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神经科学杂志。2001年5月1日；21(9): 3017–3023.
数字对象标识：10.1523/JNEUROSCI.21-09-03017.2001
预防性维修识别码：PMC6762571型
PMID：11312286

阿尔茨海默病患者的线粒体异常

Keisuke Hirai先生,1,4 Gjumrakch Aliev公司,2 秋池新村,1,5 藤冈久志,1 罗伯特·拉塞尔,1 克雷格·S·阿特伍德,1 安妮·约翰逊,6 伊冯·克雷斯,6 哈里·文特斯,7 马西莫·塔巴顿,8 下滨顺,9 亚当·卡什,1 桑德拉·西德拉克,1 佩吉·L.R.哈里斯,1 保罗·琼斯,三 罗伯特·彼得森,1 乔治·派瑞,1和马克·史密斯1
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

阿尔茨海默病的氧化损伤，包括对核酸的损伤，主要局限于易感神经元群体的细胞质，这一发现表明线粒体异常可能是阿尔茨海默氏病慢性氧化应激谱的一部分。在本研究中，我们使用了就地线粒体DNA杂交（mtDNA）、细胞色素氧化酶免疫细胞化学和活检标本电镜形态计量学，以确定阿尔茨海默病是否存在线粒体异常及其与8-羟基鸟苷和硝基酪氨酸标记的氧化损伤的关系。我们发现阿尔茨海默病中表现出氧化损伤增加的神经元线粒体DNA和细胞色素氧化酶显著增加。令人惊讶的是，许多线粒体DNA和细胞色素氧化酶存在于神经元细胞质中，而线粒体DNA则存在于与脂褐素相关的液泡中。形态计量学分析表明，阿尔茨海默病患者的线粒体显著减少。线粒体异常和氧化损伤的部位和程度之间的关系表明，阿尔茨海默病的这些特征之间存在密切的早期联系。

关键词：阿尔茨海默病、自由基、新陈代谢、线粒体、神经变性、氧化应激

阿尔茨海默病（AD）的病理表现包括选择性锥体神经元死亡，以及神经元内和细胞外纤维、神经纤维缠结（NFT）和老年斑的积聚(Katzman，1986年;史密斯，1998). 在一系列研究中，我们和其他人已经表明，氧化应激不仅涉及NFT和老年斑蛋白的损伤，还涉及AD期间易死亡神经元群体的细胞质的广泛损伤(Montine等人，1996年;Smith等人，1996年,1997;Sayre等人，1997年). 关于神经元损伤，特别引人注目的是，那些表现出氧化损伤的神经元没有明显的退化迹象(Sayre等人，1997年;Smith等人，1997年)这让我们考虑更细微的细胞学异常是否与氧化损伤有关。

我们进行这项研究是为了确定线粒体是否参与这一过程，因为它们既可以是氧化损伤的靶点，也可以是活性氧的来源。线粒体电子传递蛋白的功能障碍与AD的病理生理学有关(布拉斯和吉布森，1991年)以及帕金森氏病(Parker等人，1989年). 那些通过细胞色素氧化酶活性测量在细胞水平上分析线粒体功能的研究一贯表明，活性缺陷与线粒体损伤相一致(Wong-Riley等人，1997年). 此外，散发性AD患者线粒体与其他细胞融合的细胞质杂交细胞也表明AD患者线粒体功能缺陷(Ghosh等人，1999年;Khan等人，2000年;Trimmer等人，2000年). 然而，这些涉及AD线粒体异常的研究并未集中于脆弱神经元线粒体中的特定神经元细胞学异常及其与氧化损伤的关系。

在本研究中，我们使用细胞学检查就地杂交、免疫细胞化学和形态计量学，以确定线粒体异常是否与AD中的脆弱神经元相关。我们的发现显示线粒体动力学的主要异常仅限于脆弱神经元，表明线粒体与AD中氧化损伤之间存在密切关系。

材料和方法

组织

尸检时从诊断为AD的患者中获取脑组织(Khachaturian，1985年;Mirra等人，1991年)以及无神经系统疾病临床或病理史的对照病例。27例AD患者的海马组织，包括邻近的颞叶皮层、小脑和额叶皮层（年龄57-93岁；死后时间间隔，2-20.5小时；平均6.4小时），12例老年对照病例（年龄54-85岁；死后时间间隔，3-34小时；平均13.8小时）和8例年轻对照病例（年龄3-49岁；尸检间隔，3–23小时；平均12.4小时），分别固定在甲基丙烯酸甲酯（甲醇-氯仿-乙酸，60:30:10）或2%多聚甲醛-0.5%戊二醛中，在4°C下放置16小时进行光学或电子显微镜检查。对于光学显微镜，固定后，通过分级乙醇脱水组织，然后使用二甲苯，并将其嵌入石蜡中。切片厚6μm，切割并安装在硅烷（Sigma，St.Louis，MO）涂层的标准玻璃显微镜载玻片上，用于就地杂交和免疫细胞化学。对于电子显微镜，使用可控震源在60μm处对组织进行切片，并用胶体金进行免疫修饰。

活检

从8名患者（年龄53-84岁）的额叶或颞叶皮层提取组织进行诊断，其中大多数已纳入其他临床病理学研究(Stewart等人，1992年;Praportnik等人，1996年a,b条)有明确的痴呆病史（病程3-11年）和临床表现，符合国家神经和沟通障碍及中风研究所和阿尔茨海默病及相关疾病协会工作组对可能的AD的标准(McKhann等人，1984年). 对5名患有脑积水或脑瘤等各种疾病的患者（年龄62-80岁）的相应组织进行检查，并作为对照。将组织固定在含1.5%戊二醛的二羧酸缓冲液中，并在从大脑中取出后立即在1%四氧化锇中固定1小时。在梯度乙醇和环氧丙烷中脱水后，将组织包埋在Epon 812中，以银干扰色切片，与醋酸铀酰和柠檬酸铅进行电子对比，并使用JEOL 100CX电子显微镜在80 kV下观察网格。

现场杂交

光学显微镜。现场根据以下方法进行杂交Nakamura等人（1996年）进行了一些修改。探针用于就地线粒体DNA（mtDNA）分析为野生型，常见5kb缺失（mtDNAΔ5kb）。为本研究构建了四个寡核苷酸探针，三个长度为45bp，一个长度为29bp。这些探针被称为“嵌合体”，包括ATP酶亚基8的核苷酸坐标8454至8482和NADH-辅酶Q氧化还原酶亚基5的13460至13475的mtDNA区域，“嵌合体短”包括8454至4882的mtDNA区。被指定为“野生1”和“野生2”的探针包含一个片段，该片段跨越ND4L的10897到10941和10981到11025的核苷酸。每个45bp探针的GC含量为51.1%，探针序列缺乏长回文序列。合成所有mtDNA探针，用地高辛标记，并由Operon Technologies（加利福尼亚州阿拉米达）纯化：铝I和2重复序列仅在核DNA中发现（美国亚利桑那州亨茨维尔研究遗传学）。

脱蜡后，用0.1冲洗切片米PBS，pH 7.4，10分钟。用10μg/ml蛋白酶K（Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN）在0.1米37°C下PBS 20分钟，在0.1中冲洗米PBS，然后在0.2中培养米室温（RT）下用HCl浸泡10分钟。用0.1冲洗后米PBS，用0.25%（v/v）醋酸酐在0.1中对切片进行乙酰化米三乙醇胺在室温下处理10分钟。然后，用核糖核酸酶A（Sigma）（50μg/ml）在37°C下处理30分钟，用0.1冲洗米PBS，然后通过分级乙醇系列脱水至100%，并让其风干。将杂交溶液[50%（v/v）甲酰胺、2×SSC、10%w/v右旋糖酐硫酸盐、0.1mg/ml超声处理三文鱼睾丸DNA（Sigma）、0.2mg/ml酵母tRNA（Sigma）和0.4–0.6μg/ml地高辛标记探针]在100°C下煮沸10分钟。用100μl杂交溶液覆盖切片，在95°C下放置在加热块上5分钟，然后在40°C下杂交过夜。杂交后，将样品依次洗涤，用10ml洗涤一次米三氯化氢，pH 7.4，500 m米氯化钠，1米米EDTA，2次2×SSC（1×SSC:0.15米氯化钠，15米米柠檬酸钠，pH 7.4），一次使用0.1×SSC。所有清洗均在37°C下进行10分钟。然后用Tris缓冲盐水（TBS；50 m）冲洗两次切片米三氯化氢，pH 7.6，150 m米NaCl）在RT下孵育10分钟。在RT下在10%正常山羊血清（NGS）中孵育1小时后，将载玻片与地高辛单克隆抗体（1:250；Boehringer Mannheim）在1%NGS中孵养4°C过夜，并用过氧化物酶-抗过氧化物酶法进行免疫染色(斯特恩伯格，1986年)，以3,3′二氨基联苯胺为共基质。作为对照，一些标本按上述方法处理，但没有使用寡核苷酸探针，在其他情况下，用水化切片在37°C下用50 U/ml S1核酸酶（Boehringer Mannheim）和50 U/ml DNase I（Boehlinger Manrheim）组合过夜。在这两种情况下，均未检测到阳性信号。光学密度就地如前所述，使用Quantimet 570C图像处理和分析系统（德国努斯洛赫莱卡）测量人工勾勒出的神经元细胞体的杂交(Nunomura等人，1999年)

电子显微镜。如上所述，对振动段进行处理并与探头杂交。接下来，用TBS（50 m）清洗两次米三氯化氢，pH 7.6，150 m米NaCl）在RT下培养10分钟，在10%NGS中培养2小时，然后在4°C下与稀释在1%NGS中过夜的地高辛单克隆抗体（Boehringer Mannheim）一起培养。在10%NGS中冲洗后，将金（17 nm）偶联的小鼠IgG抗体应用于4–24小时，并在PBS中彻底冲洗。最后，将切片在2.5%戊二醛中后固定1小时，然后再次用PBS冲洗。

作为对照，一些标本按上述方法处理，但没有使用寡核苷酸探针，在其他情况下，用水化切片用50 U/ml S1核酸酶（Boehringer Mannheim）和50 U/ml DNase I（Boehlinger Manrheim）的组合处理，或在37°C下省略地高辛抗体1小时。最后，所有切片在RT下暴露于四氧化锇中1小时，冲洗，用丙酮脱水，并平埋在Spurr的包埋介质中。超薄切片用醋酸铀和柠檬酸铅染色，并在80 kV的JEOL 100CX电子显微镜下观察。

免疫细胞化学

为了确定AD的病理学，我们使用抗血清τ(Perry等人，1991年)显示NFT和aβ单克隆抗体（4G8）(Kim等人，1988年)用于老年斑。分别用8-羟基鸟苷（8-OHG；Trevigen）和硝基酪氨酸抗体（克隆7A2；来自阿拉巴马州伯明翰阿拉巴马大学J.S.Beckman的礼物）鉴定核酸和蛋白质氧化损伤。这些研究中还使用了细胞色素氧化酶-1的单克隆抗体（克隆1D6；分子探针，尤金，OR）。光镜下的所有免疫染色均采用过氧化物酶-抗过氧化物酶法(斯特恩伯格，1986年)免疫金电子显微镜(佩里等人，1985年). 此外，刚果红用于识别某些切片中AD的病变。

形态测量学

在5000倍放大和20000倍放大的情况下，在活检组织中含有核仁的平面上拍摄识别神经元的显微照片，以便可以制作包括整个细胞质的蒙太奇。每个病例检查2到10个神经元。用蔡司立体显微镜在10–20倍下对显微照片进行检查，并对每个神经元的以下细胞器进行鉴定和计数：完整的线粒体、嵴断裂的线粒体、与脂褐素相关的空泡和脂褐素。线粒体总数是完整线粒体和嵴断裂线粒体的总和。对每个结构进行概述，确定面积（NIH Image J程序），并与不包括细胞核的细胞质总面积进行比较。

各组之间的差异由学生的t吨测试和双向方差分析(F类测试）。

结果

现场使用寡核苷酸探针对mtDNA的分析显示，AD患者的mtDNA水平持续显著增加（图。​（图11A、 C、E)与年龄匹配的（图。​（图11B、 D、E)或年轻控件（图。​（图11E类)用于所有使用的探针(第页= 0.0034; 学生的t吨测试），探针之间没有显著差异。线粒体DNAΔ5kb增加（图。​（图22A、 B类)或野生型mtDNA（图。​（图22C、 D类)仅限于神经元，尤其是海马体和新皮质的大型脆弱神经元。神经元标记见于核周细胞质中的颗粒结构，在轴突或树突中未发现。细胞质中标记的位点是DNA酶，但不敏感核糖核酸酶（数据未显示），而与核序列杂交(铝I和2）仅限于细胞核（数据未显示）。重要的是，在海马体中，我们发现尽管锥体神经元（py）在AD中显示mtDNA增加（图。​（图22A、 C类)与对照组相比（图。​（图22B、 D类)其他神经元群，如齿状回颗粒细胞（gr）和胶质细胞没有增加。重要的是，额叶和颞叶皮层也显示出类似的神经元特异性，而小脑（仅轻度受AD影响的区域）在任何细胞群中，野生型或缺失型线粒体DNA均无疾病相关增加（数据未显示）。增加的线粒体DNA对脆弱神经元的限制意味着尽管在脆弱神经元中增加显著（图。​（图1），1)当在区域背景下进行检查时（图。​（图2），2)，这一变化很小，可以解释之前对代表多种细胞类型的组织进行的生化分析无法检测到此处显示的线粒体DNA的大量增加。在我们自己用PCR对AD和对照病例的线粒体DNA进行的比较中，我们没有发现线粒体DNA显著且持续的增加（K.Hirai、M.a.Smith和G.Perry，未发表的观察结果）。回归分析显示，我们的发现与死亡时间间隔或濒死状态之间没有统计学意义上的相关性。

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海马锥体神经元是AD患者极易死亡的细胞，在所有AD患者中均显示线粒体DNA增加(A、，mtDNAΔ5kb，嵌合探针；C、，野生型mtDNA）与对照组比较(B、，mtDNAΔ5kb，嵌合探针；D、，野生型mtDNA）。E、，mtDNA水平的定量密度分析显示，增加了几倍，且显著(第页=0.0034；学生的t吨试验）与老年或年轻对照组±SEM进行比较。比例尺，10μm。

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mtDNAΔ5kb（嵌合探针）(A、 B类)或野生型mtDNA（野生型1）(C、 D类)只显示AD中脆弱神经元的增加。在海马体中，我们发现，而锥体神经元(第页)显示AD中mtDNA增加(A、 C类)与控件相比(B、 D类)其他神经元群，例如齿状回的颗粒细胞(克)以及胶质细胞都没有检测到信号。比例尺，100μm。

线粒体成分的增加并不局限于线粒体DNA，因为线粒体蛋白细胞色素氧化酶在相同的神经元中也显著升高（图。​（图3）三) (第页= 0.013; 学生的t吨测试）。为了检测AD中线粒体DNA和线粒体蛋白的增加是否标志着线粒体的增加，或者每个线粒体的线粒体DNA和细胞色素氧化酶1的增加，我们通过超微结构检查了增加的部位。我们只发现了一个弱者就地AD线粒体的杂交或免疫反应信号（图。​（图44C类)以及对照样品，基于每个线粒体的预期2–10 mtDNA，这是意料之中的。然而，我们也在细胞质中发现了mtDNA和细胞色素氧化酶-1（数据未显示），在mtDNA的情况下，也在与脂褐素相关的空泡中发现了（图。​（图44A、 B类). 光镜分析证实，轴突或树突中没有线粒体显示出明显的线粒体DNA增殖（数据未显示），并且在遗漏寡核苷酸探针、地高辛抗体或之前使用DNA酶治疗后未检测到信号（数据未示出）。这些发现表明，AD线粒体标记物的增加与它们在细胞质和脂褐素的晚期自噬体中的积累有关。

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AD神经元细胞色素氧化酶1免疫反应性增加数倍(A类)与控件相比(B类)如定量密度分析所示(C类) (第页= 0.013; 学生的t吨试验）±SEM。比例尺，50μm。

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术后海马锥体神经元的超微结构观察就地AD患者野生线粒体DNA（野生型1）探针杂交(A、 B类)或mtDNAΔ5kb（嵌合探针）(插图A、B). 脂褐素颗粒的空泡部分内可见高密度的金颗粒，这可能代表AD中受损线粒体的自噬细胞增多(A类)控制范围较小(C、 插入). 相反，在两个AD中都有带嵴的线粒体(B类)和对照病例(C类)mtDNA标记水平较低(C类). 比例尺：1μm；0.25微米(插入).

为了评估AD中线粒体的变化（不依赖于DNA或蛋白质相关探针），以及是否在濒死状态前和痴呆发病后不久的活着的患者中可以观察到这些变化，我们定量检测了活检时取出的标本中的线粒体和脂褐素（图。​（图5）。5). 形态分析（图。​（图6）6)表明AD患者完整线粒体的面积显著减少(第页= 0.012;F类而AD和对照组线粒体受损面积无差异。由于线粒体极易受到形态伪影（如嵴断裂）的影响，通过固定不当，对照组和AD病例显示嵴断裂的线粒体频率相似，表明各组的固定情况相似。AD患者与脂褐素和脂褐素相关的空泡面积百分比均增加，但差异不显著。如前所述(Dowson等人，1998年)，我们注意到AD患者脂褐素颗粒和液泡的大小较大，但只有后者达到显著水平(第页= 0.029;F类测试）。虽然AD病例中只有6个神经元含有神经原纤维缠结，但我们发现这些神经元的线粒体或脂褐素与其他神经元相比没有显著差异。

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活检标本中线粒体和脂褐素的形态检查显示线粒体完整(A类)线粒体嵴断裂(B类)液泡与脂褐素相关V（V）和脂褐素L（左）(C类). 比例尺，1μm。

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数字的形态分析(A类)，大小(B类)和覆盖率(C类)完整线粒体、嵴断裂线粒体、总线粒体（完整线粒体加嵴断裂的线粒体）、与脂褐素相关的空泡以及AD患者和对照组的脂褐素引起的细胞质面积减少。而AD患者完整线粒体覆盖率下降(第页=0.012），与脂褐素相关的液泡没有显著变化(第页=0.056），线粒体嵴断裂(第页>0.10）或脂褐素(第页> 0.08). 虽然脂褐素的大小在AD中没有改变(第页=0.095），与脂褐素相关的液泡显著增加(第页= 0.029). 由F类测试。*表明AD病例与对照病例之间存在显著差异。

在显示mtDNA增殖的相同神经元中，8-OHG和硝基酪氨酸标记的氧化损伤增加（图。​（图7）。7). 此外，正如我们之前提到的8-OHG(Nunomura等人，1999年)和硝基酪氨酸(Smith等人，1997年)线粒体异常最显著的特征之一是其对整个脆弱神经元群体的影响相对一致。因此，这些数据支持神经元氧化损伤和线粒体异常之间的密切地形和时间关系。

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线粒体DNAΔ5kb增加的神经元分布（嵌合探针）(A类)，8欧姆(B类)和硝基酪氨酸(C类)AD的免疫反应完全重叠。编号表示相邻连续切片中的相同神经元。比例尺，50μm。

讨论

在这项研究中，我们通过检测AD中线粒体DNA、线粒体蛋白和线粒体数量来确定脆弱神经元中是否存在线粒体异常。我们发现AD中的线粒体DNA和蛋白均增加。超微结构检查显示，在细胞质和与脂褐素相关的液泡中发现了增加的线粒体DNA和蛋白质，脂褐素是一种溶酶体，在以前的细胞研究中被认为是线粒体自噬降解的部位(Brunk等人，1992年). 活检样本细胞器的形态计量学表明，事实上，AD脆弱神经元的线粒体显著减少。这些发现表明AD脆弱神经元增加了线粒体降解产物，表明自噬导致线粒体更替更大，或者蛋白水解酶的更替减少，导致线粒体DNA和线粒体蛋白的积累。这些线粒体成分可能被破坏，因为羟基壬醛加合物与硫辛酸(Humphries和Szweda，1998年)在相同的液泡中可以发现两种关键的克雷布斯循环酶的修复组，证实了这些成分是无功能的观点（G.Perry、M.A.Smith和L.Szweda，未发表的观察结果）。此外，由于细胞色素氧化酶必须与膜结合才能发挥功能，我们的发现与AD中许多线粒体酶的低功能活性相一致(Wong-Riley等人，1997年).

受损线粒体DNA对AD中易死亡神经元的限制意味着，尽管每个细胞的线粒体DNA数量都显著增加，但从脑组织的角度来看，这种变化是有选择性的。这种选择性很可能解释了以往通过PCR分析对线粒体DNA进行生化分析的结果之间的冲突。当我们用PCR分析线粒体DNA的变化时，我们还发现AD样本和对照样本之间只有很小的差异，即使在以下病例中就地杂交显示增加了四倍（未提供数据）。这种对脆弱神经元的限制与氧化损伤的限制相同，表明它们之间存在密切关系。在非神经元细胞中没有线粒体DNA积累并不意味着它们也不会显示线粒体的变化。在之前的形态计量学研究中，发现内皮细胞中线粒体密度显著降低(Stewart等人，1992年).Blass等人（1990年）和布拉斯和吉布森（1991）也优雅地显示了AD患者的成纤维细胞和其他细胞中的线粒体异常。此处所述的显著变化可能反映了不同类别的神经元如何处理线粒体异常，这种解释与最近细胞质杂种的研究结果相一致，该研究表明，AD患者非神经细胞来源的线粒体存在严重的能量不足(Ghosh等人，1999年;Khan等人，2000年;Trimmer等人，2000年). 我们很容易认为，AD中发现的氧化平衡异常范围源于基本的线粒体缺陷，但显然需要更多的工作来建立这种关系。虽然线粒体DNA遗传差异对我们的观察可能很重要，但仅在AD病例中限制易损神经元的变化，而不是更广泛的涉及所有细胞类型的变化，表明线粒体遗传并不是唯一的因素，但可能涉及不同类型细胞之间线粒体周转和代谢以及氧化防御的差异，需要在未来的研究中进一步澄清(Ito等人，1999年). 在细胞特异性的潜在机制中，脆弱神经元中的活性氧可能会损伤线粒体，同时减少其降解(Friguet等人，1994年). 或者，线粒体可能没有被运输到轴突，这与AD神经元中微管数量减少的情况相一致（A.D.Cash、M.A.Smith和G.Perry，未发表的观察结果）。

这种异常发生在缺乏神经原纤维缠结的神经元中，线粒体异常是AD最早的细胞病理改变。AD的其他变化可能与线粒体密切相关，因为线粒体能量生成受阻将淀粉样β蛋白前体代谢转变为淀粉样β的生成(Gabuzda等人，1994年)，诱导产生A68抗原(Blass等人，1990年)激活有丝分裂原激活的蛋白激酶途径(Luo等人，1997年;Perry等人，1999年;Zhu等人，2000年,2001)，AD的所有功能。

脚注

这项工作得到了美国国立卫生研究院AG09287、AG14249、P50 AG16570和NS38648、美国卫生援助基金会和联合线粒体疾病基金会的支持。

K.H.和G.A.对本研究做出了同等贡献。

信件应寄至俄亥俄州克利夫兰市阿德尔伯特路2085号凯斯西储大学病理学研究所Mark A.Smith博士，邮编44106。电子邮件：ude.urwc.op@12sam.

参考文献

1Blass JP，Gibson GE。氧化异常在阿尔茨海默病病理生理学中的作用。Rev Neurol（巴黎）1991;147：513–525。[公共医学][谷歌学者]
2Blass JP，Baker AC，Ko L，Black RS。通过氧化磷酸化解偶联剂诱导阿尔茨海默病抗原。神经系统科学。1990;47:864–869.[公共医学][谷歌学者]
三。Brunk UT、Jones CB、Sohal RS。基于氧化应激和自噬细胞增多之间相互作用的脂褐质生成和细胞衰老的新假说。突变研究。1992;275:395–403.[公共医学][谷歌学者]
4Dowson JH、Mountjoy CQ、Cairns MR、Wilton-Cox H、Bondaref W.阿尔茨海默病患者Purkinje细胞的脂质体变化。阿尔茨海默病杂志。1998年；1:71–79.[公共医学][谷歌学者]
5Friguet B，Stadtman ER，Szweda LI.4-羟基-2-壬醛对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的修饰。形成抑制多催化蛋白酶的交联蛋白。生物化学杂志。1994;269:21639–21643.[公共医学][谷歌学者]
6Gabuzda D、Busciglio J、Chen L、Matsudaira P、Yankner BA。能量代谢抑制改变淀粉样前体蛋白的加工并诱导潜在的淀粉样衍生物。生物化学杂志。1994;269:13623–13628.[公共医学][谷歌学者]
7Ghosh SS、Swerdlow RH、Miller SW、Sheeman B、Parker WD、Davis RE、Jr《利用细胞质杂交细胞系阐明线粒体功能障碍在阿尔茨海默病和帕金森病中的作用》。Ann NY科学院。1999;893:176–191.[公共医学][谷歌学者]
8Humphries KM，Szweda LI。α-酮戊二酸脱氢酶和丙酮酸脱氢酶的选择性失活：硫辛酸与4-羟基-2-壬烯醛的反应。生物化学。1998年；37:15835–15841.[公共医学][谷歌学者]
9Ito S、Ohta S、Nishimaki K、Kagawa Y、Soma R、Kuno S-Y、Komatsuzaki Y、Mizusawa H、Hayashi J-I.老年阿尔茨海默病患者血小板和尸检脑组织中线粒体基因组的功能完整性。美国国家科学院程序。1999;96:2099–2103. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
10Katzman R.阿尔茨海默病。N英格兰医学杂志。1986;314:964–973.[公共医学][谷歌学者]
11哈恰图里亚语ZS。阿尔茨海默病的诊断。神经系统科学。1985;42:1097–1105.[公共医学][谷歌学者]
12Khan SM、Cassarino DS、Abramova NN、Keeney PM、Borland MK、Trimmer PA、Krebs CT、Bennett JC、Parks JK、Swerdlow RH、Parker WD，Jr、Bennett-JP、Jr阿尔茨海默病杂交子通过细胞死亡途径复制β-淀粉样蛋白异常。Ann Neurol公司。2000;48:148–155.[公共医学][谷歌学者]
13Kim KS，Miller DL，Sapienza VJ，Chen CMJ，Bai C，Grundke-Iqbal I，Currie JR，Wisniewski HM.合成脑血管淀粉样肽单克隆抗体的制备和鉴定。神经科学研究委员会。1988;2:121–130. [谷歌学者]
14Luo Y、Bond JD、Ingram VM。线粒体功能受损导致胞浆钙增加和MAP激酶激活。美国国家科学院程序。1997;94:9705–9710. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
15McKhann GD、Drachman DA、Folstein MF、Katzman R、Price D、Stadlan EM。阿尔茨海默病的临床诊断：由卫生和公众服务部阿尔茨海默氏病工作组主持的NINCDS-ARDA工作组的报告。神经病学。1984;34:939–944.[公共医学][谷歌学者]
16Mirra SS、Heyman A、McKeel D、Sumi SM、Crain BJ、Brownlee LM、Vogel FS、Hughes JP、van Belle G、Berg L.成立阿尔茨海默病注册中心（CERAD）的财团。第二部分。阿尔茨海默病神经病理学评估的标准化。神经病学。1991;41:479–486.[公共医学][谷歌学者]
17Montine TJ、Amarnath V、Martin ME、Strittmatter WJ、Graham DG。E-4-羟基-2-壬醛是P19神经胶质培养物中的细胞毒性和交联细胞骨架蛋白。美国病理学杂志。1996;148:89–93. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
18Nakamura N，Hattori N，Tanaka M，Mizuno Y.使用嵌合体探针通过原位杂交对缺失的线粒体DNA进行特异性检测。Biochim生物物理学报。1996;1308:215–221.[公共医学][谷歌学者]
19Nunomura A、Perry G、Pappolla MA、Wade R、Hirai K、Chiba S、Smith MA。RNA氧化是阿尔茨海默病脆弱神经元的一个显著特征。神经科学杂志。1999;19:1959–1964. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
20Parker WD、Boyson SJ、Parks JK。特发性帕金森病的电子传递链异常。Ann Neurol公司。1989;26:719–723.[公共医学][谷歌学者]
21Perry G、Rizzuto N、Autilio-Gambetti L、Gambetti P。阿尔茨海默病患者的成对螺旋丝含有细胞骨架成分。美国国家科学院程序。1985;82:3916–3920. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
22Perry G、Kawai M、Tabaton M、Onorato M、Mulvihill P、Richey P、Morandi A、Connolly JA、Gambetti P。阿尔茨海默病的神经线表现出正常细胞骨架的显著改变。神经科学杂志。1991;11:1748–1755. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
23Perry G、Roder H、Nunomura A、Takeda A、Friedlich AL、Zhu X、Raina AK、Holbrook N、Siedlak SL、Harris PLR、Smith MA。阿尔茨海默病中神经元细胞外受体激酶（ERK）的激活将氧化应激与异常磷酸化联系起来。神经报告。1999;10:2411–2415.[公共医学][谷歌学者]
24Praprotnik D，Smith MA，Richey PL，Vinters HV，Perry G.老年性阿尔茨海默病斑块中营养不良神经突的质膜脆性：氧化应激指数。神经病理学学报。1996年a；91：1-5。[公共医学][谷歌学者]
25Praprotnik D，Smith MA，Richey PL，Vinters HV，Perry G.老年斑营养不良神经突内的纤维异质性表明阿尔茨海默病中快速轴突运输受阻。神经病理学报。1996年b；91:226–235.[公共医学][谷歌学者]
26Sayre LM、Zelasko DA、Harris PLR、Perry G、Salomon RG、Smith MA.4-羟基炔醛衍生的高级脂质过氧化终产物在阿尔茨海默病中增加。神经化学杂志。1997;68:2092–2097.[公共医学][谷歌学者]
27Smith MA。阿尔茨海默病。收件人：Bradley JY，Harris RA，编辑。神经生物学国际评论。学术；圣地亚哥：1998年。第1-54页。[公共医学][谷歌学者]
28Smith MA、Perry G、Richey PL、Sayre LM、Anderson VM、Beal MF、Kowall N。阿尔茨海默病的氧化损伤。自然。1996;382:120–121.[公共医学][谷歌学者]
29Smith MA、Harris PLR、Sayre LM、Beckman JS、Perry G.阿尔茨海默病中广泛存在的过氧亚硝酸盐介导的损伤。神经科学杂志。1997;17:2653–2657. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
30洛杉矶斯特恩伯格。免疫细胞化学，第3版。威利；纽约：1986年。[谷歌学者]
31Stewart PA、Hayakawa K、Akers M-A、Vinters HV。阿尔茨海默病血脑屏障的形态计量学研究。实验室投资。1992;67：734–742。[公共医学][谷歌学者]
32宾夕法尼亚州特里默、斯威德洛RH、帕克斯JK、基尼P、小贝内特JP、米勒SW、戴维斯RE、帕克WD。，散发性帕金森病和阿尔茨海默病杂交细胞系线粒体形态异常。实验神经学。2000;162:37–50.[公共医学][谷歌学者]
33Wong-Riley M、Antuono P、Ho K-V、Egan R、Hevner R、Liebl W、Huang Z、Rachel R、Jones J.阿尔茨海默病中的细胞色素氧化酶：视觉和其他系统的生化、组织化学和免疫组织化学分析。视觉研究。1997;37:3593–3608.[公共医学][谷歌学者]
34Zhu X，Rottkamp CA，Boux H，Takeda A，Perry G，Smith MA。p38通路的激活与阿尔茨海默病中的tau磷酸化、氧化应激和细胞周期相关事件相关。神经病理学实验神经学杂志。2000;59:880–888.[公共医学][谷歌学者]
35Zhu X，Raina AK，Rottkamp CA，Aliev G，Perry G，Boux H，Smith MA。阿尔茨海默病变性神经元中c-Jun N末端激酶/应激激活蛋白激酶的激活和再分布。神经化学杂志。2001;76:435–441.[公共医学][谷歌学者]
文章来自神经科学杂志由以下人员提供神经科学学会