谷氨酰胺和丝氨酸选择性调节HCT116细胞中PAT4依赖性雷帕霉素抗性mTORC1信号传导。A类HCT116细胞在不同的培养物中饥饿必需氨基酸、甘氨酸（Gly）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、苏氨酸（Thr）和色氨酸（Trp）以及非必需氨基酸、丝氨酸（Ser）和谷氨酰胺（Gln）四小时，然后提取蛋白质并进行western blotting。在此之后，谷氨酰胺消耗使4E-BP1的γ-磷酸化减少最多（箭头所示）；丝氨酸耗竭也会导致更温和的转变。B类，携带IPTG诱导物的HCT116细胞克隆第四阶段shRNA构建物shPAT4（4.8）和IPTG诱导的非靶向对照构建物shNT在不含IPTG的情况下暴露于含有不同浓度谷氨酰胺的培养基中4小时。在这些条件下，shPAT4（4.8）细胞表达约为正常细胞的50%第4部分mRNA水平(补充图S1B)由于泄漏第四阶段shRNA转录。随着谷氨酰胺浓度下降，shPAT4（4.8）细胞中4E-BP1的γ-磷酸化明显降低。S6磷酸化似乎也受到低谷氨酰胺浓度的影响。C类除培养基中丝氨酸含量不同外，实验与（B）相同。同样，shPAT4（4.8）细胞在丝氨酸浓度降低时具有较低的4E-BP1γ-磷酸化。D类和E类经雷帕霉素处理的HCT116细胞在经历不同水平的谷氨酰胺（D）和丝氨酸饥饿（E）四个小时后，4E-BP1的γ-磷酸化水平显著降低。
