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英国药理学杂志。1999年1月；126(1): 219–226.
数字对象标识：2010年10月38日/星期二
预防性维修识别码：项目经理1565804
PMID：10051139

乙酰胆碱诱导内皮一氧化氮合酶敲除小鼠血管舒张

蒂埃里·查泰涅奥,1,4 米歇尔·弗雷托,1,* 保罗·L·黄,2 马克·菲什曼,2 雅克·杜哈尔特,1和保罗·范霍特三
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

  1. 在取自内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠（eNOS（−/−）小鼠）和相应野生型小鼠（eNO S（+/+）小鼠）的主动脉、颈动脉、冠状动脉和肠系膜动脉的隔离环中记录等长张力。用细胞内微电极测量冠状动脉平滑肌细胞的膜电位。
  2. 在eNOS（+/+）小鼠分离的主动脉、颈动脉和冠状动脉中，乙酰胆碱诱导内皮依赖性舒张，而Nω-L（左）-硝基精氨酸。相反，在肠系膜动脉中，胆碱能舒张的抑制需要Nω-L（左）-硝基精氨酸和吲哚美辛。
  3. eNOS（−/−）小鼠分离的主动脉、颈动脉和冠状动脉对乙酰胆碱没有反应。然而，乙酰胆碱在eNOS（−/−）小鼠肠系膜动脉中产生了对吲哚美辛敏感的舒张作用。
  4. 在eNOS（−/−）小鼠（−64.8±1.8 mV，n个=20和−58.4±1.9毫伏，n个=17，分别适用于eNOS（+/+）和eNOS小鼠）。在这两种菌株中，乙酰胆碱、缓激肽和P物质均未诱导内皮依赖性超极化，而克罗马卡林持续产生超极化（−7.9±1.1 mV，n个=8和−13.8±2.6毫伏，n个=4，分别适用于eNOS（+/+）和eNOS小鼠）。
  5. 这些发现表明，在所研究的血管中：（1）在eNOS（+/+）小鼠中，内皮依赖性乙酰胆碱舒张作用涉及NO或NO与环氧化酶产物的结合，但不涉及EDHF；（2） 在eNOS（−/−）小鼠中，未观察到NO-依赖性反应和EDHF-样反应。在肠系膜动脉中，乙酰胆碱释放出一种环氧化酶衍生物。

关键词：环氧化酶产物、EDHF、内皮、eNOS敲除小鼠、一氧化氮、平滑肌

介绍

内皮细胞产生血管活性物质，如一氧化氮（NO；Furchgott&Zawadzki，1980年;帕尔默等., 1987)，前列环素(Moncada&Vane，1979年)以及一种尚未确定的分子，内皮衍生超极化因子（EDHF；陈等1988年;Félétou和Vanhoutte，1988年;泰勒和韦斯顿出版社，1988年)有助于血管张力的局部调节。这些因素对内皮依赖性血管舒张的相对重要性取决于所研究血管的大小和血管床。在阻力动脉中，EDHF对内皮依赖性血管舒张的作用可能是主要的(长尾等., 1992;鲍尔扎克斯等., 1996;Garland&Plane，1996年;岛川等., 1996).

慢性抑制一氧化氮合酶（NOS）增加了所有研究物种的血管阻力。这与大鼠和猪的血压升高有关，但兔子和狗没有这种变化(奥利维拉等., 1992;卡亚特等., 1994;伊藤等., 1995;皮巴塞等., 1995). 然而，由于NO产生的抑制剂不是选择性的，并且在使用这些药物的慢性治疗过程中，NOS的三种亚型被抑制，因此观察到的心血管变化不一定与内皮亚型的抑制有关。相反，小鼠eNOS编码基因的破坏会产生内皮NO生成的特异性抑制和系统血压的升高(黄等., 1995).

当NO的内皮生成受损时，EDHF可能起到后备机制的作用(Kilpatrick&Cocks，1994年;科里于等., 1998). 相反，NO可以调节EDHF的产生和作用(奥尔莫斯等., 1995;蒙博利等.，1996年a;波普等., 1996;克里斯托夫等., 1997). 本研究的目的是通过研究突变型eNOS（−/−）小鼠和相应的对照野生型eNOS（+/+）小鼠离体动脉中的内皮依赖性舒张和超极化来解决这两种可能性。

方法

本研究使用了8–10周龄的C57BL6小鼠（野生型；eNOS（+/+）小鼠）和缺乏内皮型NOS基因的纯合子突变小鼠（eNOS，−/−，Iffa Credo，L'Arbresle，France）。eNOS缺陷小鼠的产生在别处已有描述(黄等., 1995). 小鼠在21±1°C的空调房间中，在无病原体条件下被饲养在带过滤罩的笼子中，喂食标准的实验室饮食并饮水随意。

收缩

一氧化碳杀死eNOS（+/+）和eNOS小鼠2吸入。主动脉和颈动脉、左前冠状动脉和肠系膜（一级）动脉被切除并解剖，无粘连结缔组织。主动脉环（4 mm长）悬挂在器官室中，其他血管段（颈动脉和肠系膜动脉长度为2 mm，冠状动脉长度为1.5–3 mm，取决于分支模式）安装在微血管肌电图仪上，用于等长张力记录(Mulvany&Halpern，1977年). 将血管浸泡在Krebs’Ringer碳酸氢盐溶液中（37°C，充入95%氧气2/5%一氧化碳2以下成分（单位：m）的pH值为7.4的气体混合物M（M）)：氯化钠118.3；KCl 4.7；氯化钙22.5; 硫酸镁41.2; 千赫2人事军官41.2; 碳酸氢钠三25; EDTA 0.026钙二钠和葡萄糖11.1（对照溶液）。分段逐步拉伸，并使用KCl（60 m）反复收缩M（M）)直到获得最大和可重复的收缩(费雷托和蒂塞雷1990). 对主动脉施加约1000 mg的被动张力，对其他动脉施加100–200 mg的被动压力。在这些条件下，颈动脉、肠系膜动脉和冠状动脉的外加直径分别为250、120和70μm。在45分钟的平衡期后，研究了内皮依赖性对乙酰胆碱的舒张作用。主动脉环用去甲肾上腺素收缩（1-10μM），颈动脉用U 46619收缩（10-30μM）M（M）)，以达到张力水平，代表KCl（60 m）基准收缩的50–80%M（M）). 累积浓度响应曲线（1 nM（M）或10 nM（M）至100μM（M）)在这两条动脉中进行。在放松稳定后或每隔5分钟应用连续浓度的乙酰胆碱。用去甲肾上腺素收缩小鼠肠系膜和冠状动脉（3μM（M）)和U 46619（100 nM（M）)分别为。在初步实验中，初步测定了肠系膜动脉和冠状动脉的完全乙酰胆碱释放曲线。在所研究的所有小鼠动脉中，很难获得持续的张力水平。主动脉和颈动脉容易区分乙酰胆碱引起的舒张和自发的张力降低，相比之下，肠系膜和冠状动脉乙酰胆碱诱导的舒张最大幅度仅为预收缩水平的30-50%。通过使用单一、超最大浓度的乙酰胆碱（10μM（M）)，更容易评估N的影响ω-硝基-L（左）-精氨酸(L（左）-NA）或/和吲哚美辛。事实上，这种单一浓度的乙酰胆碱的作用产生了快速而剧烈的放松，这不能被误认为是音调的自发下降。研究了各种抑制剂的培养时间(L（左）-NA和/或吲哚美辛）至少30分钟。实验结束时，硝普钠（1 mM（M）). 在一些动脉环中，通过机械方式去除内皮细胞（主动脉：使用珠宝钳；其他动脉：通过将人的头发插入管腔），以验证乙酰胆碱（10μM（M）).

电生理学

将左前降支冠状动脉（管腔直径：70–90μm）的节段固定在器官室底部（体积为0.5 ml），并以恒定流量（2.5 ml min）过度灌注−1)使用改良的Krebs’Ringer碳酸氢盐溶液。注意保持内皮的完整性。在初步实验中，在电生理研究结束时，在Bouin溶液中固定并用血红素和曙红或Masson三色染色的制剂中对内皮衬里的保存进行了组织学验证（数据未显示）。从血管外膜侧进行平滑肌细胞移植。用填充KCl（3）的玻璃毛细管微电极（尖端电阻为30–90 MΩ）记录跨膜电位M（M）)连接到配备电容中和功能的记录放大器（Intra 767，World Precision Instruments Ltd，New Haven，CT，U.S.a.）的前端；与镀液接触并直接连接到放大器的Ag/AgCl颗粒用作参考电极。电生理信号在示波器（3091 Nicolet，Madison，WI.，U.S.A.）上连续监测，同时记录在纸上（Gould，Valley View，OH，U.S.A.）和录像机上（TEAC XR310，Tokyo，Japan）。电位从基线（零电位参考值）突然负下降，然后稳定负电位至少3分钟，这是成功的干扰信号。

药物

使用的药物有：盐酸去甲肾上腺素、氯化乙酰胆碱、缓激肽、消炎痛、Nω-硝基-L（左）-精氨酸(L（左）-NA），硝普钠（Sigma，La Verpillere，法国）；P物质（巴瑟姆，Voisins-Le-Bretonneux，法国）；U 46619（9,11-二脱氧-9α，11α-甲氧基环氧前列腺素F2α（美国密歇根州安阿伯市开曼化学公司）。克罗马卡利姆和SIN-1是在施维雅研究中心（法国苏雷斯）的化学部门合成的。将吲哚美辛溶解在等摩尔浓度Na的去离子水中2一氧化碳三将克罗马卡利姆溶解在等量的去离子水和丙二醇中。SIN-1是在甲醇中制备的。U 46619在乙醇中溶解。浴中丙二醇、甲醇和乙醇的最终浓度分别为6.8、25和0.2 mM（M）其他药物溶于蒸馏水中。

统计

数据显示为平均值±标准平均值。n个表示取动脉的动物数量。使用Student’s吨-测试成对或不成对的观察结果。当P（P）小于0.05。

结果

收缩

KCl（60 m）引起的收缩M（M）)eNOS（+/+）和eNOS小鼠（−/−）的动脉（收缩，eNOS和eNOS小鼠的动脉分别为：主动脉：910±110 mg，n个=13和890±210毫克，n个=11; 颈动脉：52±13 mg，n个=5和77±18毫克，n个=6; 冠状动脉：20±3 mg，n个=17和21±3毫克，n个=17; 肠系膜动脉：54±5 mg，n个=18和54±5毫克，n个=20).

在对照溶液中或在L（左）-NA（100μM（M）)，消炎痛（5μM（M）)或两种抑制剂的组合。主动脉环被去甲肾上腺素收缩（1–10μM（M）)颈动脉和U 46619（10–30 nM（M）)，以达到张力水平，代表KCl（60 m）基准收缩的50–80%M（M）). 乙酰胆碱（10 nM（M）至100μM（M）)在eNOS（+/+）小鼠的主动脉和颈动脉中诱导内皮依赖性舒张，但在eNOS（−/−）小鼠中没有。在eNOS（+/+）中，这些放松不受吲哚美辛的影响，但被阻断L（左）-NA或两种抑制剂的组合(图1和​和2）。2). 在eNOS（−/−）中，张力的降低与在时间匹配的对照组中观察到的张力没有显著差异（数据未显示）。

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具有eNOS内皮的主动脉中乙酰胆碱的浓度弛豫曲线（+/+）（上图；n个=13）和eNOS（−/−）小鼠（下面板；n个=11）在不存在和存在吲哚美辛（5μM（M）)和/或Nω-硝基-L（左）-精氨酸(L（左）-不适用，100μM（M）). 数据显示为平均值±标准平均值。

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eNOS（+/+）中内皮对颈动脉乙酰胆碱的浓度-舒张曲线（上图；n个=5–6）和eNOS（−/−）小鼠（下面板；n个=4–5）在不存在和存在吲哚美辛（5μM（M）)和/或Nω-硝基-L（左）-精氨酸(L（左）-不适用，100μM（M）). 数据显示为平均值±标准平均值。

去甲肾上腺素收缩肠系膜动脉（3μM（M）). eNOS（−/−）小鼠肠系膜动脉的收缩反应明显更大（48±4 mg，n个=33和67±7毫克，n个=31，分别在eNOS（+/+）和e NOS（−/−）小鼠中，P（P）<0.05). 添加L（左）-NA（100μM（M）)eNOS（+/+）诱导肠系膜动脉张力进一步增加，但eNOS小鼠（+14±7 mg，n个=7和-8±6毫克，n个分别在eNOS（+/+）和eNOS小鼠中为8）。消炎痛（5μM（M）)降低eNOS（+/+）小鼠对去甲肾上腺素的收缩反应，但不影响eNOS小鼠的张力水平。以下各项的组合L（左）-NA和吲哚美辛引起eNOS（+/+）小鼠动脉张力增加，但eNOS（−/-）小鼠动脉张力增加（+13±4 mg，n个=10和−3±11毫克，n个分别在eNOS（+/+）和eNOS小鼠中为7）。乙酰胆碱（10μM（M）)两种张力引起肠系膜动脉松弛。在野生型菌株中，消炎痛或L（左）-NA，但被两种抑制剂联合使用而废除。在eNOS（−/−）小鼠肠系膜动脉中，乙酰胆碱诱导的舒张不受L（左）-NA，但被吲哚美辛或这两种抑制剂的组合显著抑制(图3).

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乙酰胆碱（10μM（M）)-eNOS（+/+）内皮诱导肠系膜动脉舒张（上面板；n个=8–10）和eNOS（−/−）小鼠（下面板；n个=8-9），在不存在和存在吲哚美辛（5μM（M）)和/或Nω-硝基-L（左）-精氨酸(L（左）-不适用，100μM（M）). 数据显示为平均值±s.e.mean。星号表示与相应的控制值存在统计显著差异。

冠状动脉用U 46619收缩（100 nM（M）). eNOS（−/−）小鼠冠状动脉的收缩反应明显更大（27±3 mg，n个=25和45±7毫克，n个=28，分别在eNOS（+/+）和e NOS（−/−）小鼠中）。添加L（左）-NA（100μM（M）)诱导eNOS（+/+）小鼠冠状动脉张力进一步增加，但eNOS小鼠（-17±4 mg，n个=5和+2±1毫克，n个分别在eNOS（+/+）和eNOS小鼠中为6）。消炎痛（5μM（M）)两种菌株对U 46619的收缩反应均无显著影响。以下各项的组合L（左）-NA和吲哚美辛在eNOS（+/+）小鼠中引起张力增加，但在eNOS（−/−）小鼠中没有引起张力增加（+8±1 mg，n个=7和−6±2毫克，n个分别在eNOS（+/+）和eNOS小鼠中为6）。乙酰胆碱（10μM（M）)诱导eNOS（+/+）小鼠冠状动脉舒张。这种松弛不受消炎痛的影响，但被抑制L（左）-NA或两种抑制剂的组合。在eNOS（−/−）小鼠的冠状动脉中，无论是在对照组还是在抑制剂存在的情况下，乙酰胆碱都没有产生任何显著的舒张作用(图4).

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乙酰胆碱（10μM（M）)-eNOS（+/+）内皮诱导冠状动脉舒张（上面板；n个=6–8）和eNOS（−/−）小鼠（下面板；n个=6–8），是否存在消炎痛（5μM（M）)和/或Nω-硝基-L（左）-精氨酸(L（左）-不适用，100μM（M）). 数据显示为平均值±标准平均值。星号表示与相应的控制值存在统计显著差异。

硝普钠（1 mM（M）)从两种应变研究的所有动脉中诱导完全松弛（数据未显示）。

电生理学

在对照条件下，eNOS（+/+）小鼠冠状动脉平滑肌细胞的静息膜电位未因L（左）-NA和/或吲哚美辛(表1). 在eNOS（−/−）小鼠中，在对照条件下，冠状动脉平滑肌细胞的静息膜电位显著降低。该值并未因L（左）-NA和/或吲哚美辛(表1).

表1

eNOS（+/+）和eNOS小鼠冠状动脉平滑肌细胞静息膜电位（mV）

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在eNOS（+/+）小鼠冠状动脉平滑肌细胞中，乙酰胆碱（1μM（M）)在缺乏或存在L（左）-NA和/或吲哚美辛。在较高浓度（10μM（M）)在对照溶液中，乙酰胆碱在约50%的细胞（研究的9条血管中有5次去极化）中诱导平滑肌细胞去极化L（左）-不适用(表2)在某些情况下伴随着有节奏的活动(图5). 仅在一条动脉中观察到消炎痛或L（左）-NA加消炎痛（研究了七条血管的一次去极化；表2). 物质P（100 nM（M）)和缓激肽（100 nM（M）)不影响静息膜电位。在12个平滑肌细胞中的两个中，SIN-1（10μM（M）)诱导显著超极化（−5和−9 mV），但其他细胞无明显变化（数据未显示）。相反，cromakalim（10μM（M）)在各种实验条件下诱导了显著的超极化(图5,表2).

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显示乙酰胆碱（ACh，10μM（M）)和色马卡林（10μM（M）)利用从eNOS（+/+）（上面板）或eNOS小鼠（下面板）获取的内皮细胞，对离体冠状动脉平滑肌细胞的静息膜电位进行研究。

表2

乙酰胆碱SIN-1和克罗马卡林诱导eNOS（+/+）和eNOS小鼠冠状动脉平滑肌细胞膜电位的变化

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在eNOS（−/−）小鼠冠状动脉平滑肌细胞中，乙酰胆碱（1μM（M）)缓激肽（100nM（M）)，P物质（100 nM（M）)，SIN-1（10μM（M）)和cromakalim（10μM（M）)在定性和定量上与eNOS（+/+）小鼠的观察结果相似(图5,表2). 乙酰胆碱（10μM（M）)在控制条件下或在有L（左）-不适用(表2)，在某些情况下伴随着有节奏的活动。消炎痛显著抑制去极化。

讨论

eNOS基因的破坏并没有改变平滑肌细胞的固有收缩特性，因为eNOS（−/−）小鼠分离的主动脉、颈动脉、肠系膜和冠状动脉环对KCl（60 m）产生了类似程度的张力M（M）)相当于来自eNOS（+/+）小鼠的相应动脉环。eNOS（−/−）小鼠冠状动脉平滑肌细胞静息膜电位的绝对值低于eNOS小鼠。eNOS（−/−）小鼠平滑肌细胞中观察到的适度去极化不太可能归因于内皮NO的消失就其本身而言的确，在eNOS（−/−）和eNOSL（左）-NA或吲哚美辛或其组合不影响静息膜电位。此外，在其他物种中，内皮剥脱并不影响血管平滑肌膜电位，这表明NO或/和环氧化酶产物的基础生成对血管平滑肌细胞的膜电位没有任何调节作用(帕金顿等., 1993;1995;齐格蒙特等., 1994;科里于等., 1996). eNOS（−/−）小鼠有全身动脉和中度肺动脉高压(黄等., 1995;1996;斯特代尔等., 1997). 动脉平滑肌细胞的去极化与各种高血压实验模型有关，可能与高血压对血管壁施加的物理张力有关(Tomobe公司等., 1991;藤饭等., 1992;莫雷尔等., 1996;Vanheel和Van De Voorde，1996年).

在eNOS（+/+）小鼠的肠系膜和冠状动脉中，添加L（左）-去甲肾上腺素或血栓烷A类似物U 46619产生的收缩反应稳定后不适用2导致张力进一步增加，表明内皮细胞基础释放NO，并可能通过激活内皮细胞α2-肾上腺素受体释放NO(Cocks&Angus 1983年;梭林等., 1998). 在eNOS（−/−）小鼠的相应动脉中L（左）-NA没有产生收缩，表明这些血管中没有内皮NO生成。然而，与eNOS（+/+）小鼠相比，eNOS小鼠肠系膜和冠状动脉对去甲肾上腺素和U 46619的收缩反应明显更大。观察到的差异在L（左）-NA治疗显示内皮细胞NO释放在调节激动剂诱导的血管平滑肌收缩中的作用。

eNOS（+/+）小鼠主动脉、颈动脉和左前降支冠状动脉中乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张被急性抑制NOS所消除，表明在这些血管中，NO是唯一的内源性内皮衍生血管扩张剂(库伊等., 1996). 与之前的研究一致，eNOS（−/−）小鼠中这些舒张作用的消失加强了这一结论(黄等., 1995;法拉奇等., 1998). 在离体灌流小鼠心脏中，乙酰胆碱产生的血管舒张作用在eNOS（+/+）小鼠中涉及NO和环氧化酶衍生物，而在eNOS（−/-）小鼠中仅涉及后者(戈德克等., 1998)这可能表明，在本研究中研究的冠状动脉远端环氧化酶组分比左前降支更为显著。乙酰胆碱、缓激肽和P物质不会使小鼠冠状动脉平滑肌细胞超极化，再加上缺乏对NOS和环氧化酶抑制剂耐药的舒张反应，表明EDHF对所研究的各种小鼠血管中的内皮依赖性舒张作用没有贡献。NO可以抑制或调节EDHF的表达(奥尔莫斯等., 1995;蒙博利等.，1996年a;波普等., 1996;克里斯托夫等., 1997)在各种物种中，它被描述为内皮NO通路功能障碍的备用机制(Kilpatrick&Cocks，1994年;科里于等., 1998). 然而，在存在NOS抑制剂和eNOS（−/−）小鼠的eNOS小鼠中进行的研究并没有揭示EDHF样反应。迄今为止，小鼠似乎是迄今为止研究的唯一一种在孤立冠状动脉中似乎缺乏内皮依赖性超极化机制的哺乳动物（供审查：费雷托和瓦努特，1996年). 在eNOS（−/−）小鼠的隔离灌流心脏中描述了对反应性充血的补偿机制，但这些机制的起源目前尚不清楚(戈德克等., 1998).

虽然在小鼠冠状动脉平滑肌细胞中未观察到内皮依赖性超极化，但在所有测试的实验条件下，克罗马卡林均能诱导两种小鼠菌株的冠状动脉超极化。然而，cromakalim激活ATP敏感性钾通道，而其他物种大多数血管中的EDHF激活不同但尚未确定的钾电导(科里于等., 1996). 因此，这一观察结果无法确定EDHF介导反应的缺失是由于内皮细胞缺乏EDHF合成/释放，还是由于缺乏EDHF-的靶点，如血管平滑肌细胞上的特定钾通道群。

SIN-1释放的外源性NO在去极化的平滑肌细胞中产生超极化。在其他物种中，也曾描述过通过内源性释放NO或在没有任何超极化效应的情况下添加硝基血管扩张剂而使平滑肌细胞重新极化(皮重等., 1990;Vanheel公司等., 1994). 硝普钠是另一种硝基血管扩张剂，在两种小鼠菌株的所有研究血管中均持续诱导最大程度的舒张。这与之前的研究一致，这些研究表明，外源NO的舒张作用（可归因于可溶性鸟苷酸环化酶的激活）在eNOS（−/−）小鼠中没有改变（甚至增强）(黄等1995年;法拉奇等., 1998).

eNOS（+/+）小鼠肠系膜动脉中乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张被NOS抑制剂部分阻断，如之前在小鼠灌流肠系膜床中所示(贝尔蒂奥姆等., 1997). 然而，与主动脉和颈动脉相比L（左）-NA加吲哚美辛是完全抑制乙酰胆碱诱导的舒张反应所必需的。只有在NOS被抑制后，环氧化酶组分才被发现，并且这两种内皮介质的作用不是相加的。以前曾报道过关于NO和前列环素相对参与大鼠和豚鼠动脉内皮依赖性舒张和超极化的类似观察结果(科里于等., 1996;齐格蒙特和霍格斯特，1996年). 在eNOS（−/−）小鼠肠系膜动脉中，乙酰胆碱诱导的舒张反应对L（左）-NA被吲哚美辛消除，表明一氧化氮不参与这种舒张，eNOS（+/+）小鼠肠系膜动脉中存在的环氧化酶产物仍可在eNOS小鼠中产生。用一氧化氮合酶抑制剂长期治疗的狗（COX-1）和大鼠（COX-2）的内皮环氧化酶上调(皮巴塞等., 1996;贝弗里利等., 1997;亨利翁等., 1997). 本研究的目的不是确定eNOS（−/−）小鼠中的环氧化酶是否上调。然而，静脉注射吲哚美辛不会改变eNOS（+/+）或eNOS（−/-）小鼠的全身血液动力学参数(斯特代尔等., 1997). 在eNOS（+/+）和eNOS小鼠分离的肠系膜动脉中，梭林等. (1998)最近的研究表明，α2-肾上腺素能激动剂可以诱导对环氧化酶抑制有抵抗力的一氧化氮敏感性、内皮依赖性舒张。这些实验表明，小鼠肠系膜内皮细胞可以产生内皮衍生超极化因子，其释放和/或生成被NO减少。这种松弛是否是由于下面血管平滑肌细胞的超极化，尚待确定。这种反应对α2-肾上腺素能刺激的特异性以及NOS抑制剂显著增强的内皮依赖性舒张的异常发生有待进一步研究。

在乙酰胆碱诱导的eNOS（−/−）小鼠脑小动脉扩张过程中，神经元NO可补偿内皮NO的缺失(孟等., 1996,1998)并导致局部脑血流量增加，以应对高碳酸血症(妈妈等., 1996). 目前的研究实验没有发现L（左）-eNOS（−/−）小鼠各种外周动脉中的NA敏感成分。因此，神经元NOS的代偿作用可能仅限于脑循环。

在eNOS（−/−）和eNOS小鼠的冠状动脉平滑肌细胞中观察到乙酰胆碱诱导的去极化。乙酰胆碱的去极化可能是由于乙酰胆碱对平滑肌细胞的直接作用。或者，乙酰胆碱可以释放内皮衍生去极化因子(科里于等., 1996;蒙博利等1996年b)或在几种高血压模型中观察到的环氧化酶缩血管内皮产物(吕舍尔和瓦努特，1986年;赞奇等., 1995). 去极化不受L（左）-NA，但被吲哚美辛抑制，表明后一种可能性。

总之，在所研究的小鼠eNOS（+/+）血管中，内皮依赖性舒张涉及NO或NO与环氧化酶产物的结合，但EDHF不参与。在eNOS（−/−）小鼠中，未观察到NO-依赖性反应和EDHF-样反应，这表明eNOS基因破坏不会上调后一途径。eNOS（−/−）小鼠肠系膜动脉中观察到的唯一备用机制是环氧化酶依赖性反应。

缩写

EDHF公司内皮衍生超极化因子
电子NOS内皮型一氧化氮合酶
eNOS（−/−）小鼠内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠
eNOS（+/+）小鼠野生型小鼠
L（左）-纳N个ω-硝基-L（左）-精氨酸

工具书类

  • BAUERSACHS J.、LISCHKE V.、BUSSE R.、HECKER M。冠状动脉微循环中的内皮依赖性超极化内皮衍生超极化因子1996年阿姆斯特丹，荷兰：哈伍德学术出版社；211-216.ed.Vanhoutte P.M.，第页[谷歌学者]
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文章来自英国药理学杂志由以下人员提供英国药理学学会