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图2

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Npl4p-GFP定位于内质网/核膜。(A)全细胞的抗-Npl4(左)和抗GFP(右)蛋白印迹从表达内源性Npl4p的菌株中提取的提取物(通道1和4) 、一个基因组标记的Npl4p-GFP(第2和第5道)和一个基因组标记的Npl4p-蛋白A(pA)(通道3和6)。抗Npl4斑点显示用两种不同的Npl4p精确替换内源性Npl4pC末端标记的蛋白质(将通道2和3与通道1进行比较)。这个抗Npl4与Npl4-pA(车道3)的强大反应性是以下因素的结果抗体与Npl4p表位以及IgG结合pA的相互作用标签。兔抗GFP印迹可识别Npl4p-GFP和Npl4p-pA(分别为第5和第6车道)。不同蛋白质的特性由箭头指示。星号表示未识别交叉反应蛋白。(B) 观察到的Npl4p-GFP定位荧光显微镜。在中期观察活细胞。定位主要是细胞核(白色箭头)和细胞质核周膜上的明显浓度。白色箭头显示了Npl4p-GFP定位到外周膜的示例。右侧显示了细胞的Nomarski图像。(C) 中性粒细胞4p-GFP与DAPI染色的核DNA共定位。细胞被固定在甲醛,用Triton X-100渗透,DAPI染色荧光显微镜。大多数Npl4p-GFP定位于DAPI观察到的与核重叠和围绕核的区域染色。右侧显示了细胞的Nomarski图像。(D)荧光显微镜观察Npl4p-GFP的表达DeltaVision平台。连续0.1μm荧光图像通过表达Npl4p-GFP的二倍体酵母菌株NPL4号机组并经历了五轮反褶积。所呈现的图像代表了未卷积数据的中心平面。白色箭头表示Npl4p-GFP在核周膜。白色箭头表示Npl4p-GFP示例定位于外周膜。

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