveolin-2的COOH末端被截断成不同的长度。因为NH2-末端截短突变体与抗小窝蛋白-2抗体无反应(Das等人，1999年)，融合到EGFP的COOH末端(图5c） ●●●●。NH中多达69个残留物2末端可以被删除（70-162），而与完整的小窝蛋白-2β没有显著差异，而删除第70个色氨酸残基（71-162）则取消了LD和高尔基体的定位，并产生了弥散的细胞溶质和核分布。另一方面，COOH终端的删除导致了逐渐的变化(图5d） ●●●●。12个残基可以被截短而无明显影响（1-150和14-150；未显示），但通过删除更多残基（1-144到1-132和14-144到14-132），LD和高尔基体的定位变得模糊，网络模式中的细胞质标记增加。细胞质标记显示与钙网蛋白共定位，钙网蛋白是一种内质网腔蛋白，暗示其来源于内质网；此外，通过用10μM诺科达唑处理细胞2小时，对小窝蛋白-2突变体和钙网织蛋白的标记显示出从细胞边缘类似的回缩(图5d；Kogo等人，1997年). 当COOH末端的35个残基被删除（1-127和14-127）时，LD和高尔基体标记几乎都不可见。

第三，当中心疏水结构域（87-119）从α或β亚型中删除时，在高尔基体中发现突变体，但在LD中未发现突变体(图5e） ●●●●。即使用BFA处理细胞2小时，也几乎没有观察到LD中的标记（未显示）。第四，EGFP被标记为NH2仅末端（1-86）、仅COOH末端（127-162）或仅疏水结构域（87-122）显示细胞溶质分布（未显示）。结果表明，疏水结构域对LD定位很重要，但还不够。

讨论

LD作为膜结构域

本研究表明，caveolin-2，尤其是其β亚型，可以在LD中定位。Caveolin-2不同于迄今为止报道的LD蛋白(Londos等人，1999年;Syu和Saltiel 1999)因为它作为一种完整的膜蛋白存在于质膜中。Caveolin-2和其他Caveolin被认为通过NH的中心疏水域锚定在膜上2COOH末端暴露于细胞质(Parton 1996年). 抗小窝蛋白-2抗体识别NH的结果2-终端段(Das等人，1999年)在冷冻断裂复制品中，仅修饰了LD的P面，表明caveolin-2在LD表面上的取向与膜中的取向相同。这与LD表面是一个半膜或磷脂单层的假设相一致，其中两亲性脂质分子的亲水和疏水部分分别朝向细胞质和LD含量(Zweytick等人，2000年).

对突变的小窝蛋白-2分子的分析支持了上述假设。首先，NH2-膜附着需要末端片段（残基70-86），其缺失消除了LD中的定位。第二，COOH末端片段（残基120-150）似乎是从内质网中退出的必需片段，其截短导致内质网保留增加，LD分布减少。这些结果表明，膜的附着和ER的退出对于LD中的分布是必要的。也就是说，caveolin-2很可能像caveolin-1一样被翻译成ER(Monier等人，1995年)然后以膜蛋白的形式转运到LD。哺乳动物脂肪细胞的两种LD蛋白——紫苏素(Londos等人，1999年)和植物种子的油素(Napier等人，1996年)也在膜结合多核糖体中合成。

值得注意的是，小窝蛋白-2的标记在LD表面上并不均匀，但在冷冻切片和冷冻断裂复制品中都发现了小簇。我们观察到嗜脂蛋白的标记在LD表面显示出相同的模式（Nakamura，N.和T.Fujimoto，未发表的观察结果）。这些结果表明，整个LD表面可能不是均质的，并且在半膜中可能发生一些分离。

有趣的是，最近的一项研究显示LD中存在非酯化胆固醇(Prattes等人，2000年). 此外，嗜酸性粒细胞的LD含有与细胞内信号传导相关的raft蛋白，如丝裂原活化蛋白激酶和Lyn(Yu等人，1998年,Yu等人，2000年). 我们的研究扩展了这一发现，另一个筏状分子，小窝蛋白-2，可能还有其他小窝蛋白，可以分布在LD表面。总的来说，这些结果表明LD可能是一个新的膜结构域，其中小窝蛋白可能具有调节信号蛋白的功能。

Caveolins和LD的贩运

诱变研究推断，caveolin-2的疏水结构域（残基87-119）对于靶向LD很重要。即使该结构域被删除，该蛋白也会与膜结合并从内质网中退出，但在LD中没有发现。有趣的是，与LD相关的油素和丙型肝炎病毒核心蛋白有一个疏水结构域，两侧是亲水/两性结构域，其缺失消除了LD定位(van Rooijen和Moloney 1995年;希望和麦克劳克伦2000). 因为这两种蛋白质和小窝蛋白-2之间不存在序列相似性，所以可能是一段疏水性氨基酸决定了LD的定位。

小窝蛋白-1在BFA处理的细胞中的募集也可能是由于所有小窝蛋白共享的疏水域。然而，小窝蛋白-1与LD的亲和力似乎不如小窝蛋白-2。首先，在仅表达小窝蛋白-1的细胞中，在BFA处理后，其重新分布到LD的过程缓慢且仅在偶尔的细胞中发生。其次，如果没有BFA治疗，即使在LD过度表达时也没有发现caveolin-1。小窝蛋白-1的LD定位信号可能不如小窝蛋白-2的有效。

在正常培养条件下，LD中未检测到内源性小窝蛋白-2。这可能是因为主要在大多数细胞中表达的小窝蛋白-2α在LD靶向方面不如小窝蛋白2β有效。但BFA处理细胞LD中小窝蛋白-2的积累表明了另一种可能性；也就是说，小窝蛋白-2，尤其是小窝蛋白2α，可能会暂时停留在LD中，因此只有当蛋白表达丰富或其运输受到干扰时才能检测到其在LD的分布。ER和LD的形态学连续性(Blanchette-Mackie等人，1995年)BFA处理细胞中LD标记的持续性表明，小窝蛋白-2直接从内质网进入LD。但LD是否独立于ER–高尔基体途径存在，或者LD是ER和高尔基体之间的中间隔室，尚不清楚。BFA实验的结果可能只是表明ER中过量的caveolin-2溢出到LD。但BFA也可能阻断其他途径（例如从LD到高尔基体）并导致LD滞留。这两种途径并不相互排斥，需要进一步研究才能确定。

向LD贩运小窝蛋白很重要，因为它可能与脂质有关。在这种情况下，一个可测试的问题是，LD的脂质组成是否会因小窝蛋白的存在和/或BFA治疗而改变，我们实验室目前正在研究这一问题。同样重要的是，询问LD是否以及如何与小窝蛋白-1的报告贩运路线相关(Conrad等人，1995年;Uittenbogaard等人，1998年).

结束语

基于我们的结果，我们为LD提出了两个新角色。一种是可能与信号传递相关的膜结构域，另一种是脂质转运的转运点。LD被认为是少数专门细胞中的脂质库，但实际上它们发生在许多细胞中。我们的结果将是进一步研究的起点，该研究将阐明这一著名但神秘的圆形细胞器。

致谢

我们感谢大村忠雄先生和高桥由纪子女士的技术援助。

这项工作得到了日本政府科学研究补助金和上原纪念基金会的研究补助金的支持。

脚注

野村博士目前的地址是日本广岛734-8551广岛大学医学院解剖系。

本文中使用的缩写：BFA，布雷费尔丁A；增强型绿色荧光蛋白EGFP；LD，脂滴；NRK，正常大鼠肾脏；OA，油酸。

工具书类

  • Anderson R.G.W.小窝膜系统。每年。生物化学评论。1998;67:199–225.[公共医学][谷歌学者]
  • Blanchette-Mackie E.J.、Dwyer N.K.、Barber T.、Coxey R.A.、Takeda T.、Rondinone C.M.、Theodorakis J.L.、Greenberg A.S.、Londos C.Perilipin位于脂肪细胞内脂滴的表层。《脂质研究杂志》。1995;36:1211–1226.[公共医学][谷歌学者]
  • Brasaemle D.L.、Barber T.、Kimmel A.R.、Londos C.通过储存细胞内中性脂质稳定紫苏苷表达的翻译后调节。生物学杂志。化学。1997;272:9378–9387.[公共医学][谷歌学者]
  • Conrad P.A.、Smart E.J.、Ying Y.S.、Anderson R.G.W.、Bloom G.S.Caveolin通过微管依赖和微管依赖步骤在质膜小泡和高尔基复合体之间循环。《细胞生物学杂志》。1995;131:1421–1433. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Das K.，Lewis R.Y.，Scherer P.E.，Lisanti M.P.小窝蛋白-1和-2的跨膜结构域介导小窝蛋白异寡聚体的形成。小窝膜在体内组装的意义。生物学杂志。化学。1999;274:18721–18728.[公共医学][谷歌学者]
  • Fujimoto K.Freeze-fracture replicate electronic microscopy结合SDS消化用于细胞化学标记完整膜蛋白——应用于细胞间连接复合体的免疫金标记。细胞科学杂志。1995;108:3443–3450.[公共医学][谷歌学者]
  • 从形态学角度来看，藤本T.、Hagiwara H.、青木T.、Kogo H.、野村R.Caveolaefrom。《电子显微镜杂志》。1998;47:451–460.[公共医学][谷歌学者]
  • Fujimoto T.，Kogo H.，Nomura R.，Une T.小窝蛋白-1和小窝结构的异构体。细胞科学杂志。2000;113:3509–3517.[公共医学][谷歌学者]
  • Hope R.G.、McLauchlan J.脂质滴结合和蛋白质稳定性所需的序列基序是丙型肝炎病毒核心蛋白所特有的。《病毒遗传学杂志》。2000;81:1913–1925.[公共医学][谷歌学者]
  • Ioshii S.O.、Yoshida T.、Imanaka-Yoshida-K.、Izutsu K.Ca的分布2+PtK2细胞在间期和有丝分裂期间的储存位点。使用抗钙网蛋白抗体的免疫细胞化学研究。《欧洲细胞生物学杂志》。1995;66:82–93.[公共医学][谷歌学者]
  • Kogo H.、Shioya M.、Takahashi Y.、Fujimoto T.Caveolae和内质网荧光显微镜和时间推移分析。《组织化学学报》。细胞化学。1997;30:593–599. [谷歌学者]
  • Londos C.、Brasaemle D.L.、Schultz C.J.、Segrest J.P.、Kimmel A.R.Perilipins、ADRP和其他与动物细胞内中性脂滴相关的蛋白质。塞明。细胞发育生物学。1999;10:51–58.[公共医学][谷歌学者]
  • Louvard D.、Reggio H.、Warren G.高尔基复合体和粗面内质网抗体。《细胞生物学杂志》。1982;92:92–107. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Monier S.、Parton R.G.、Vogel F.、Behlke J.、Henske A.、Kurzchalia T.V.VIP21-caveolin（小窝外套的膜蛋白成分）在体内和体外寡聚。分子生物学。单元格。1995;6:911–927. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Mora R.、Bonilha V.L.、Marmorstein A.、Scherer P.E.、Brown D.、Lisanti M.P.、Rodriguez-Boulan E.Caveolin-2定位于高尔基复合体，但与Caveolin-1共表达时重新分布到质膜、小窝和筏。生物学杂志。化学。1999;274:25708–25717.[公共医学][谷歌学者]
  • Nakamura N.、Rabouille C.、Watson R.、Nilsson T.、Hui N.、Slusarewicz P.、Kreis T.E.、Warren G.顺高尔基基质蛋白的表征，GM130。《细胞生物学杂志》。1995;131:1715–1726. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Napier J.A.、Stobart A.K.、Shewry P.R.《植物油体的结构和生物发生——ER膜和油素类蛋白质的作用》。植物分子生物学。1996;31:945–956.[公共医学][谷歌学者]
  • Okamoto T.、Schlegel A.、Scherer P.E.、Lisanti M.P.Caveolins，一种用于在质膜上组织“预装配信号复合物”的支架蛋白家族。生物学杂志。化学。1998;273:5419–5422.[公共医学][谷歌学者]
  • Parton R.G.Caveolae和caveolins。货币。操作。细胞生物学。1996;8:542–548.[公共医学][谷歌学者]
  • Prattes S.、Horl G.、Hammer A.、Blaschitz A.、Graier W.F.、Sattler W.、Zechner R.、Steyrer E.脂肪中未酯化胆固醇的细胞内分布和动员甘油三酯滴被富含胆固醇的类ER表层结构包围。细胞科学杂志。2000;113:2977–2989.[公共医学][谷歌学者]
  • Scheiffele P.、Verkade P.、Fra A.M.、Virta H.、Simons K.、Ikonen E.Caveolin-1和-2在MDCK细胞外排途径中的作用。《细胞生物学杂志》。1998;140:795–806. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Scherer P.E.、Lewis R.Y.、Volonte D.、Engelman J.A.、Galbiati F.、Couet J.、Kohtz D.S.、van Donselaar E.、Peters P.、Lisanti M.P.小窝蛋白-2的细胞类型和组织特异性表达。Caveolins 1和2在体内共同定位并形成稳定的异低聚体复合物。生物学杂志。化学。1997;272:29337–29346.[公共医学][谷歌学者]
  • Syu L.J.，Saltiel A.R.Lipotransina激素敏感脂肪酶的新型对接蛋白。分子细胞。1999;4:109–115.[公共医学][谷歌学者]
  • Tokuyasu K.T.冷冻超微切片在免疫细胞化学中的应用。《微生物学杂志》。1986;143:139–149.[公共医学][谷歌学者]
  • Uitenbogaard A.，Ying Y.，Smart E.J.胞质热休克蛋白小窝蛋白伴侣复合物的表征。参与胆固醇贩运。生物学杂志。化学。1998;273:6525–6532.[公共医学][谷歌学者]
  • van Rooijen G.J.，Moloney M.M.油素结构域对油体亚细胞靶向的结构要求。植物生理学。1995;109:1353–1361. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Yu W.、Bozza P.T.、Tzizik D.M.、Gray J.P.、Cassara J.、Dvorak A.M.、Weller P.F.在富含花生四烯酸的胞质脂质体中MAP激酶和胞浆磷脂酶A2的共室化。美国病理学杂志。1998;152:759–769. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Yu W.，Cassara J.，Weller P.F.磷脂酰肌醇3-激酶定位于人类多形核白细胞和其他髓源性细胞中的细胞质脂质体。鲜血。2000;95:1078–1085.[公共医学][谷歌学者]
  • Zweytick D.、Athenstaedt K.、Daum G.真核细胞的细胞内脂质颗粒。生物化学。生物物理学。《学报》。2000;1469:101–120.[公共医学][谷歌学者]
文章来自细胞生物学杂志由以下人员提供洛克菲勒大学出版社