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临床微生物学杂志。2002年3月;40(3):826–836。
数字对象标识:10.1128/JCM.40.3.826-836.2002
预防性维修识别码:项目编号120250
PMID:11880401

的Ca3指纹白色念珠菌南非人体免疫缺陷病毒阳性和健康个体的分离物揭示了新的线索

摘要

为了研究与人类免疫缺陷病毒(HIV)感染相关的口咽念珠菌病的菌株特异性问题,从1196名访问三家诊所的HIV阳性南非黑人和249名白色念珠菌用复合DNA指纹探针Ca3对分离物进行DNA指纹分析。共66个白色念珠菌来自健康黑人南非的分离物和来自健康白人南非的46个分离物也作为对照进行了DNA指纹分析。使用DENDRON软件进行聚类分析,并将确定的组与美国分离物的测试集进行比较,其中三个遗传组(I、II和III)之前通过各种遗传指纹方法确定。所有具有特征的南非收集物(三个来自艾滋病毒阳性黑人,两个来自健康黑人,一个来自健康白人)包括第一、二和三组分离物。此外,所有南非藏品包括美国藏品中完全没有的第四组(SA组)。在这两种情况下,在HIV阳性和健康的南非黑人中SA组分离物的比例为53%。健康的南非白人的比例为33%。在对有和无口咽感染症状的HIV阳性患者进行比较时,获得了相同比例的第一组、第二组、第三组和SA菌株,表明感染没有转移到特定组。然而,由于SA组在共生和感染方面的优势,必须被视为南非最成功的SA组。为什么SA群分离株分别占南非黑人和白人定居菌株的53%和33%,而在美国的采集中却没有,这是一个有趣的流行病学问题。

感染人类免疫缺陷病毒(HIV)的患者在疾病进展过程中容易感染口咽酵母菌(,5,7,8,11,19). 这些感染很可能与免疫系统受损有关(6,16,30),但确切原因尚不清楚。在具体研究中,有迹象表明可能存在菌株和物种特异性(4,25,27,29,33,34). 此外,抗真菌药物的耐药性已经得到了很好的证实念珠菌艾滋病毒中经常出现毒株+病人(9,10,22,32). 最近,有证据表明感染HIV的菌株+患者的表型转换频率平均较高,平均耐药率高于健康人的共生菌株(32). 在该研究中,研究表明,在第一次口腔鹅口疮发作之前,分离株表现出这些表型变化,这表明在鹅口疮之前,口咽区域已经发生了变化。因此,综合结果表明,HIV分离物+个体的平均表型不同,并且可能与健康个体中作为共生体携带的基因型不同。

测试基因不同菌株与HIV口咽定植相关的可能性+个人,我们收集了1196份HIV的口腔样本+患者访问了南非的三家诊所,并对249名患者进行了菌株相关性遗传分析白色念珠菌用复合探针Ca3进行DNA指纹分离(23,26,28). 对这三个收集物中的每一个进行聚类分析,并将遗传群与对健康个体的对照菌株进行类似聚类分析所得的遗传群进行比较。此外,将这些聚类分析中确定的组与白色念珠菌最近通过多种指纹方法在美国分离株集合中区分出的分离株(I、II和III组)(14,20). 这一比较揭示了一个新的群体或分支白色念珠菌在南非(SA组),(i)在美国不存在,(ii)占艾滋病毒分离株的53%+健康的南非黑人和33%的南非白人分离株,以及(iii)与第一、第二和第三组的关系不如这三组的密切。然而,结果表明,对HIV没有菌株特异性+口咽部感染。引起口咽感染的I、II、III和SA组分离株的比例与这些组在HIV中的比例相似+没有感染迹象的个体与健康的南非黑人的比例相似。然而,南非SA菌株的优势表明,该群是该地理区域最成功的共生菌和病原体。

材料和方法

隔离物的收集和维护。

HIV分离物+在4年的时间里收集了来自黑人艾滋病病毒的患者+患者在比勒陀利亚地区的三个政府艾滋病毒诊所就诊,即比勒陀尼亚学术医院(P)、卡拉丰医院(K)和加兰库瓦医院(G)。参加这些诊所的患者来自广阔的地理区域。对照菌株来自一家半城市牙科医院Medunsa口腔健康中心(GC)的健康黑人工作人员,以及在Mahonisi(MAH)和Kruger Park(OKP)农村地区工作和生活的个人。还从比勒陀利亚大学口腔和牙科医院(PC)的健康白人工作人员和在同一家医院寻求口腔卫生治疗的白人患者中获得了分离物。健康对照组的纳入标准为无任何口腔粘膜感染的临床症状或体征(红斑性或假膜性念珠菌病),无当前或慢性疾病史,无常规服用处方药或其他药物史。询问健康人的病史和体重减轻情况,并对口腔、头部和颈部进行彻底检查,以排除可能感染和淋巴结肿大的患者。未对健康个体进行HIV检测,但假定为HIV.HIV样本+患者和健康人通过常规拭子获得。选择舌背表面作为代表部位(2). 将拭子置于Sabouraud葡萄糖琼脂上,并在35°C下培养4天。在储存于−70°C的20%甘油中之前,对所有菌株在10%血清中的生殖管形成进行测试。

DNA指纹。

复合DNA指纹探针Ca3(1,12,23,26,28)用于评估白色念珠菌通过前面描述的方法分离(13,15,17,20,26). 简言之,将储存培养物中的分离物接种在酵母提取物-胃蛋白酶-葡萄糖(YPD)平板上,随机选择一个菌落,并在YPD琼脂上培养成条状。每个分离物来自不同的试验或对照个体。DNA是用谢尔和史蒂文斯的方法提取的(24)并用生态意大利。在消化之前,用Sequoia-Turner 45荧光计(Barnstead/Termodyne,Dubuque,Iowa)测定DNA浓度。生态RI消化的DNA在0.8%琼脂糖凝胶中以50 V的电压电泳,来自参考菌株3153A的DNA位于外车道。当溴酚蓝指示染料迁移16cm时,DNA转移到Hybond N+毛细管印迹法测定膜(Amersham,Piscataway,N.J.)。如前所述进行预杂交(26)预煮鲑鱼精子DNA。斑点与随机引物杂交过夜32P标记的Ca3探针,在45°C下清洗,并使用Cronex Lightning-Plus增感屏(Dupont Co.,Wilmington,Del.)在XAR-S胶片上进行自动射线照相(Eastman Kodak Co.,Rochester,N.Y.)。

聚类分析和与美国菌株的比较。

通过最近描述的方法,使用DENDRON软件(Solltech Inc.,Oakdale,Iowa)分析凝胶图像(28). 使用Astra 1220U平板扫描仪(UMAX Technologies Inc.,Fremont,Calif.)扫描自动放射自显影图像。在自动车道和波段检测、链接和波段分析之前,使用DENDRON程序的解扰选项去除畸变。标注栏数据是在标注栏数据文件定稿之前手动编辑的。通过计算相似系数来比较每个分离物获得的模式(S公司AB公司)根据公式S公司AB公司= 2E类/(2E类++b条),其中E类是菌株A和B共享的条带数,是应变A特有的谱带数量,以及b条是菌株B特有的条带数S公司AB公司0.0和1.0分别表示两个或多个菌株之间所有谱带的总无相关性和完全匹配。先前分析的美国分离物(FC)的波段数据(20)通过混合树状图的起源,将DENDRON数据库中存储的菌株与来自南非的菌株进行了比较(28). 一个武断的S公司AB公司选择0.70的阈值来区分菌株之间的组。该值高于平均值S公司AB公司对于本研究中的所有测试集合,因此比平均值更严格S公司AB公司Pujol等人使用的0.65的阈值(20)在美国分离物的原始聚类分析中。

IS PCR1顺序。

来自三组白色念珠菌(I、II和III组)最初由Pujol等人(20)通过PCR(Labline,Melrose Park,Ill)扩增了21个随机选择的南非群(SA)菌株(14). 信息系统1所用引物为5′-GGG AAT CTG ACT GTC TAA TTA A-3′和5′-CTT GGC TGT GGT GCT AGA T-3′。在95°C下进行初始变性后,在95、55和72°C下运行35个周期的1分钟步骤。最终伸长率在72°C下持续5分钟。

碳水化合物同化。

吸收葡萄糖胺(GLN)和N个-按照制造商的规定,使用ID 32C试纸条(法国马西埃托利BioMérieux SA)评估乙酰氨基葡萄糖(NAG)。从四组中随机选择了10株南非分离物。此外,来自先前研究的12株美国分离物(20)接受同化测试。

结果

测试和控制集合。

样本取自1196名HIV+患者在Kalofong、比勒陀利亚和GaRankuwa三家医院的HIV诊所就诊。这些医院的病人是黑人,来自城市、半城市和农村地区。每家医院被酵母定殖的个体比例在61%至65%之间白色念珠菌范围在77%到81%之间(表(表1)。1). 在四个对照菌株的收集中,只有两个(GC和UP)包含收集数据。在GC收集的83个黑人半城市个体中,60%用酵母定植,其中58%用酵母定植白色念珠菌(表(表1)。1). 在UP收集的79名白人城市个体中,54%的个体被酵母定殖,其中67%的个体定植于酵母白色念珠菌(表(表1)。1). 为了使用Ca3探针进行DNA指纹分析,从三种HIV病毒中随机选择了178、33和38个分离株+分别收集P、K和G(表(表1)。1). 对照标本中几乎所有的分离物都进行了DNA指纹分析(表(表11)。

表1。

南非分离株的收集数据

健康状况描述收集位置d日样品数量%酵母阳性样品%阳性样品中含有白色念珠菌测试菌株数量指纹分离菌数量(f)
艾滋病咨询门诊+黑人城市、半城市b条和农村比勒陀利亚学术医院(P)(比勒陀利亚,豪登省)9161814633
卡拉丰医院(K)(比勒陀利亚,豪登)9976378490178
加兰库拉医院(G)(GaRankura,Gauteng)10865775438
健康黑色半城市Medunsa口腔牙科医院(GC)(GaRunkuwa,豪登)8360582921
黑人乡村Kruger公园(OKP,KP),Mahonisi(MAH)(北部省)不适用e(电子)不适用不适用4545
白色都市c(c)比勒陀利亚大学口腔和牙科医院(UP)(比勒陀尼亚,豪登)7954672929
白色都市比勒陀利亚大学口腔和牙科医院(PC)(比勒陀尼亚,豪登)不适用不适用不适用1717
艾滋病咨询门诊+患者的病毒检测呈阳性;根据材料和方法中规定的标准纳入健康患者。
b条Semiurban描述了比勒陀利亚30英里外的定居点。
c(c)UP,比勒陀利亚大学患者每两年参加一次口腔卫生治疗;PC、医务人员。
d日括号中的缩写表示收集组,用于树状图。
e(电子)NA,从其他研究中获得的样本,其中酵母阳性的数量、百分比和比例白色念珠菌无法使用。
(f)随机选择分离物。

用Ca3探针进行DNA指纹分析。

提取每个分离物的总DNA,用生态RI,并在琼脂糖凝胶上运行。凝胶被印在膜上,Southern印迹与标记的Ca3杂交。每个凝胶含有16个泳道,在第一个和/或最后一个泳道中包含参考菌株3153A的DNA,以便于计算机辅助的模式分析(28). 每个Ca3杂交模式(例如图。图1A)1安培)数字化到DENDRON数据库中,进行处理、解压缩,并自动分析频带位置(28). 然后计算每对可能的分析菌株的相似系数。然后生成任何一组分离物的树状图(例如,单个凝胶中的分离物[图。【图1B】)1B年])或根据计算的S公司AB公司s.然后可以为每个隔离物生成基于带位置和强度的模型,并根据树状图中的位置进行放置,以便进行视觉比较(图。(图1C1摄氏度)。

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Ca3指纹分析示例白色念珠菌南非收集的分离物。(A)生态通过琼脂糖凝胶电泳分离每个菌株的RI消化DNA,进行印迹,并与复合物杂交白色念珠菌-特异性DNA探针Ca3。对照菌株3153A在第一条车道上运行,以协助计算机辅助标准化(28). (B) 杂交模式自动归一化为内部3153A对照模式和数据库中的全球Ca3参考模式,并自动识别通道和带,生成所有分析菌株的带位置和强度矩阵。相似系数(S公司AB公司)计算了一个集合中每对菌株的模式之间的关系,并基于S公司AB公司生成了个值。在这种情况下,为面板a中的菌株生成树状图。(C)然后将每个模式转换为带位置和强度的模型,并根据其在树状图中的位置进行放置。以千碱为单位的分子大小标注在A组杂交模式的左侧和C组模式的下方。

通过Ca3指纹、随机扩增多态性DNA和多点酶电泳进行聚类比较,结果表明,这三种方法将来自美国的26个分离株分离为三个簇或组(组I、组II和组III),以及一些未分组的“离群值”(20). 通过不同的DNA指纹技术对同一个样本集进行后续分析,再结合另一个美国样本集,再次将这些样本分为相同的三大类(14). 由于这些菌株的Ca3指纹是通过本研究中使用的相同方法获得的,并存储在DENDRON数据文件中,因此我们能够生成混合树状图(28)基于S公司AB公司本研究中的菌株与Pujol等人研究中分析的美国菌株之间的s计算值(20)。

分析白色念珠菌HIV分离物+比勒陀利亚学术医院的患者揭示了一个南非特有的群体。

91人中白色念珠菌HIV分离物+访问比勒陀利亚学术医院的患者(表(表1),1),我们指纹33。平均值S公司AB公司(±标准偏差)为0.66±0.13。使用任意S公司AB公司阈值为0.70,在这些菌株的树状图中,四组(A到D)很容易区分(图。(图2A)。2安培). 33株菌株中只有1株P39不属于四组中的一组。为了测试在该集合中鉴定的四个组与Pujol等人在美国分离株中鉴定的三个组之间的关系(20)并由Lott等人验证(14),从收集的HIV分离物中生成了混合树状图+Pujol等人研究中的患者和26株分离物(20)(其中包括来自第一组的9个分离物、来自第二组的8个分离物,来自第三组的5个分离物和4个离群值[即,非组成员])。在0.70的任意阈值下,四个主要组再次可区分(图。(图2B)。2B型). HIV分离物收集中的所有B组分离物+比勒陀利亚学术医院的患者与Pujol等人收集的I组菌株混合,所有C组菌株与II组菌株混合以及所有D组菌株与III组菌株混合(图。(图2B)。2B型). 然而,18个A组分离物(55%)没有与任何I、II或III组分离物或Pujol集合中的异常值混合(图。(图2B)。2B型). A组分离物形成一个独立的组(图。(图2B)。2B型). 再一次,只有一株HIV病毒+个体P39未分组(图。(图2B)。2B型). 因此,我们将HIV分离株集合中的B、C和D组重新命名+患者组I、II和III,我们将A组重命名为“SA组”,即“南非组”(图。(图2B)。2B型). 艾滋病毒分离株的比例+表中列出了四组(第一组、第二组、第三组和第三组)中前往比勒陀利亚医院就诊的患者表2。2

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(A) 比勒陀利亚学院医院HIV分离株的聚类分析+黑人个体(P)分为四组,分别标记为A、B、C和D。(B)P分离物和Pujol等人的美国分离物(20)收集(FC)揭示了四个组,其中三个组(B、C和D)相当于美国收集的组I、II和III,第四个组(A组)代表新的南非特有组(SA)。任意阈值设置为S公司AB公司= 0.70.

表2。

Ca3探针指纹图谱中不同菌株群的聚类分析

健康状况描述医院指纹总数%分离株的数量:
第一组第二组第三组SA集团没有组
艾滋病咨询门诊+黑人、城市、半城市、,b条农村的比勒陀利亚(P)331518955
卡拉丰(K)17820192527
加兰库瓦(G)38131155813
总计24918174537
健康黑色半城市美杜莎(GC)21241454810
黑人乡村克鲁格公园(OKP,KP),马霍尼西(MAH)452099567
总计6621118538
白色都市c(c)比勒陀利亚大学(PC,UP)461322203313
混合的美国个人(Pujol系列,FC)d日22372718018
请参阅表表1,1,脚注
b条请参阅表表1,1,脚注b条
c(c)请参阅表表1,1,脚注c(c)
d日Pujol等人(20)收集来自美国,包括来自健康个体的分离物,HIV+个人和阴道炎患者。这种情况下的比例对应于从无关宿主获得的22个分离物。

分析白色念珠菌HIV分离物+-Kalafong和GaRankuwa医院的患者显示出同样的南非特有人群。

对178株HIV分离物进行了相同的DNA指纹分析+Kalafong医院就诊的患者和38株HIV分离株+患者前往GaRankuwa医院。平均值S公司AB公司两个集合的s分别为0.66±0.13和0.66±0.12。结果总结见表表2。2在两个收集中,分离出的菌株分为I、II、III和SA组(表(表2)。2). Kalafong和GaRankuwa收集的SA组中的比例与比勒陀利亚学术医院收集的相似(表(表22)。

从健康黑人对照人群中分离。

对于对照采集,对来自Medunsa口腔和牙科诊所健康黑人半城市工作人员的分离物(GC分离物)以及居住和工作在克鲁格公园(Kruger Park)和Mahonisi(MAH分离物)地区的健康黑人农村个体的分离物进行了Ca3指纹分析。平均值S公司AB公司两组的s分别为0.64±0.12和0.68±0.12。在三个HIV分离株集合中观察到的两个集合分为相同的四组+患者(表(表2;2; 图。图3A,3A级、和图。图3B,第3页)。此外,四组中健康黑人半城市和健康黑人农村个体的分离株比例与HIV分离株比例相似+四组中的个体(表(表2)。2). 事实上,黑人HIV分离物的比例+SA组的黑人健康人在这两种情况下均为53%(表(表2)。2). 在图中健康黑人半城市个体分离物(GC分离物)和Pujol等人收集的美国分离物(FC分离物)的组合树状图中。图3A3A级以及图中健康农村个体分离物(OKP、KP和MAH分离物)和Pujol等人收集的美国分离物(FC分离物)的组合树状图。图3B,第3页很明显,SA和FC隔离从未在一个公共集群中混合。

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(A) 健康黑人半城市人群(GC)和美国分离株(FC)的Medunsa分离株的聚类分析。(B) Kruger Park(OKP和KP)和Mahonisi(MAH)分离物的聚类分析,来自健康黑人农村个体和美国分离物(FC)。

从健康白人对照人群中分离。

还从比勒陀利亚大学口腔和牙科医院寻求口腔卫生治疗的白人城市工作人员和患者身上获得了分离物。这组46个指纹分离株被分为四组(图。(图4A),4A级)其中三个与美国分离株在组I、II和III中进行组合,第四个组没有美国分离株,即SA组(图。(图4B)。4B类). SA组的分离株比例(33%)低于HIV组的比例+个体(55%、52%和58%)或黑人健康个体(48%和56%)。这一差异通过Fisher精确检验进行了检验,发现具有统计学意义(P(P)> 0.05). 此外,第三组健康白人的分离株比例明显高于艾滋病毒+和健康的黑人(表(表22)。

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(A) 来自健康白人城市个体(UP和PC)的比勒陀利亚分离物的聚类分析。(B) UP和PC分离物与美国分离物(FC)的聚类分析。

南非收藏品的SA集团联合集群。

为了确保单独收集中的SA组分离物共聚类,本研究为南非收集的每个组合生成了混合树状图。在这项研究中,还为所有361个南非分离株的DNA指纹生成了树状图。在所有情况下,SA都会从共聚类的不同集合中分离出来(未显示数据)。

SA组指纹图案。

将SA簇与其他三个簇(组I、组II和组III)分隔开的节点在南非不同收藏品生成的每个树状图中根深蒂固(图。(图22至4)。4). 当将SA组中随机选择的分离物的指纹模式与随机选择的I、II和III组分离物的模式进行比较时,存在显著差异(图。(图5)。5). 与I、II和III组的模式相比,SA模式在5.4至6.5kb区域的平均带数较少,在4.5至5.4kb区域多了两条带。为了比较I、II、III组和SA分离株的一般模式,我们使用DENDRON程序测量了各组中42个分子量范围为2.05~19.00kb的带所占的比例。在表中表3,给出了四组具有高度不变性的谱带和组间差异较大的谱带(30%)的数据。首先,应该注意的是,SA组分离物的模式包含I、II和III组分离物Ca3杂交模式中六个高度不变的带中的五个(5.4、4.5、3.5、3.3和2.7 kb)(表(表3)。). 然而,SA群菌株中没有一株含有7.9 kb的条带,大多数菌株中也没有3.8 kb的带。这两条带在I、II和III组的分离物中都具有高度的不变性(表(表3)。). 第二,在13例患者中,其中一组与其他三组差异显著,其中9例涉及SA组的显著差异,而只有2例涉及组I的差异,只有1例涉及组II的差异,仅有1例涉及到组III的差异(表(表3)。). 这些结果表明,与SA组相比,I组、II组和III组之间的关系更密切。

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DENDRON生成了从组I(A)、组II(B)、组III(C)和组SA(D)中随机选择的菌株的Ca3指纹模式模型。模型左侧显示了以千碱为单位的分子大小。模型带宽反映带宽强度。

表3。

本标本中I、II、III和SA组分离物的主要谱带差异

带宽大小(bp)b条%在以下位置显示条带的菌株:
%为的组:
第一组(n个= 64)第二组(n个=60)第三组(n个= 25)SA公司(n个= 183)c(c)c(c)
15.7880895二、 SA公司I、 三
14.114409一、 二、南非
13.190840南非一、 二、三
11.11615484南非一、 二、三
8.6138301一、 三、南非
7.9(米)9595800一、 二、三南非
6.863402二、 三一、 SA公司
6.59290264I、 二三、 SA公司
6.12047617二、 三南非
5.8927732一、 二三、 SA公司
5.6823324一、 II、III、SA
5.4(百万)100100100100一、 II、III、SA
5.12213485南非一、 二、三
4.989129279一、 三、南非
4.792085二、 SA公司一、 三
4.5(百万)9898100100一、 II、III、SA
3.8(米)1001008034一、 II、III、SA
3.5(百万)100989292一、 II、III、SA
3.49104二、 三、南非
3.3(百万)100100100100一、 II、III、SA
3.160453南非一、 二、三
2.7(百万)100100100100一、 II、III、SA
2.37313041I、 南非二、 三
2.2202710059三、 SA公司一、 二
使用DENDRON软件程序计算各组中显示42个分子带大小的带的菌株比例。只描述了相对不变或单态的谱带和显示组之间主要差异的谱带(即,两个或多个组之间大于30%)。仅在一组中显示出较大差异的条带以粗体斜体显示。
b条括号中用M表示所有群中的单态或高度不变量带,括号中用M表示仅在群I、II和III中的单形或高度不变性带。
c(c)当超过34%的菌株具有特定的条带时,该比例被视为较高,而当少于34%的分离菌株具有特定条带时则被视为较低。

SA分离物含有IS1

Lott等人(14)证明IS的存在1大多数III组分离物25S rRNA基因中的元素,在I组和II组分离物中完全缺失。因此,我们检测了21株SA菌株和3株分别来自I、II和III组的IS菌株1通过使用具有特异性引物的PCR。21株SA菌株中的13株和所有3株III组菌株均含有IS1.三个I组和三个II组菌株不含IS1。在图中。图6,6PCR产物分别用于3株SA阳性菌株、2株III型阳性菌株、两株I型阴性菌株和2株II型阴性菌株。只有SA组和III组菌株具有包含379-bp IS的626-bp带1第一组介绍。这些结果表明,与III类菌株一样,IS1大多数SA群菌株中仍存在该元素。

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1存在于III组(9、10车道)和SA组(2、3和4车道)隔离株中,但不存在于I组(5和6车道)和II组(7和8车道)隔离群中。1用IS扩增1-特异性引物(14). 信息系统1-含有626 bp的扩增产物,而缺乏IS的扩增产物1247 bp。标准品在第1道和第11道进行检测(pGEM DNA标记来自威斯康星州麦迪逊市普罗米加),选择的标准尺寸标注在凝胶的左侧,单位为千碱。

NAG同化。

最近,非典型菌株白色念珠菌来自安哥拉和马达加斯加的人具有遗传相关性(18,31). 他们被证明不能吸收NAG或GLN,并且在37°C下生长缓慢。因此,我们测试了每组10个随机分离物的NAG和GLN同化能力以及37°C下的生长速度。SA组、I组和III组中的所有测试菌株以及II组中除一个菌株外的所有菌株都吸收了NAG和GLN。没有一株菌株在37°C下生长缓慢。这些结果将SA组的分离株与非典型安哥拉和马达加斯加分离株区分开来。

口咽念珠菌感染无群体关联。

HIV分离物的比例+表中根据医院对患有和不患有口咽念珠菌病(红斑性或伪膜性)的患者进行了总结表4。4在有和无口咽念珠菌病临床症状的个体中,各组比例相似。Fisher对三家医院收集的各组进行了精确测试,结果显示没有统计学上的显著差异。

表4。

艾滋病毒分离株的比例+四个遗传群中有无口腔念珠菌病的患者

医院疾病状态分离物总数%分离株的数量:
第一组第二组第三组SA集团没有组
比勒陀利亚无感染20152010505
感染1315158620
卡拉丰无感染1221820536
感染5625160509
加兰库瓦无感染28111475414
感染10100107010
总计无感染17017185537
感染792214548

讨论

南非的一个分支的鉴定白色念珠菌

1997年,Pujol等人(20)描述了美国分离株白色念珠菌并通过聚类分析证明了三个遗传上不同的组(组I、组II和组III)。在本研究中,三种独立的遗传指纹方法(Ca3、随机扩增多态性DNA和多点酶电泳)将大多数分离物分离为相同的三组。Lott等人(14)使用第四种DNA指纹法验证了这三组。这里,使用Ca3指纹,我们在南非黑人HIV分离物中确定了四组+患者、黑人健康个体和白人健康个体。因为我们使用了与Pujol等人完全相同的Ca3指纹识别程序和相同的计算机辅助方法来分析和存储数据(20),我们生成了南非和美国分离物的混合树状图,以识别前一个收集物中的I、II和III组分离物。结果是明确的。四个南非组中的三个组的菌株与三个美国组的菌株合并,确定这些组为I、II和III。在美国收集中属于异常值(即未分组)的菌株仍然是混合树状图中的异常值。然而,第四组中没有美国菌株与南非菌株分组。这个南非特有的组被标记为SA组。它代表了一半以上的HIV分离物+和健康的黑人。

健康黑人和健康白人之间SA群菌株的比例不同。

SA分离株在HIV中的比例+比勒陀利亚、卡拉丰和加兰库瓦医院的样本分别为55%、52%和58%。在Medunsa口腔和牙科医院采集的健康黑人个体中,该比例为48%,在克鲁格公园和马霍尼西地区采集的健康白人个体中,这一比例为56%。HIV标本中SA分离物的平均比例+两例患者中黑人患者和健康黑人占53%。然而,来自健康白人的SA分离株比例为33%。该组与其他组之间的差异具有统计学意义。如果SA组分离株也被证明不存在于欧洲,那么南非白人中SA分离株比例的下降将表明他们的酵母运输特征跨越了美国/欧洲和南非黑人之间的界限。我们目前正在测试欧洲分离物是否存在SA组分离物,并计划在整个非洲大陆进行同样的采集。

与SA组菌株相比,I组、II组和III组菌株之间的关系更密切。

在为每个南非收集物生成的树状图中,将SA组与组I、II和III分开的节点比将组I、III和II分开的节点根深蒂固。例如,SA分离物与其他三个组(组I、Ⅱ和III)之间的节点值在比勒陀利亚学术医院收集的HIV分离物中为0.55+个体,分离组I、II和III的节点在0.60和0.66之间(图。(图2A)。2安培). 这一结果表明SA组与I、II和III组的祖先不同。图中给出了反映这些树状图结构的模型。图7A。第7章这一基于树状图结构的差异得到了四组之间主要谱带差异的分析的支持。在这种情况下,主要谱带差异被定义为一组含有谱带的菌株比例的急剧增加或减少(表(表3)。). 虽然组I、组II和组III分别显示出两个、一个和一个主要谱带差异,但组SA显示出九个谱带差异。

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(A) 在为所有南非收藏品生成的树状图中观察到的节点层次模型。(B) 代表四组白色念珠菌,基于树状图中的节点层次结构(面板A)和IS的存在1此树基于Lott等人开发的树(14)对于I、II和III组的关系,较薄的分支反映了IS的完全丧失1来自一个组。

Lott等人(14)也证明,虽然大多数III类菌株含有IS125S rRNA基因序列中,所有I组和II组分离物均缺乏IS1这一差异和其他差异导致他们提出了一个树,在该树中,与关系更密切的第一组和第二组分离物相比,第三组分离物属于更古老、更多样的进化群。我们已经证明,大多数SA菌株,如III类菌株(14),包含IS1这些结果,结合上述树状图节点分析,表明一棵树中第一组SA和第I、II和III组的祖先分叉,然后第III组和第I和II组的祖先分化(图。(图7B)。7亿). IS的损失1以较窄的树枝表示(图。(图7B7亿)。

群体之间的关系和传染性。

我们没有发现任何证据表明,在引起感染方面,任何特定菌株的毒力高于任何其他菌株。在所有病例中,每一组黑人HIV感染者的比例相同+有或无口咽感染症状的患者。然而,如果我们假设这种机会性病原体的成功是基于其作为共生体生存和引起感染的能力,我们可以扩大我们对毒力的定义,包括共生加感染(即所有定植)。在这种情况下,我们可以得出结论,在南非,SA群菌株在共生和感染方面都占主导地位,根据这一标准,是最成功的。如果是这样的话,考虑到南非黑人一半的家畜和南非白人三分之一的家畜是SA群分离株,人们想知道为什么SA分离株在世界范围内没有取得同样的成功。

致谢

我们感谢南非比勒陀利亚大学W.F.P.van Heerden和R.Senekal参与了分离物的收集。

这项研究得到了NIH向D.R.S.拨款AI2392和向E.B.拨款Fogarty国际研究奖学金(TWO5473)的支持。

参考文献

1Anderson,J.、T.Srikantha、B.Morrow、S.H.Miyasaki、T.C.White、N.Agabian、J.Schmid和D.R.Soll。1993年DNA指纹探针Ca3的特征和部分核苷酸序列白色念珠菌临床杂志。微生物。 31以下为:1472-1480.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
2阿伦道夫、T.M.和D.M.沃克。1980年白色念珠菌在男人身上。架构(architecture)。口腔生物学。 25以下为:1-10. [公共医学][谷歌学者]
三。Brawner,D.L.和A.J.Hovan。HIV感染患者的口腔念珠菌病。货币。顶部。医学Mycol。 6以下为:113-125. [公共医学][谷歌学者]
4科尔曼、D.、D.沙利文、B.哈灵顿、K.海恩斯、M.亨曼、D.香利、D.贝内特、G.莫兰、C.麦克里雷和L.奥尼尔。1997年杜氏假丝酵母:最近发现的一种与艾滋病毒感染者和艾滋病患者口腔念珠菌病相关的物种。口腔疾病。 以下为:S96-S101。[公共医学][谷歌学者]
5科尔曼、D.C.、D.E.贝内特、D.J.沙利文、P.J.加拉赫、M.C.亨曼、D.B.香利和R.J.罗素。1993年口头念珠菌艾滋病毒感染和艾滋病:新观点/新方法。批评。微生物评论。 19以下为:61-82. [公共医学][谷歌学者]
6Coogan,M.M.、S.P.Sweet和S.J.Challacombe。1994.免疫球蛋白A(IgA)、IgA1和IgA2抗体白色念珠菌全唾液和腮腺唾液中的人类免疫缺陷病毒感染和艾滋病。感染。免疫。 63以下为:892-896.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
7Glick,M.、B.C.Muzyka、D.Lurie和L.M.Salkin。与艾滋病毒相关疾病相关的口腔表现作为免疫抑制和艾滋病的标志物。口腔外科、口腔医学、口腔病理学 77以下为:344-345. [公共医学][谷歌学者]
8格林斯潘,D.,J.S.格林斯潘、M.Schiodt和J.J.Pindborg(编辑)。1990年,艾滋病与口腔,第85-90页。丹麦哥本哈根蒙克斯加雷德。
9亨特、K.D.、J.吉布森、P.洛克哈特、A.皮蒂和J.巴格。1998年耐氟康唑念珠菌接触氟康唑的HIV阳性患者口腔菌群中的种。口腔外科、口腔医学、口腔病理学。口腔放射。恩多德。 85以下为:558-564. [公共医学][谷歌学者]
10Johnson,E.M.、D.W.Warnock、J.Luker、S.R.Porter和C.Scully。1995年出现唑类药物耐药性念珠菌接受长期氟康唑治疗口腔念珠菌感染的HIV感染患者的菌种。J.抗微生物。Chemother公司。 35以下为:103-114. [公共医学][谷歌学者]
11Klein,R.S.、C.A.Harris、C.R.Small、B.Moll、M.Lesser和G.H.Friedland。高危患者口腔念珠菌病是获得性免疫缺陷综合征的最初表现。北英格兰。医学杂志。 311以下为:354-358. [公共医学][谷歌学者]
12Lockhart,S.、J.J.Fritch、A.S.Strudevant Meier、K.Schröppel、T.Srikantha、R.Galask和D.R.Soll。1995.定居人口白色念珠菌DNA指纹和C1测序表明,它们起源于克隆,但通过C1片段重组进行微进化。临床杂志。微生物。 33以下为:1501-1509.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
13Lockhart,S.、C.Pujol、S.Joly和D.R.Soll。2001.开发和使用用于感染性真菌DNA指纹识别的复合探针。《医学杂志》。 39以下为:1-8. [公共医学][谷歌学者]
14Lott,T.J.、D.A.Logan、B.P.Holloway、R.Fundyga和J.Arnold。1999.为了理解人类共生酵母的进化,白色念珠菌微生物学 145以下为:1137-1143. [公共医学][谷歌学者]
15Marco,F.、S.Lockhart、M.Pfaller、C.Pujol、M.S.Rangel-Frausto、T.Wiblin、H.M.Blumberg、J.E.Edwards、W.Jarvis、L.Saiman、J.E.Patterson、M.G.Rinaldi、R.P.Wenzel、NEMIS研究小组和D.R.Soll。1999.阐明医院感染的来源白色念珠菌用复合探针Ca3进行DNA指纹分析。临床杂志。微生物。 37以下为:2817-2828.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
16Nielsen,H.、K.D.Bentsen、L.Hojtved、E.H.Willemoes、F.Scheutz、M.Schiodt、K.Stoltze和J.J.Pindborg。HIV感染患者的口腔念珠菌病和免疫状态。《口腔病理学杂志》。医学。 23以下为:140-143. [公共医学][谷歌学者]
17Pfaller,M.A.、S.R.Lockhart、C.Pujol、J.A.Swails-Wenger、S.A.Messer、M.B.Edmond、R.N.Jones、R.P.Wenzel和D.R.Soll。1998年。医院特异性、区域特异性和氟康唑耐药性白色念珠菌血液分离物。临床杂志。微生物。 36以下为:1518-1529.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
18Pinto de Andrade,M.、G.Schonian、A.Forsch、L.Rosado、I.Costa、M.Muller、W.Presber、G.Mitchell和H.J.Tietz。2000.阴道分离物的遗传相关性评估白色念珠菌来自不同的地理起源。国际医学微生物学杂志。 290以下为:97-104. [公共医学][谷歌学者]
19Powderly、W.G.、K.H.Mayer和J.R.Perfect。艾滋病毒感染者口咽念珠菌病的诊断和治疗:一项重要的重新评估。艾滋病研究逆转录病毒 15以下为:1405-12. [公共医学][谷歌学者]
20Pujol,C.、S.Joly、S.R.Lockhart、S.Noel、M.Tibayrenc和D.R.Soll。1997.随机扩增多态性DNA方法、多点酶电泳和southern blot杂交与中度重复DNA探针Ca3指纹图谱的相似性白色念珠菌临床杂志。微生物。 35以下为:2348-2358.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
21Pujol,C.、F.Renaud、M.Mallie、T.de Meeus和J.M.Bastide。1997年非典型菌株白色念珠菌从艾滋病患者身上恢复过来。医学兽医杂志。迈科尔。 35以下为:115-121. [公共医学][谷歌学者]
22Revankar,S.G.、W.R.Kirkpatrick、R.K.McAtee、O.P.Dib、A.W.Fothergill、S.W.Redding、M.G.Rinaldi和T.F.Patterson。人类免疫缺陷病毒感染患者口咽念珠菌病中氟康唑耐药性的检测及其意义。J.感染。数字化信息系统。 174以下为:821-827. [公共医学][谷歌学者]
23Sadhu,C.、M.J.McEachern、E.P.Rustchenko-Bulgac、J.Schmid、D.R.Soll和J.Hicks。1991年。端粒和分散重复序列念珠菌酵母及其在菌株鉴定中的应用。《细菌学杂志》。 173以下为:842-850.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
24Scherer,S.和D.A.Stevens。1987年DNA指纹技术在流行病学和分类学中的应用念珠菌物种。临床杂志。微生物。 25以下为:675-679页。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
25Schmid,J.、F.C.Odds、M.J.Wiselka、K.G.Nicholson和D.R.Soll。1992年。遗传相似性和维持白色念珠菌DNA指纹图谱显示一组艾滋病患者的菌株。临床杂志。微生物。 30以下为:935-941.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
26Schmid,J.、E.Voss和D.R.Soll。1990年。计算机辅助评估白色念珠菌通过具有适度重复序列Ca3的指纹识别。临床杂志。微生物。 28以下为:1236-1243.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
27Schorling,S.R.、H.C.Kortinga、M.Froschb和F.A.Muhlschlegel。2000杜氏假丝酵母人类免疫缺陷病毒感染者的口腔念珠菌病。批评。微生物评论。 26以下为:59-68. [公共医学][谷歌学者]
28D.R.索尔。2000.感染性真菌DNA指纹的输入和输出。临床。微生物。版次。 13以下为:332-370.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
29Sullivan,D.J.、T.J.Westernen、K.A.Haynes、D.E.Bennett和D.C.Coleman。1995年HIV感染者口腔念珠菌病相关新物种的表型和分子特征。微生物学 141以下为:1507-1521. [公共医学][谷歌学者]
30Sweet、S.P.、S.J.Challacombe和J.R.Naglik。1995年。全唾液和腮腺唾液IgA和IfA亚类对白色念珠菌HIV感染。高级实验医学生物。 37以下为:1031-1034. [公共医学][谷歌学者]
31Tietz,H.J.、A.Kussner、M.Thanos、M.Pinto de Andrade、W.Presber和G.Schonian。1995.不寻常阴道分离株的表型和基因型特征白色念珠菌来自非洲。临床杂志。微生物。 33以下为:2462-2465.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
32Vargas,K.G.、S.A.Messer、M.A.Pfaller、S.R.Lockhart、J.T.Stapleton、J.Hellstein和D.R.Soll。2000.表型转换和耐药性升高白色念珠菌来自第一次鹅口疮发作前的人类免疫缺陷病毒阳性个体。临床杂志。微生物。 38以下为:3595-3607.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
33Xu,J.、T.G.Mitchell和R.Vilgalys。PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分析显示白色念珠菌摩尔生态。 8以下为:59-73. [公共医学][谷歌学者]
34Xu,J.、R.Vilgalys和T.G.Mitchell。1999.两个不同地理位置的样本之间缺乏遗传分化白色念珠菌从感染人类免疫缺陷病毒的患者中分离出来。《细菌学杂志》。 181以下为:1369-1373.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]

文章来自临床微生物学杂志由以下人员提供美国微生物学会(ASM)