国际生物科学杂志。2019; 15(8): 1571–1581.
咖啡因通过抑制LPS诱导的THP-1巨噬细胞MAPK/NF-κB和A2aR信号抑制NLRP3炎症激活
上海交通大学上海儿童医院新生儿科，中国上海。
#这些作者对这项工作贡献均等
竞争利益：作者声明不存在竞争利益。
2019年2月18日收到；2019年5月2日验收。
摘要
各种危险因素引起的过度炎症与支气管肺发育不良（BPD）的发生有关。咖啡因作为BPD的临床预防药物具有强大的抗炎作用。最近，NLRP3炎症小体的激活被证明对BPD的发病机制至关重要。在本研究中，我们旨在研究咖啡因对LPS诱导的THP-1巨噬细胞中NLRP3炎症小体激活的影响，并探索其详细机制。我们发现，咖啡因显著降低了THP-1巨噬细胞中NLRP3的表达、ASC斑点的形成和caspase 1的裂解，从而降低了IL-1β和IL-18的分泌。咖啡因还显著降低MAPK和NF-κB通路成员的磷酸化水平，进一步抑制THP-1巨噬细胞中NF-κ·B的移位。此外，通过减少ROS的产生，沉默咖啡因接触的腺苷A2a受体（A2aR）显著降低THP-1巨噬细胞中裂解caspase 1的表达。鉴于这些发现，我们得出结论，咖啡因通过抑制LPS诱导的THP-1巨噬细胞中MAPK/NF-κB信号和A2aR-相关ROS的产生来抑制NLRP3炎症小体的激活。
关键词：咖啡因、NLRP3炎性体、MAPK、NF-κB、A2aR、THP-1巨噬细胞
引言
支气管肺发育不良（BPD），早产儿慢性肺功能不全的初步定义1是一种多因素发病的严重肺部并发症2新的证据表明，包括宫内绒毛膜羊膜炎、氧气治疗、机械通气和医院感染在内的多种因素导致早产儿肺部持续损伤，而这种损伤是由炎症机制介导的三-5主要由肺泡巨噬细胞过度分泌包括IL-1β在内的促炎细胞因子被认为是BPD患者肺泡极化降低的原因6,7因此，为了最有效地预防或改善BPD，干预措施应侧重于抑制炎症以保护受伤的肺部8.
近年来，广泛用于治疗早产儿呼吸暂停的咖啡因因其对BPD的预防作用而备受关注9最初，研究人员将咖啡因缩短通气时间的功效归因于它对呼吸中枢的刺激，从而进一步减轻炎症10此外，有报道称咖啡因也有利尿作用11，提供神经损伤保护12并诱导表面活性蛋白B（SP-B）转录13最近，越来越多的证据表明，在高氧和脂多糖（LPS）诱导的啮齿动物模型中，咖啡因可以抑制促炎细胞因子的分泌，尤其是IL-1β，从而减轻炎症反应14-16然而，咖啡因抗炎作用的分子机制尚不清楚。
越来越多的研究表明，核苷酸结合域和富含亮氨酸重复蛋白3（NLRP3）炎性体的激活与急性肺损伤的发病机制有关17,18当巨噬细胞感受到LPS等外部危险信号时，NLRP3与含有CARD（ASC）和caspase 1前体的凋亡相关斑点样蛋白相互作用，形成NLRP3炎症小体19,20活化的NLRP3炎性体是caspase-1依赖性成熟和巨噬细胞分泌促炎细胞因子IL-1β和IL-18的超分子平台21,22最近的一项研究表明，NLRP3缺乏小鼠在高氧状态下表现出炎症减轻和肺泡极化功能改善23.
此外，患有BPD的早产儿中NLRP3炎性体的过度激活和IL-1β水平的升高也证明了NLRP3在这种情况下的主要作用24然而，目前尚不清楚咖啡因是否在LPS刺激下抑制巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活。在这项研究中，我们旨在评估咖啡因对NLRP3炎症小体激活的影响，并探索潜在的潜在机制。
材料和方法
细胞培养和治疗
人单核细胞白血病细胞系（THP-1）来源于中国科学院类型培养库。细胞以5×10的密度培养5细胞/mL，RPMI 1640培养基中，添加10%FBS和1%青霉素/链霉素溶液（以色列生物工业公司），37℃，5%CO2培养箱。在所有实验中，THP-1单核细胞在用100 nM佛波醇12-肉豆蔻酸13-醋酸盐（PMA）处理的6孔板中培养24小时，以转化为粘附的巨噬细胞。
咖啡因、ATP、LPS、PMA和聚-L-赖氨酸溶液购自Sigma-Aldrich（美国圣路易斯）。Nigericin购自InvivoGen（美国圣地亚哥）。
细胞毒性测试
根据制造商的说明，通过Annexin V-FITC、PI染色和流式细胞术（BioLegend，美国）评估咖啡因对THP-1巨噬细胞的细胞毒性。总计1×105THP-1巨噬细胞接种在12孔板中，并与咖啡因（100-800μM）孵育6小时。
细胞因子ELISA检测
THP-1巨噬细胞以5×10的密度接种在6孔板中5细胞/mL。用咖啡因（100-800μM）或载体预处理细胞1h，然后用LPS（1μg/mL）处理3h，用ATP（5 mM）处理30min。细胞培养上清液在4℃下以1500 rpm离心15min，并丢弃颗粒。按照制造商提供的说明，使用市售ELISA试剂盒（Abclonal，中国）测量分泌的IL-1β和IL-18。
定量实时PCR（qRT-PCR）
用TRIzol试剂（Life Technologies，USA）从培养的细胞中提取总RNA，并使用Takara Prime Script RT试剂盒（Takara，Japan）逆转录为cDNA。qRT-PCR使用TB Green PCR试剂盒（日本Takara）和Roche Light Cycler 96实时PCR系统（瑞士Roche）进行。PCR热循环参数如下：95℃，600 s；95°C 45次循环10秒，60°C 15秒，72°C 15 s；并在65至97°C温度下形成熔化曲线，以确保单个产品的放大。GAPDH基因被用作内源性控制。使用2-ΔΔCT方法计算相对基因表达。表中给出了用于qRT-PCR分析的引物序列。
siRNA转染
使用HiPerFect转染试剂在无血清Opti-MEM中进行基因敲除实验（德国齐亚根）。根据制造商的方案，用5 nM人类A2aR小干扰RNA（siRNA）（德国齐亚根）或不相关的非靶向阴性对照（NC）siRNA和Alexa Fluor 488（德国齐阿根）转染细胞12 h，或仅用转染试剂处理细胞（用于模拟转染）。然后将细胞在标准生长条件下进一步孵育18小时。转染后36小时，通过qRT-PCR和western blotting证实A2aR缺失。
蛋白质印迹
如前所述，使用标准方案进行蛋白质印迹25,26简单地说，使用Mini-PROTEAN TGX凝胶（Bio-Rad，美国）通过10%SDS-PAGE提取和分离总蛋白，并将分离的蛋白转移到PVDF膜上。在室温下用5%脱脂牛奶封闭膜2小时，然后在4°C下用特定的一级抗体培养过夜。主要抗体，包括针对NLRP3、Caspase 1（p20）、P-p65（Ser536）、ERK、P-ERK（Thr202/Tyr204）、JNK、P-JNK（Thro183/Tyr185）、p38、P-p38（Thr180/Tyr182）、IκB-α、P-IκBα（Ser32）、裂解Caspase 3和ASC的抗体，购自Cell Signaling Technology（Boston，USA）。针对Caspase 1、Caspase 3、p65、A2aR和GAPDH的抗体购自Abclonal（中国武汉）。接下来，在室温下将膜与适当的二级抗体孵育1小时，并使用增强化学发光（ECL）试剂（美国Thermo Scientific）对条带进行可视化。本研究中的所有蛋白质印迹图像均代表至少3个独立的生物学实验。
免疫荧光染色
为了进行NF-κB染色，THP-1巨噬细胞在用LPS（1μg/ml）治疗前与800μM咖啡因或载体孵育3小时。然后，如前所述，通过免疫细胞化学分析细胞27抗NF-κB p65的一级抗体来自Abclonal（中国武汉）。
文献中描述了用于探索ASC斑点形成的染色方法28在用LPS（1μg/ml）处理3小时和尼格瑞辛（10μM）处理90分钟之前，将细胞与800μM咖啡因或载体一起孵育。用初级抗ASC抗体（Abcam，UK）检测ASC斑点。使用奥林巴斯FV1000共焦显微镜（日本奥林巴斯）以100倍放大率拍摄图像。细胞核用DAPI染色（Beyotime，中国）。本研究的所有免疫染色图像均代表至少3个独立的生物学实验。
细胞活性氧的测定
根据制造商的说明，使用活性氧（ROS）检测试剂盒（美国BioVision）和流式细胞术检测THP-1巨噬细胞中的ROS生成。使用CytExpert软件对数据进行分析。
统计分析
结果显示为至少三个独立实验的平均值±SD。学生的t检验用于两组之间的比较。使用单因素方差分析法分析两组以上患者之间的差异。使用Graph Pad Prism 7.0软件进行统计分析，第页<0.05被认为具有统计学意义。
结果
咖啡因对细胞存活和凋亡的影响
为了测试咖啡因对THP-1巨噬细胞的细胞毒性，我们通过流式细胞术检测细胞存活率。结果表明，与对照组相比，咖啡因的浓度对细胞存活没有显著影响（图A和B）。为了评估咖啡因对细胞凋亡的影响，我们通过Western blot分析检测了裂解的Caspase 3/Caspase 3比率。数据表明，与对照组相比，用咖啡因治疗THP-1巨噬细胞在蛋白质水平上没有改变裂解的Caspase 3/Caspase 3比率（图C和D）。之后，我们在以下实验中使用了100、200、400和800μM咖啡因。
咖啡因对THP-1巨噬细胞存活和凋亡的影响。（A） 用Annexin V-PI染色和流式细胞术测定THP-1巨噬细胞经咖啡因（100-800μM）处理6 h后的细胞存活率。（B） 条形图显示所有细胞系的存活率。（C） 用咖啡因（100-800μM）处理THP-1巨噬细胞6 h。用western blotting分析裂解的Caspase 3和Caspase 2的蛋白水平。（D） 使用灰度分析来量化裂解的胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶3的相对表达。结果表示平均值±SD（n=3）。
咖啡因抑制LPS/ATP诱导的THP-1巨噬细胞分泌IL-1β和IL-18
为了测试咖啡因是否影响炎症小体特异性细胞因子的表达，我们测量了LPS/ATP诱导的THP-1巨噬细胞的细胞培养上清液中IL-1β和IL-18的分泌水平。数据表明，用LPS和ATP诱导THP-1巨噬细胞显著增加了IL-1β和IL-18的分泌（图A和B）。咖啡因预处理以剂量依赖的方式抑制了两种促炎细胞因子的释放（图A和B）。为了进一步确定咖啡因是否抑制炎症细胞因子的表达，我们检测了IL-1β和IL-18的mRNA水平。结果表明，LPS和ATP处理增加了IL-1β的mRNA水平，咖啡因预处理可以减弱这种影响（图C） ●●●●。另一方面，IL-18的mRNA水平相对稳定；他们既不受LPS/ATP刺激也不受咖啡因预处理的影响，这表明该细胞因子持续表达（图D） 。基于上述发现，我们假设咖啡因抑制NLRP3炎性小体特异性细胞因子的分泌，并且这种作用是通过抑制IL-1β基因表达实现的。
咖啡因减弱LPS和ATP刺激的THP-1巨噬细胞中细胞因子IL-1β和IL-18的产生。（A） 用咖啡因预处理1h，然后用LPS（1μg/ml）孵育3h，ATP（5 mM）孵养30min的THP-1巨噬细胞中的IL-1β水平进行评估白介素1β通过qRT-PCR分析。（D） mRNA水平白介素18通过qRT-PCR分析。结果表示三个实验的平均值±SD***第页与对照组相比<0.001#第页<0.05, ##第页<0.01和###第页与LPS和ATP组相比<0.001。
咖啡因减弱NLRP3炎症小体的激活
为了验证在LPS刺激下IL-1β和IL-18分泌增加是否有助于THP-1巨噬细胞中NLRP3炎性体的激活，我们进一步研究了咖啡因对NLRP3炎症体激活的影响。结果表明，在LPS和ATP刺激下，NLRP3 mRNA和蛋白的表达是炎症小体激活的速率控制步骤29，显著增加（图A-C）。此外，咖啡因预处理可以逆转NLRP3 mRNA和蛋白表达的增加（图A-C）。NLRP3的上调和激活促进了Caspase 1的激活（Caspase 1-p20水平），进而促进了IL-1β和IL-18的加工和分泌。PCR结果还表明，咖啡因显著降低了胱天蛋白酶1的激活，而不是胱天蛋白酶1的mRNA和蛋白质表达（图A、 B和E）。当NLRP3炎性小体被激活时，衔接蛋白ASC组装成一个大的蛋白复合物，称为ASC斑点或焦下垂小体，这被认为是炎症小体激活的典型标志30我们的结果表明，咖啡因不会改变ASC mRNA和蛋白质的表达（图A、 B和D），但减少了LPS和尼日尔金刺激的ASC斑点数量（图F） ●●●●。这些观察结果表明，咖啡因可以抑制NLRP3炎症小体的激活和ASC的招募。
咖啡因抑制LPS和ATP/黑精刺激的THP-1巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活。（A） 通过western blotting评估用咖啡因预处理1h，然后用LPS（1μg/ml）孵育3h和ATP（5 mM）孵养30min的THP-1巨噬细胞中NLRP3炎性小体成分蛋白的表达。（B）使用密度分析量化NLRP3炎症小体蛋白的表达水平。mRNA水平nlrp3型（C） ，asc公司（D） 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（E） 通过qRT-PCR分析。结果表示三个实验的平均值±SD***第页与对照组相比<0.001#第页<0.05, ##第页<0.01和###第页与LPS和ATP组相比<0.001。（F） 用抗ASC（红色）抗体在THP-1巨噬细胞中用咖啡因（800μM）预处理1h，然后用脂多糖（1μg/ml）和黑精（10μM）处理90min，通过免疫荧光分析观察ASC斑点形成。DAPI（蓝色）用作核标记物。比例尺：50μm。
咖啡因通过MAPK/NF-κB途径抑制NLRP3炎性体活性
新的实验证据表明，MAPK和NF-κB在炎症应激反应和NLRP3激活中发挥重要作用31-33为了研究咖啡因是否通过抑制MAPK/NF-κB信号传导抑制NLRP3炎症小体激活，我们分析了NF-κB途径分子的蛋白质水平和核定位。western blot结果表明，咖啡因预处理降低了LPS刺激后磷酸化IκB-α和p65的水平（图A-C）。我们还发现，咖啡因预处理显著抑制了p65的核定位，这意味着其活性被阻断（图D） 。同样，我们检测到在用咖啡因预处理后LPS刺激的细胞中JNK、ERK和p38的磷酸化水平降低（图). 上述结果表明，咖啡因通过抑制THP-1巨噬细胞中MAPK/NF-κB信号通路，抑制LPS诱导的NLRP3炎性体激活。
咖啡因抑制LPS刺激的THP-1巨噬细胞NF-κB活化。（A） 通过western blotting分析用咖啡因预处理1h，然后用LPS（1μg/ml）孵育3h的THP-1巨噬细胞中IκB-α、p65及其磷酸化形式（P-IκB-α和P-p65）的蛋白水平。（C） 密度分析用于量化Ser536处p65的磷酸化。结果表示三个实验的平均值±SD***第页与对照组相比<0.001#第页<0.05时##第页<0.01，以及###第页与LPS组相比<0.001。（D） 用抗p65（绿色）抗体在THP-1巨噬细胞中进行免疫荧光分析，观察p65核定位。THP-1经咖啡因（800μM）预处理1h，LPS（1μg/ml）预处理3h。DAPI（蓝色）作为核标记物。比例尺：50μm。
咖啡因抑制LPS刺激的THP-1巨噬细胞MAPK通路激活。（A） 在用咖啡因预处理1h，然后用LPS（1μg/ml）孵育3h的THP-1巨噬细胞中，通过western blotting评估JNK、ERK、p38及其磷酸化形式（P-JNK，P-ERK和P-p38）的蛋白质水平。（B）使用密度分析量化Thr183/Tyr185处JNK的磷酸化。（C） 密度分析用于量化Thr202/Tyr1204处ERK1/2的磷酸化。（D） 密度分析用于量化Thr180/Tyr182处p38的磷酸化。结果表示三个实验的平均值±SD***第页与对照组相比<0.001#第页<0.05, ##第页<0.01，以及###第页与LPS组相比，<0.001。
咖啡因通过抑制A2aR诱导的ROS生成抑制NLRP3炎症小体激活
最近的研究表明，黄嘌呤，包括咖啡因，主要通过拮抗A2aR发挥抗炎作用34减少活性氧的产生35激活NLRP3炎性体所需的36我们首先通过LPS和ATP刺激的THP-1巨噬细胞的siRNA转染沉默A2aR表达。沉默后，A2aR蛋白水平显著降低，Caspase 1（p20）表达显著下调（图A和B）。与阴性对照（NC）组相比，每个治疗组中NLRP3、ASC和Caspase 1的表达仅略有不同（图A和B）。此外，A2aR siRNA组的ROS生成低于NC组（图C和D）。然后，我们研究了THP-1巨噬细胞中咖啡因和A2aR之间的相互作用。结果表明，咖啡因以剂量依赖的方式抑制A2aR的表达（图E-G），并抑制ROS的产生（图H和I）。总之，这些发现表明，咖啡因通过降低A2aR表达，至少部分抑制了ROS介导的NLRP3炎症小体激活。
咖啡因抑制A2aR活性，以减少THP-1巨噬细胞中NLRP3激活所需ROS的生成。（A） 通过western blotting对预先用A2aR-siRNA或阴性对照（NC）-siRNA孵育12 h，然后用LPS（1μg/ml）处理3 h和ATP（5 mM）处理30 min的THP-1巨噬细胞中A2aR、NLRP3、ASC、Caspase 1和Caspase l（p20）的蛋白水平进行评估，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1和1（p20）。（C） THP-1巨噬细胞用A2aR-siRNA或NC-siRNA预孵育12 h，然后用LPS（1μg/ml）处理3 h，ATP（5 mM）处理30 min。流式细胞术检测ROS生成。（D） 密度分析用于量化ROS水平。（E） 用western blotting法检测THP-1巨噬细胞中A2aR蛋白水平，THP-1经咖啡因预处理1h，再经LPS（1μg/ml）处理3h，ATP（5mM）处理30min2安培经qRT-PCR检测。（G） 密度分析用于量化A2aR蛋白表达水平。（H） THP-1巨噬细胞用咖啡因预孵育1 H，然后用LPS（1μg/ml）处理3 H，ATP（5 mM）处理30 min。流式细胞仪检测ROS生成。（一） 密度分析用于量化ROS水平。结果表示三个实验的平均值±SD***第页与对照组相比<0.001#第页<0.05, ##第页<0.01，以及###第页与LPS和ATP组相比<0.001。
讨论
值得注意的是，已经对咖啡因在BPD中的肺保护作用进行了广泛的研究，但咖啡因是否可以缓解BPD中NLRP3炎症小体的变化尚不清楚。在本研究中，用咖啡因预处理后，LPS诱导的THP-1巨噬细胞中NLRP3炎性体水平显著降低。此外，MAPK/NF-κB信号通路被咖啡因抑制。A2aR的RNA沉默导致对NLRP3通路的影响类似于咖啡因的影响。我们的研究表明，咖啡因可以通过影响MAPK/NF-κB信号传导抑制THP-1巨噬细胞中的NLRP3炎性体，部分是通过抑制A2aR激活的ROS的生成（图). 因此，我们提出了咖啡因肺保护作用的新机制。
示意图显示了咖啡因对LPS刺激的THP-1巨噬细胞中NLRP3炎症小体激活的影响。
迄今为止，越来越多的体内和在体外研究表明，产前绒毛膜羊膜炎结合产后机械通气、氧疗和医院感染可激活肺泡巨噬细胞，分泌包括IL-1β在内的促炎细胞因子，从而进一步加速BPD的进展37-39此外，研究人员证实，肺泡巨噬细胞释放IL-1β受到NLRP3炎性体激活的严密控制40,41最近，Liao等人。23发现NLRP3-/-小鼠在高氧治疗下不会出现炎症反应，并保持正常的肺泡极化。此外，通气早产狒狒还显示NLRP3炎性体激活和IL-1β水平升高。然而，在BPD期间，常规咖啡因治疗对活化巨噬细胞中NLRP3炎性体的影响尚不清楚。在我们的研究中，咖啡因治疗THP-1巨噬细胞后，LPS/ATP刺激下调NLRP3、Caspase 1和IL-1β。我们的发现加深了对咖啡因抗炎机制的理解，并强调了进一步研究的必要性体内研究。
众所周知，NLRP3炎性体的激活在转录和翻译后水平上受到严格调控。先前的研究表明，在巨噬细胞中，LPS刺激MAPK和NF-κB通路激活，作为IL-1β和IL-18转录上调的第一信号42-44对于NF-κB途径，IκB-α被磷酸化，因此在LPS刺激下标记为泛素依赖性蛋白酶体降解，这允许p65磷酸化并从异二聚体中分解。NF-κB p65是核因子-κB异二聚体的代表性亚单位，通常在Ser536位置磷酸化，然后转移到细胞核以上调NLRP3和IL-1βmRNA的表达45在我们的研究中，咖啡因显著降低了IκB-α的磷酸化，以防止其在LPS刺激的THP-1巨噬细胞中降解。同时，p65的磷酸化降低，NF-κB的活化和移位也降低。MAPK通路还参与NF-κB通路的激活以及IL-1β和IL-18的上调46,47我们的结果表明，咖啡因抑制LPS诱导的JNK、ERK和p38的磷酸化。综上所述，上述结果表明，咖啡因预处理通过干扰MAPK介导的NF-κB活性抑制IL-1β的转录上调。
据报道，咖啡因是一种非选择性腺苷受体拮抗剂，对A2aR具有相对高的亲和力48A2aRs是G蛋白偶联受体，其激活刺激一系列下游通路，包括PKA、CREB和MAPK通路49最近的实验表明，用A2aR拮抗剂治疗可以阻止或逆转炎症刺激激活人类肺泡巨噬细胞的能力31此外，A2aR是活性氧生成的关键调节因子，是ATP诱导的持续NLRP3炎症小体激活所必需的50,51我们的结果表明，A2aR的敲低显著损害了LPS/ATP刺激的THP-1巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活和ROS的产生。此外，咖啡因显著抑制LPS/ATP诱导的THP-1巨噬细胞A2aR基因转录和蛋白表达，表明A2aR抑制可能是咖啡因抑制NLRP3激活的介质。
结论
总之，我们的研究结果表明，咖啡因通过抑制THP-1巨噬细胞中NLRP3炎症小体的激活而发挥抗炎作用。这些发现提供了新的见解，并支持对咖啡因治疗BPD作用的分子机制的全面理解。
致谢
本研究得到了上海市科学技术委员会（134119a0500）和上海市卫生和计划生育委员会重点发展课题计划（No.2016ZB0102）的资助。
作者的贡献
Z.W.M、M.L和G.X.H构思并设计了该研究。Z.W.M和M.L进行了实验并分析了数据。Z.W.M、M.L、C.C和G.X.H撰写并修改了手稿。所有作者阅读并批准了最终手稿。
缩写
| A2AR公司 | 腺苷A2A受体 |
| 列车自动防护系统 | 三磷酸腺苷 |
| ASC公司 | 含有CARD的凋亡相关斑点样蛋白 |
| 桶/日 | 支气管肺发育不良 |
| CAF公司 | 咖啡因 |
| CREB公司 | cAMP反应元件结合蛋白 |
| DAPI公司 | 4'，6-二氨基-2-苯基吲哚 |
| ERK公司 | 细胞外调节蛋白激酶 |
| FBS公司 | 胎牛血清 |
| IκB | κB抑制剂 |
| 伊利诺伊州 | 白细胞介素 |
| JNK公司 | c-Jun N-末端激酶 |
| 液化石油气 | 脂多糖 |
| MAPK公司 | 丝裂原活化蛋白激酶 |
| 数控 | 阴性对照 |
| 核因子-κB | 活化B细胞的核因子-κ-轻链增强子 |
| NLRP3型 | 核苷酸结合结构域，亮氨酸富集家族，吡啶结构域-3 |
| 最大功率放大器 | 佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯 |
| PKA公司 | 蛋白激酶A |
| ROS公司 | 活性氧物种 |
| RPMI公司 | 罗斯韦尔公园纪念学院 |
| 小干扰RNA | 小干扰RNA |
| SP-B型 | 表面活性剂蛋白B |
参考文献
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