医学（巴尔的摩）。2017年12月；96（51）：e9402。
ERCC1表达状态预测转移性或复发性宫颈癌患者经铂类化疗的疗效和生存率
，医学博士，一 ，医学博士，一 、医学博士、博士，一 ，医学博士，一 、医学博士、博士，一 、医学博士、博士，b、，c（c） 、医学博士、博士，日期：，∗和医学博士a、，c、，∗
金曼（Jin Man Kim）
b条病理科
c（c）感染控制融合研究中心
李孝进（Hyo Jin Lee）
一内科
c（c）感染控制融合研究中心
监测编辑：张德强。
一内科
b条病理科
c（c）感染控制融合研究中心
d日韩国大田中南国立大学医学院妇产科。
2017年8月2日收到；2017年11月30日修订；2017年11月30日接受。
版权©2017作者。由Wolters Kluwer Health，Inc.出版。 摘要
已知编码切除-修复交叉互补组1（ERCC1）蛋白的脱氧核糖核酸（DNA）修复基因可以预测对基于铂的化疗的反应。我们的目的是探讨ERCC1的表达是否可以预测经铂类化疗治疗的复发或转移性宫颈癌患者的肿瘤反应和生存率。我们分析了32名此类患者。用免疫组织化学方法检测预处理活检标本中ERCC1的表达。在32例患者中，13例（40.6%）ERCC1高。ERCC1-low患者的缓解率（73.7%）明显高于其他患者（15.4%）。ERCC1状态的中位无进展生存期差异显著，ERCC1高的患者为135天，ERCC1-低的患者为242天（危险比，2.428；95%可信区间，1.145-5.148，P（P） = .032). ERCC1低（617天）患者的总生存期显著长于ERCC1高（320天）患者（危险比，2.322；95%可信区间，1.051–5.29；P（P） = .037). 因此，预处理ERCC1表达状态可用于预测接受铂类化疗的复发或转移性子宫颈癌患者的肿瘤反应和生存率。
关键词：化疗、顺铂、ERCC1、子宫颈癌
1.简介
宫颈癌是美国第三常见的妇科癌症，也是全世界最常见的妇科癌。[1,2]据估计，2012年新诊断出528000例宫颈癌，266000名患者死亡。[1]早期发现宫颈癌通常可以成功治疗。然而，初次出现或复发时出现远处转移的患者很少能治愈。化疗（通常是双铂）仍是此类患者的标准治疗方法。[三——5]然而，常规化疗既没有疗效，也与长期疾病控制无关。[6]因此，确定更好地预测治疗反应和生存结果的因素至关重要。
脱氧核糖核酸（DNA）修复与顺铂耐药性的发展密切相关。[7]铂盐与DNA结合以产生铂-DNA加合物，[8]然后共价交联DNA链，抑制DNA复制。核苷酸切除/修复在去除加合物中起着核心作用，并与对基于铂的化疗的耐药性相关。[7]切除修复交叉互补组1（ERCC1）蛋白是顺铂耐药的关键介质。它形成核苷酸切除/修复途径的速率限制酶，去除铂–DNA加合物。[9——11]
体外研究表明，铂耐药性与卵巢癌、宫颈癌、睾丸癌、膀胱癌和非小细胞肺癌细胞系中ERCC1 mRNA的表达有关。[12,13]此外，一些临床研究表明，ERCC1的表达与多种肿瘤患者对基于铂的化疗的耐药性和不良预后相关，[12,14——17]提示DNA损伤修复能力在顺铂化疗或放疗耐药中起重要作用。因此，我们探讨了ERCC1状态是否可以预测接受以铂为基础的化疗的转移性或复发性子宫颈癌患者的肿瘤反应和生存率。
2.方法
2.1. 患者和治疗
2004年10月至2011年1月，32例复发或转移性子宫颈癌患者在Chungnam国立大学医院接受了双铂治疗，并回顾了他们的病历。我们分析了患者的人口统计学、东方合作肿瘤组（ECOG）的表现状态（PS）、疾病的组织学类型、疾病部位、放射增敏剂的先前使用、化疗方案、化疗前的血红蛋白水平、疾病进展日期和最后随访时的生存状态。化疗方案包括顺铂/紫杉醇、卡铂/紫杉醇、顺铂/5-氟尿嘧啶和顺铂/拓扑替康。使用1.1版实体肿瘤（RECIST）系统中的反应评估标准，每2或3个周期评估一次肿瘤反应。所有患者均出具书面知情同意书。研究方案得到了我们机构审查委员会的批准。
2.2. 免疫组织化学
用免疫组织化学（IHC）分析ERCC1的表达。我们从所有宫颈癌样本中制备石蜡包埋组织切片。使用小鼠EnVision-HRP检测系统（Dako，Carpintia，CA）对石蜡块切片（3μm厚）进行IHC。针对ERCC1的单克隆小鼠抗体（克隆8F1；加利福尼亚州弗里蒙特赛默公司）用于IHC。切片置于10 mM柠檬酸钠缓冲液（pH 6.0）中，在压力锅中全功率运行4分钟，脱蜡和抗原回收后，暴露于3%（v/v）过氧化氢中10分钟。用背景还原稀释剂（Dako）以1:800稀释一级抗体，并在4°C的加湿室中培养过夜。然后将载玻片与EnVision试剂孵育30分钟，然后与DAB色原孵育5分钟；之后，用迈尔苏木精对其进行复染并装裱。在每一步之间，使用TBS-0.3%（v/v）吐温的几种变化进行仔细冲洗。一份小鼠IgG1同型样本（缺乏一级抗体）作为对照。核染色的细胞被认为是阳性的。
2.3. ERCC1表达评估
使用免疫反应评分（IRS）系统半定量评估ERCC1核表达。IRS基于染色强度（按0-3分制评分，其中0=无染色，1=弱染色，2=中等染色，3=强染色）和染色程度（阳性细胞百分比，按0-1分制评分（其中0=不染色，0.1=1%-9%，0.5=10%–49%，1=50%–100%染色）。最后一个半定量H（H）分数从0到3的范围是通过分数相乘得到的。中位数H（H）分数是ERCC1高和ERCC1低肿瘤的分界点。[18]
2.4. 统计分析
使用χ2测试。使用Kaplan–Meier方法进行生存概率分析。无进展生存期（PFS）被定义为从首次治疗到记录疾病进展的时间间隔。总生存期（OS）被定义为从第一次治疗到因任何原因死亡的时间间隔。使用对数秩检验来评估组间差异的显著性。P（P）数值<0.05表示有统计学意义。所有统计分析均使用SPSS软件进行（版本22.0；SPSS Inc，Chicago，IL）。
3.结果
3.1. ERCC1的表达与临床特征
患者特征如表所示患者的中位年龄为51岁（范围为34-67岁）。ERCC1表达定位于细胞核（图。)和中位数H（H）得分为1.5。因此，患者被分为ERCC1-低（分数≤1.5）组和ERCC1-高（分数>1.5）组。32例患者中，13例（40.6%）为ERCC1高，19例（59.4%）为ERCC低。两组在年龄、ECOG-PS、组织学类型、疾病部位、疾病状态、先前使用放射增敏剂、化疗方案或化疗前血红蛋白水平方面没有差异（表)。
子宫颈癌ERCC1的代表性免疫组化染色。用免疫组织化学方法检测ERCC1的表达。癌细胞核中检测到ERCC1蛋白（核信号，棕色）的表达。ERCC1-高组（A）和ERCC1-低组（B）。原始放大倍数，×400。ERCC1=切除修复交叉互补组1。
3.2. ERCC1表达与治疗反应的关系
总的完全缓解率为12.5%（32名患者中有4名）。12名患者出现部分缓解，10名患者病情稳定，6名患者病情进展。ERCC1-low患者的有效率（14/19，73.7%）和疾病控制率（18/19，94.7%）显著高于ERCC1-high患者（2/13，15.4%和8/13，61.5%；P（P） = .分别为001和018；表). 此外，ERCC1-low患者的完全缓解率（4/19，21.1%）显著高于ERCC1-high患者（0/13，0%；P（P） = .001; 表)。
3.3. ERCC1表达与生存的关系
我们通过ERCC1表达状态比较PFS和OS。中位随访时间为14.3个月（范围为2.9-52.0个月）。ERCC1高患者的中位OS为320天，ERCC1低患者的中位OS为617天（危险比为2.322；95%置信区间为1.051–5.129；P（P）=。037; 图。，表). ERCC1高的患者的PFS中位数也明显低于ERCC1低的患者（135 vs 242天；危险比2.428；95%置信区间1.145–5.148；P（P） = .032; 图。，表). 单变量和多变量分析表明，ERCC1的高表达是预测晚期宫颈癌化疗患者OS的独立危险因素。
根据ERCC1表达状态的总体生存率。ERCC1高的患者总生存期短于ERCC1低的患者。ERCC1=切除修复交叉互补组1。
表3
ERCC1表达的PFS和OS的单变量和多变量分析。
根据ERCC1表达状态的无进展生存期。ERCC1高的患者比ERCC1低的患者无进展生存期更差。ERCC1=切除修复交叉互补组1。
4.讨论
转移性或复发性宫颈癌仍然是女性死亡的主要原因。受影响的患者通常接受以双铂为特征的姑息性化疗，但预后极差。目前的5年生存率仅为17%。因此，对于转移性或复发性宫颈癌患者，需要预测铂双重治疗后结果的生物标记物。[19]
有效的DNA修复导致顺铂耐药，编码ERCC1的基因在这方面至关重要。顺铂–DNA加合物通过核苷酸切除修复去除，ERCC1表达与铂化合物耐药性之间的关系已在包括宫颈癌在内的各种癌症患者中观察到。[12,14——16,20,21]我们假设ERCC1与治疗反应相关，并探讨ERCC1的表达是否可以作为生物标记物预测接受铂类化疗的晚期子宫颈癌患者的临床结局。我们发现低ERCC1表达与显著更好的治疗反应和更长的生存期相关。与ERCC1高表达患者相比，ERCC1低表达患者的总体缓解率（73.7%vs 15.4%）和疾病控制率（94.7%vs 61.5%）显著提高，这与头颈部鳞癌、食管癌和膀胱癌患者的研究结果一致。[22——24]此外，ERCC1低表达与PFS和OS显著延长有关。ERCC1低癌患者的PFS为242天，而ERCC1高癌患者为135天(P（P） = .032). ERCC1-low患者的OS也优于ERCC1-high患者，这与接受顺铂单药治疗的局部晚期宫颈癌患者的发现一致。[25]
一些研究探讨了ERCC1状态是否是宫颈癌预后的有用标志。Britten等人[12]发现ERCC1编码mRNA水平预测了人宫颈癌细胞株的顺铂耐药性。Park等人[26]据报道，低水平的ERCC1表达独立地预测了接受基于顺铂的新辅助化疗的子宫颈癌患者的无病生存期延长。最近，Karageorgopoulou等人[27]据报道，ERCC1表达状态对接受顺铂化疗的转移性或复发性宫颈癌患者的生存有显著的预测作用。相比之下，Doll等人[28]发现在仅接受放疗的宫颈癌患者中，低水平ERCC1表达与较低的生存率相关，这表明低水平ERCC表达患者的不良预后与ERCC1依赖的DNA修复途径修复辐射诱导的DNA损伤没有直接关系，而是出现了更具侵袭性的肿瘤表型，这反映了当仅接受放射治疗时DNA修复能力降低。
我们的研究有一定的局限性。首先，我们的工作是回顾性的，不局限于短时间内收集的数据。其次，我们的患者样本很小；我们的发现必须谨慎解释。需要对大量患者样本进行精心设计的前瞻性研究。尽管存在这些局限性，但我们已经证明，转移性或复发性子宫颈癌患者肿瘤细胞中的预处理ERCC1水平与以铂为基础的化疗结果呈负相关。
总之，我们发现，在接受以铂为基础的化疗以治疗转移性或复发性子宫颈癌的患者中，预处理标本中ERCC1的表达模式可以预测肿瘤反应和生存率。因此，ERCC1表达状态可有效预测此类患者的预后。
脚注
缩写：CI=置信区间，CR=完全缓解，CTX=化疗，DNA=脱氧核糖核酸，ECOG=东方合作肿瘤组，ERCC1=切除修复交叉互补组1，FU=氟尿嘧啶，Hb=血红蛋白，HR=危险比，IgG=免疫球蛋白G，IHC=免疫组化，IRS=免疫反应评分，OS=总生存率，PD=进展性疾病，PFS=无进展生存率，PR=部分缓解，PS=表现状态，RECIST=实体瘤的缓解评估标准，SCC=鳞癌，SD=稳定疾病，TBS=三缓冲盐水。
人力资源部和I-CS同样为这项工作做出了贡献。
这项工作得到了韩国政府（MSIP）资助的韩国国家研究基金会（NRF）拨款（编号：2017R1A5A201538）的支持。
作者没有利益冲突需要披露。
工具书类
[1]Ferlay J、Soerjomataram I、Dikshit R等人。全球癌症发病率和死亡率：GLOBOCAN 2012的来源、方法和主要模式。国际癌症杂志2015;136：E359–86。[公共医学][谷歌学者] [2]Siegel RL、Miller KD、Jemal A。2017年癌症统计。临床医师肿瘤杂志2017;67:7–30. [公共医学][谷歌学者] [3]Thigpen T、Shingleton H、Homesley H等人。顺铂治疗晚期或复发性宫颈鳞癌：妇科肿瘤组的II期研究。癌症1981;48:899–903. [公共医学][谷歌学者] [4]Long HJ，3rd，Bundy BN，Grendys EC，Jr等人。顺铂联合或不联合拓扑替康治疗宫颈癌的随机III期试验：妇科肿瘤组研究。临床肿瘤学杂志2005年；23:4626–33. [公共医学][谷歌学者] [5]Monk BJ、Sill MW、McMeekin DS等人。IVB期、复发性或持续性宫颈癌中四种含顺铂双药联合治疗的III期试验：一项妇科肿瘤组研究。临床肿瘤学杂志2009;27:4649–55.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] [6]Greer BE、Koh WJ、Abu-Rustum NR等。宫颈癌。J Natl Compr Canc Netw杂志2010;8:1388–416. [公共医学][谷歌学者] [7]里德·E。铂-DNA加合物、核苷酸切除修复和铂基抗癌化疗。癌症治疗进展1998;24：331–44。[公共医学][谷歌学者] [8]凯利。以铂为基础的癌症化疗的复苏。Nat Rev癌症2007;7:573–84. [公共医学][谷歌学者] [9]Zamble DB、Mu D、Reardon JT等。哺乳动物切除核酸酶修复顺铂-DNA加合物。生物化学1996;35:10004–13. [公共医学][谷歌学者] [10]桑卡A。DNA切除修复机制。科学类1994;266:1954–6. [公共医学][谷歌学者] [11]Mu D、Hsu DS、Sancar A。人类DNA修复切除核酸酶的反应机制。生物化学杂志1996;271:8285–94. [公共医学][谷歌学者] [12]Britten RA、Liu D、Tessier A等。ERCC1表达作为宫颈癌细胞顺铂耐药的分子标志。国际癌症杂志2000;89:453–7. [公共医学][谷歌学者] [13]Altaha R、Liang X、Yu JJ等。切除修复交叉互补组1：基因表达与铂耐药性。国际分子医学杂志2004;14:959–70. [公共医学][谷歌学者] [14]Mountzios G、Dimopoulos MA、Papadimitriou C。切除修复交叉互补组1酶作为非小细胞肺癌铂基化疗反应性的分子决定因素。生物标志洞察2008;三:219–26.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] [15]Smith S、Su D、Rigault de la Longrais IA等人。上皮性卵巢癌中ERCC1基因型和表型确定患者可能从紫杉醇治疗和基于铂的治疗中获益。临床肿瘤学杂志2007;25:5172–9. [公共医学][谷歌学者] [16]Shirota Y、Stoehlmacher J、Brabender J等人。ERCC1和胸苷酸合成酶mRNA水平预测接受奥沙利铂和氟尿嘧啶联合化疗的结直肠癌患者的生存率。临床肿瘤学杂志2001年；19:4298–304. [公共医学][谷歌学者] [17]Lord RV、Brabender J、Gandara D等人。ERCC1低表达与非小细胞肺癌顺铂联合吉西他滨化疗后生存期延长相关。临床癌症研究2002;8:2286–91. [公共医学][谷歌学者] [18]Olaussen KA、Dunant A、Fouret P等人。非小细胞肺癌ERCC1基因修复及顺铂辅助化疗。N英格兰J医学2006;355:983–91. [公共医学][谷歌学者] [20]刘国荣，瞿QX，米RR，等。【RNA干扰卵巢癌细胞系中切除修复交叉互补1基因增强顺铂细胞毒性】。中华妇产科杂志2006;41:339–42. [公共医学][谷歌学者] [21]Gossage L、Madhusudan S。肿瘤切除修复交叉互补组1（ERCC1）的研究现状。癌症治疗进展2007;33:565–77. [公共医学][谷歌学者] [22]Jun HJ、Ahn MJ、Kim HS等。ERCC1表达作为顺铂同步放化疗治疗头颈部鳞癌的预测指标。英国癌症杂志2008;99:167–72.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] [23]Kim MK、Cho KJ、Kwon GY等。ERCC1预测食管癌的放化疗耐药和不良预后。欧洲癌症杂志2008;44:54–60. [公共医学][谷歌学者] [24]川岛A、中山M、川田Y等人。切除修复交叉互补组1可预测放化疗治疗肌肉浸润性膀胱癌的疗效。临床癌症研究2011;17:2561–9. [公共医学][谷歌学者] [25]Zwenger AO、Grosman G、Iturbe J等人。ERCC1和TUBB3在局部晚期宫颈鳞癌中的表达及其与不同治疗方案的相关性。国际生物学标记2015;30：e301–14。[公共医学][谷歌学者] [26]Park JS、Jeon EK、Chun SH等。ERCC1（切除修复交叉互补组1）表达作为FIGO 2B期宫颈癌新辅助化疗反应的预测因子。妇科肿瘤学2011;120:275–9. [公共医学][谷歌学者] [27]Karageorgopoulou S、Kostakis ID、Gazouli M等人。以铂为基础的化疗治疗转移性或复发性宫颈癌患者的预后和预测因素。BMC癌症2017;17:451.[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者] [28]Doll CM、Prystajecky M、Eliasziw M等人。低ERCC1 mRNA和蛋白表达与宫颈癌患者单用放射治疗的生存率降低相关。放射治疗Oncol2010;97:352–9. [公共医学][谷歌学者] 
