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图6

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NPL4是高效处理泛素化Mga2p和Spt23p融合蛋白。(A) 诱导野生型GFP-Mga2p融合蛋白(WT;1-4通道),npl4-1号机组(5-7车道),npl4-2号机组(车道8–10),cdc48-2型(车道11-13),ufd1-1型(14-16车道),以及转速4Δ(17–19车道)小区25°C。收集细胞进行抗GFP Western blot分析指示的时间点为半乳糖诱导。星号表示高分子量GFP-Mga2p蛋白。(B) GFP-Spt23p的诱导野生型融合蛋白(WT;1-4通道),npl4-1号机组(5-7车道),npl4-2号机组(8–10车道),cdc48-2型(车道11-13),ufd1-1型(车道14-16),以及转速4Δ(17–19车道)单元温度为25°C。收集细胞,在指示半乳糖诱导的时间点。星号表示高分子量GFP-Spt23p蛋白。(C) 亚细胞的GFP-Spt23p在野生型(WT)中的定位,npl4-1号机组,npl4-2号机组,cdc48-2型,ufd1-1型,转速4Δ120分钟半乳糖诱导后的细胞25°C。GFP-Spt23p信号在野生型细胞中主要是核质信号,而在突变体中大部分保留ER/核膜菌株。(D) GFP-Spt23p(左)和GFP-Mga2p(右)分别为野生型(WT)免疫沉淀(IP)或npl4-1号机组表达Myc-tagged泛素的酵母全细胞提取物。表达式GFP-Spt23p和GFP-Mga2p的半乳糖(泳道2、4、6、8、10、12、14和16),或用之前添加葡萄糖(通道1、3、5、7、9、11、13和15免疫沉淀。在同一凝胶上运行的样品通过以下方法进行分析抗GFP(1-4和9-12车道)或抗Myc(5-8和13-16车道)蛋白质印迹。

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