美国国家科学院院刊。2004年11月23日；101(47): 16549–16554.
长x2–/–小鼠发生肝纤维化
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Ewa Wandzioch公司
*瑞典乌梅大学乌梅分子医学中心，瑞典乌梅90187；和†纽约州纽约市西奈山医学院肝病科，邮编：10029-6574
奥萨·科特鲁德
*瑞典乌梅大学乌梅分子医学中心，瑞典乌梅90187；和†纽约州纽约市西奈山医学院肝病科，邮编：10029-6574
玛丽亚·雅各布森
*瑞典乌梅大学乌梅分子医学中心，瑞典乌梅90187；和†纽约州纽约市西奈山医学院肝病科，邮编：10029-6574
斯科特·L·弗里德曼
*瑞典乌梅大学乌梅分子医学中心，瑞典乌梅90187；和†纽约州纽约市西奈山医学院肝病科，邮编：10029-6574
莱夫·卡尔森
*瑞典乌梅大学乌梅分子医学中心，瑞典乌梅90187；和†纽约州纽约市西奈山医学院肝病科，邮编：10029-6574
*瑞典乌梅大学乌梅分子医学中心，瑞典乌梅90187；和†纽约州纽约市西奈山医学院肝病科，邮编：10029-6574
由Kathryn V.Anderson，Sloan–Kettering Institute编辑，纽约，2004年10月12日批准
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支持文本
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摘要
肝纤维化是对任何类型慢性损伤的创伤愈合反应，其特征是细胞外基质（ECM）蛋白沉积逐渐增加，其主要来源是活化的肝星状细胞（HSC）。因为直线电机同源盒基因长x2在HSC和肝脏发育中表达长x2–/–小鼠受到干扰，我们分析了长x2–/–胚胎的细节。长x2–/–胚胎中含有大量活化的HSC，并显示与肝纤维化相关的ECM蛋白沉积逐渐增加，表明Lhx2抑制HSC活化。将Lhx2 cDNA转染到人HSC株中可下调活化HSC特征基因的表达。此外长x2–/–肝脏的细胞组织受到破坏，肝内胚层细胞的基因表达模式发生改变，ECM蛋白沉积增加是这些异常的先兆。总的来说，这些结果表明Lhx2负性调节HSC的激活，因此其在发育中的HSC失活似乎与慢性肝损伤的创伤愈合反应所触发的信号相似。本研究建立了一种自发且可复制的肝纤维化动物模型，并揭示了肝细胞中Lhx2的表达对肝脏的适当细胞组织和分化至关重要。
关键词：肝星状细胞，肝硬化，肝再生
肝纤维化及其终末期肝硬化是一个巨大的世界卫生保健问题。肝纤维化的常见原因是对肝脏造成的不同慢性损伤，如酗酒、病毒性肝炎、胆管梗阻、免疫介导的损伤，以及一组统称为先天性肝纤维化的发育异常(1–三). 纤维化的发展是肝脏对不同慢性损伤的持续创伤愈合过程的结果(1,4). 所有形式的纤维化和肝硬化都有几个共同的特征，与潜在的病因无关，例如细胞外基质（ECM）蛋白的过度和无序沉积以及扭曲的肝脏结构，最终会导致肝功能受损(5–7).
一些证据支持这样的假设，即肝星状细胞（HSC）（也称为脂肪细胞、脂肪储存细胞或伊藤细胞）是纤维生成过程的中心介体。在正常肝脏中，HSC储存类视黄醇，并定位于分离肝细胞和窦内皮细胞的Diss内皮下间隙(8,9). 在肝脏受损区域，HSC被激活并转化为肌纤维母细胞样细胞。活化的HSC开始增殖，是已知在纤维化肝脏中积聚的ECM蛋白的主要来源(10–13). 触发HSC激活的外部刺激在患者材料和动物模型中已被广泛研究，但在HSC中介导反应的基因基本未知(2).
我们最近发现LIM同源盒基因长x2在成人肝脏的HSC中表达(14).长x2–/–胚胎在大约胚胎第16天（E16）发生肝发育不全并死于非造血间充质细胞无特征性缺陷引起的贫血(14,15). 因为肝纤维化和肝硬化的纤维化过程是由表型改变的HSC引起的(1,4,11,16)，我们研究了长x2–/–胚胎的细节。有趣的是长x2–/–小鼠胚胎发展为自发性和进行性肝纤维化，表现出许多与患者材料和肝纤维化动物模型中发生的致病过程有关的特征。
方法
小鼠和胚胎。的生成长x2–/–据报道有老鼠(15)，并按照描述对其进行了维护和基因分型(14,17). 本研究中涉及动物的所有实验均已获得乌梅大学伦理委员会的批准。
免疫组织化学、抗体、组织化学和原位杂交。在每种染色中分析来自独立窝的2到6个胚胎。收集的组织用4%的多聚甲醛固定，然后包埋在石蜡或OCT化合物中（Sakura，Zoeterwoude，荷兰）。按照标准程序处理石蜡包埋切片进行苏木精-伊红染色或Gordon和Sweet方法进行网织蛋白纤维银染色。按照说明进行免疫染色(18)使用以下主要抗体：生物素化兔抗白蛋白、大鼠抗E-钙粘蛋白、兔抗α-甲胎蛋白（AFP）、兔抗结蛋白、小鼠抗结蛋白，兔抗胶原蛋白IV、兔抗层粘连蛋白、兔抗人细胞角蛋白、大鼠抗PECAM-1、小鼠Cy3-结合抗α-平滑肌肌动蛋白（ASMA）和小鼠抗纤维连接蛋白。以下二级抗体用于免疫荧光：Cy3抗兔IgG、Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG1和驴抗鼠IgG。双花扁豆使用与生物素结合的凝集素。白蛋白抗体和双色D用亲和素-生物素法检测凝集素，以3,3′-二氨基联苯胺四氯化物为显色剂。切片常规用4′，6-二脒基-2-苯基吲哚复染以显示细胞核。所使用的所有抗体和试剂的来源和目录号见支持方法，发布为支持信息在PNAS网站上。按说明制备反义Lhx2探针(14).现场杂交是通过使用标准杂交技术进行的，并在支持方法共聚焦显微镜分析按说明进行(14). 结蛋白阳性细胞的定量描述见支持方法.
RNA制备和实时PCR分析。通过NucleoSpin纯化试剂盒（BD Biosciences）从WT和突变动物的两到三个肝脏中提取总RNA。使用第一链cDNA合成试剂盒（Amersham Biosciences）合成cDNA。对来自WT和突变肝脏的三种独立cDNA制备物进行了三次实时PCR分析。实时PCR程序和我们使用的引物的详细描述见支持方法.
LX-2细胞系的转染。细胞在10时接种6转染前24小时，在10-cm培养皿中每皿细胞数。根据制造商的建议，使用5或10μg小鼠Lhx2表达质粒或空载体（pcDNA3.1，Invitrogen）作为对照，在15μl Fugene试剂中转染细胞。转染24小时后收集细胞，使用RNeasy试剂盒（Invitrogen）和逆转录分离总RNA，并进行实时PCR分析。转染Lhx2质粒或空载体的细胞存活率无差异。进行了五次独立的转染，结果相似。
结果
细胞外基质蛋白的增加表达和沉积长x2–/–胎儿生命。我们最初比较了长x2–/–和WT胚胎处于E14.5，此时肝脏发育良好，WT和突变肝脏之间的表型差异很容易辨别。除了体积缩小外，突变胚胎的肝脏还含有纤维样组织()未在WT肝脏中观察到()表明正在进行纤维形成过程。纤维化的特征是各种ECM蛋白的沉积增加，如I型和III型间质胶原、糖蛋白纤维结合蛋白、基底膜成分IV型胶原和层粘连蛋白(5,6,19). 因此，我们在蛋白质沉积和基因表达水平上比较了突变肝脏和野生型肝脏的ECM含量。在突变的肝脏中发现了丰富的III型胶原沉积，如网状蛋白纤维()而WT肝窦周间隙存在稀疏的网织蛋白纤维(). 由于E12.5突变的肝脏中网织蛋白纤维的水平略有增加，因此纤维化是进行性的()与野生型肝脏相比()，但E12.5突变肝脏中的III型胶原沉积不如E14.5突变肝脏中显著（比较). 此外，已知在肝纤维化期间积累的其他ECM蛋白（如IV型胶原、层粘连蛋白和纤维连接蛋白）的沉积在长hx2–/–肝脏()与WT肝脏相比(). 使用实时PCR进行的基因表达分析显示，I型胶原蛋白[胶原蛋白1α（I）]的表达水平增加了9倍，脯氨酰-4-羟化酶的表达增加了2.5倍（脯氨酸-4-羟化酶是导致胶原蛋白三螺旋稳定性增加的翻译后修饰的关键酶）与WT肝相比，突变肝(). 因此，Lhx2表达的缺失导致与肝纤维化相关的ECM蛋白的表达增加和逐渐积累，证实了肝纤维化中正在进行的纤维化过程长x2–/–胎儿肝脏。
细胞外基质蛋白沉积增加，细胞外基质相关基因表达增加长x2–/–胎儿肝脏。从E14.5 WT解剖的胎儿肝脏(A类)和长hx2–/–(B类)突变体中的胚胎在肝脏表面和肝叶之间显示出纤维状组织（箭头所示）。E14.5 WT的组织切片(C类,G公司,我、和K（K）)和长x2–/–(D类,H（H）,J型、和L（左）)胎肝和E12.5 WT(电子)和长x2–/–(F类)胎儿肝脏。用Gordon和Sweet的方法处理的切片，对网织蛋白纤维进行银染，以显示III型胶原纤维（如箭头所示C–F类). 抗胶原蛋白IV免疫染色切片(G公司和H（H），红色），抗层粘连蛋白(我和J型，红色）和抗纤维连接蛋白(K（K）和L（左），绿色）抗体。(M（M）)实时PCR分析比较E14.5 WT（黑条）和长x2–/–（灰色条）肝脏。数据以一式三份的一次实验的平均值表示。在另外两个独立制备的cDNA上进行的另外两个实验也获得了类似的结果（数据未显示）。P（P）I型胶原蛋白<0.0001，以及P（P）前羟化酶<0.005。误差线表示标准偏差。（比例尺指示1000μminA类和B类，最小30μC–F类，和50μminG–L.)
Lhx2中具有激活表型的HSC比例增加–/– 胎儿肝脏。HSC在肝纤维化的发病机制中起着核心作用。我们已经展示了(14)Lhx2在成人肝脏的HSC中表达。这里，我们显示Lhx2与HSC特异性标记结蛋白共存(20) ()证实Lhx2在HSC中也表达于胎儿肝脏。与WT肝相比，突变肝中结蛋白阳性细胞的比例显著增加()这与进行性肝纤维化期间HSC数量的增加相一致(1,2). 在成纤维过程中，HSC被激活，并通过表达ASMA和结蛋白获得类似肌纤维母细胞样细胞的表型(21,22). 与此数据一致，许多结蛋白阳性细胞也在突变肝脏中同时表达ASMA()而在WT肝脏中很少检测到这种模式()表明突变肝脏中至少有一个HSC亚群获得了活化HSC的表型。因此，活化HSC比例的增加，以及ECM蛋白在突变肝脏中沉积的增加，表明HSC的丢失长x2在发育中的HSC中的表达启动了类似于在肝纤维化中观察到的病理事件。
Lhx2在胎儿肝脏的HSC中表达，并且长x2–/–肝脏显示具有激活表型的HSC比例增加。WT的组织切片(A–D和G–I型)和长x2–/–(电子和J–L型)肝脏。E13.5 WT肝切片与Lhx2反义探针杂交的共焦显微镜观察(B类，红色），随后用抗结蛋白抗体进行免疫染色(A类，绿色）显示合并图像中黄色所示的许多细胞中结蛋白和Lhx2的共存(C类，箭头）。(D类和电子)E14.5 WT和突变肝脏切片分别用抗结蛋白（红色）和抗E-钙粘蛋白（绿色）抗体进行免疫染色，以显示星状细胞和内胚层细胞。(F类)WT和WT结蛋白阳性细胞相对比例的比较长x2–/–胎儿肝脏。抗结蛋白抗体免疫染色的E15.5 WT和突变肝脏切片的共焦显微镜(G公司,J型，绿色）和抗ASMA抗体(H（H）和K（K），红色）主要显示合并图中突变肝脏细胞中这些基因的共表达(我和L（左），黄色）。（比例尺指示30μminA–C和G–L和90μminD类和电子.)
HSC激活早期相关基因表达增加长hx2–/–胎儿肝脏。HSC激活伴随着基质蛋白酶活性的变化，导致肝脏ECM蛋白异常重塑，多肽生长因子表达上调。这两种改变都以直接和间接的方式刺激HSC激活(1,23). 活化的HSC是基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-3的关键来源，两者都能降解正常的肝窦周围基质(23). 基底膜成分的加速降解增加了ECM蛋白的合成和间质胶原的沉积，进而进一步激活正反馈回路中的HSC(1,24). 活化的HSC还可以通过上调金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）促进间质胶原蛋白的积累，TIMP抑制MMP-13（一种间质胶原酶）的活性(23). TIMP的上调也可能导致HSC对凋亡的抵抗力增加(25)这可能有助于肝纤维化中HSC的积聚。评估基质蛋白酶活性和细胞生长因子表达长x2–/–通过实时RT-PCR分析，我们比较了不同纤维化相关MMPs、TIMPs和生长因子的表达水平(). TIMP1和TIMP2的mRNA水平长x2–/–肝脏分别上调2次和4次。MMP-2和MMP-3在突变肝脏中分别上调了3倍和2倍，而MMP-13的表达水平没有改变，可能有助于间质胶原的积累。此外，血小板衍生生长因子在HSC激活早期是HSC的一种强有力的有丝分裂原，在突变肝脏中表现出4倍的上调，而细胞因子（如转化生长因子β1型和肿瘤坏死因子α）可能参与后期（所谓的永存）HSC激活(1,26)保持不变。这些数据表明长x2–/–肝脏也会发生许多典型的HSC活化和肝纤维化早期阶段的分子变化(1,2,23).
与活化HSC相关基因的相对表达水平分析。(A类)WT和突变肝脏的比较。对E14.5 WT（黑条）和长x2–/–（灰色条）肝脏。数据显示为三份典型实验的平均值。*,P（P）< 0.0001;**,P（P）< 0.001; 和***,P（P）= 0.03. 对独立cDNA制备的另外两个分析显示出类似的结果。血小板衍生生长因子；TGFβ1，转化生长因子β1型；肿瘤坏死因子α。(B类)用Lhx2 cDNA（灰色条）或载体对照（黑色条）转染的人HSC株LX-2的比较。数据以三组代表性实验的平均值表示。P（P）人类ASMA（hASMA）<0.005，以及P（P）人类I型胶原蛋白（h型胶原蛋白I）<0.01。误差线表示标准偏差。
人星形细胞系中Lhx2的表达下调激活特异性基因。观察到的表型长x2–/–胎肝表明Lhx2抑制和/或抑制HSC的激活。为了验证这个假设，我们将Lhx2 cDNA转染到人类HSC细胞系LX-2（这是一个显示HSC关键特征的细胞系；参考文献。27)并测量了与激活的HSC相关的两个基因[ASMA和胶原蛋白1α（I）]的表达水平的影响。这些基因是活化的HSC的可靠标记，并且在长x2–/–肝脏与WT肝脏的比较（参见，比较和数据未显示）。与空载体转染细胞相比，转染Lhx2的细胞显示ASMA和胶原1α（I）的表达分别下调62%和41%(). 因此，人类HSC系中Lhx2的表达导致至少一部分与活化HSC相关的基因表达下调。
变形的细胞组织长x2–/–胎儿肝脏。在纤维化和肝硬化的发展过程中，肝脏的三维结构通常会被破坏(1). 因此，ECM蛋白在长x2–/–肝脏也可能干扰胎儿肝脏的组织。为了解决这个问题，我们分析了不同胚胎阶段突变肝脏的ECM蛋白生成和细胞组织。我们观察到E11.5突变肝脏中IV型胶原沉积增加()突变体和WT肝脏内胚层细胞的形态或分布无明显差异(). 相反，来自E14.5胚胎的肝脏切片显示，与WT肝脏相比，突变肝脏的肝内内胚层严重紊乱()因为突变肝脏中的内胚层细胞形成了WT肝脏中不存在的导管结构(，另请参阅). 然而，这种缺陷是肝内内胚层特有的，因为在WT胚胎和突变胚胎之间，肝外胆道上皮的组织没有观察到明显的差异(). 在肝门区的突变肝脏中很容易发现纤维组织（比较)，大型容器周围（比较)整个肝脏呈纤维隔(). 肝窦系统的适当组织对肝功能很重要(9). 虽然在此阶段在WT肝脏中观察到正常的正弦网络()，内皮细胞在长x2突变的肝脏常与内胚层细胞聚集分离，形成丰富的管状结构，内腔扩张()表明正弦网络的异常组织。因此，突变肝脏中的肝内胚层和内皮细胞都显示出异常组织，ECM蛋白沉积的增加似乎先于异常组织。
ECM蛋白沉积的增加先于长x2–/–肝脏。E11.5 WT的横截面(A类和C类)和突变型(B类和D类)用抗E-钙粘蛋白抗体（绿色）对肝脏进行免疫染色，以显示成肝细胞和抗胶原蛋白IV抗体（红色）(A类和B类)或用成肝细胞/肝细胞特异性抗白蛋白抗体（棕色）进行免疫染色，然后用苏木精-伊红进行复染(C类和D类). E14.5 WT的横截面(电子,H（H）,J型,L（左）、和N个)和突变型(F类,G公司,我,K（K）,M（M）、和哦)肝脏。切片用成肝细胞/肝细胞特异性抗白蛋白抗体（棕色）进行免疫染色，随后用苏木精-伊红进行复染(E–I公司,L（左）、和M（M）)或肝外胆管特异性染色双色D凝集素(J型和K（K）或用血管内皮特异性抗PECAM抗体（红色）和肝母细胞特异性抗AFP抗体（绿色）进行免疫染色(N个和哦). 蛋白阳性内胚层细胞均匀分布于WT肝脏的整个肝叶(电子,H（H）、和L（左）)，而突变肝脏中的内胚层细胞分布不均(F类和我)形成导管结构(G公司，箭头）。纤维组织存在于肺门区长x2–/–肝脏(我，箭头），血管周围(M（M）)和整个肝脏的纤维隔(G公司，箭头）。突变的肝外胆道上皮似乎正常(K（K），箭头）胚胎与野生型相比(J型，箭头）胚胎。WT肝脏中形成正常的正弦网络(N个)而变异肝脏中可见管腔扩张的管状结构（箭头）(哦). dv，静脉导管。（比例尺指示30μminA类,B类,G公司、和L–O型; 最小100μC类,D类,H（H）、和我; 和500μmin电子,F类,J型、和K（K）.)
内胚层细胞长x2–/–胎儿肝脏显示出一种改变的基因表达模式。内胚层细胞形成的导管结构长x2–/–胎儿肝脏类似于肝硬化肝脏再生过程中经常观察到的类似结构，在显示大量坏死的肝脏中，以及在某些肝脏再生和肝癌发生的动物模型中(28–32). 据报道，这些导管结构包含表达成肝细胞/肝细胞特异性和胆管细胞（胆管细胞）特异性基因的细胞，因此，可能代表一种由称为“卵圆细胞”的双功能肝祖细胞介导的细胞对损伤/损伤的反应为了比较突变胎儿肝脏和再生成人肝脏中的导管结构，我们分析了突变肝脏中成肝细胞的基因表达谱。早期成肝细胞表达甲胎蛋白、白蛋白和低水平E-钙粘蛋白(33,34)而胆道谱系的早期细胞表达高水平的E-钙粘蛋白(35)和胆管特异性细胞角蛋白(34,36). E14.5突变肝脏的分析表明，突变肝脏中的成肝细胞高水平表达所有四个基因(). 相反，在WT肝脏中，很少有成肝细胞被胆道特异性抗细胞角蛋白抗体标记()这些细胞表达较低水平的E-钙粘蛋白()同时保持法新社和白蛋白(). 在E13.5也观察到突变肝脏中胆管细胞特异性细胞角蛋白的表达增加，但在此阶段之前没有观察到（数据未显示）。胆管结构似乎富含表达胆管特异性细胞角蛋白的细胞和高水平的E-钙粘蛋白除了肝母细胞/肝细胞特异性基因法新社和白蛋白因此，突变肝脏中的内胚层细胞在基因表达模式水平上与受损成人肝脏再生过程中观察到的导管结构相似。
突变肝脏中形成导管结构的内胚层细胞富含表达成肝细胞/肝细胞特异性和胆管细胞特异性基因的细胞。E14.5 WT的连续横截面(A类,C类,电子、和G公司)和一个变种人(B类,D类,F类、和H（H）)抗白蛋白抗体对肝脏的免疫染色(A类和B类，红色），抗E-钙粘蛋白抗体(C类和D类，绿色），抗AFP抗体(电子和F类，红色）或抗胆管细胞特异性细胞角蛋白抗体(G公司和H（H），红色）。内胚层细胞簇长x2–/–肝脏强烈表达所有四种标志物(B类,D类,F类、和H（H）)而WT肝中的内胚层细胞表达较低水平的E-钙粘蛋白(C类)少数WT内胚层细胞表达胆管细胞特异性细胞角蛋白(G公司). （比例尺指示主图像中的100μm和30μmin插图.)
讨论
我们已经证明，胚胎发育期间HSC中Lhx2表达的缺失会导致进行性和自发性肝纤维化。突变的肝脏含有更多表达结蛋白的间充质细胞，其中许多还与ASMA共存，因此类似于肝纤维化病理过程中所描述的活化HSC(11).长hx2–/–肝脏表现出与成人肝纤维化相关的ECM蛋白的表达水平和积累增加，包括I型、III型和IV型胶原，以及层粘连蛋白和纤维连接蛋白(10). 此外，与先前报道的数据一致，参与HSC激活、异常ECM重塑、过度ECM沉积和胶原稳定的基因（如血小板衍生生长因子、MMP-2（明胶酶A）、MMP-3（基质溶素-1）、TIMP1、TIMP2和脯氨酸-4-羟化酶）在长hx2–/–肝脏。在成人肝纤维化过程中，富含间质胶原的ECM逐渐取代正常的窦周ECM。ECM成分和数量的这种变化扰乱了肝脏的细胞组织，并且在发育中的肝脏中也观察到了这一过程长x2–/–胚胎。总的来说，我们的数据表明Lhx2是HSC激活和纤维化形成的重要负调控因子，这意味着长x2在人类和动物肝纤维化模型中，发育中HSC的表达模拟了成人肝纤维化中观察到的HSC激活过程。转染Lhx2 cDNA后，与激活的HSC相关的基因在人HSC株LX-2中的下调表达支持了这一观点。
导管样外观以及突变胎儿肝脏内胚层细胞的基因表达模式显示出与受损成人肝脏再生反应期间观察到的内胚层结构惊人的相似性。由于成人肝脏中的这些结构由表达成肝细胞/肝细胞特异性和胆管细胞特异性基因的细胞组成，因此它们被认为是卵圆细胞介导的再生反应(28–32). 肝再生的动物模型表明，活化的HSC与这些导管结构密切相关(31)并且很可能在成人肝脏的再生反应中发挥作用(37). 激活的HSC在长hx2–/–肝脏表明，这些细胞在形成和/或维持胎儿肝脏中类似结构中发挥作用。与卵圆细胞类似，胎儿肝脏中的早期成肝细胞具有双功能，可以生成肝细胞和胆管细胞(38,39). 因此，HSC中Lhx2的缺乏似乎为胎儿肝脏中的早期成肝细胞提供了信号，促进了类似于成人肝脏的再生反应。虽然Lhx2在成人肝脏再生反应期间在HSC中的作用尚待阐明，但我们的数据表明，在发育中的HSC中Lh x2的表达对于胚胎发育期间正确的肝脏形态发生非常重要。此外长x2–/–表型原则上可被视为先天性综合征。然而，纤维形成过程以及内胚层的组织，与成人肝脏的创伤愈合反应更具可比性。这一观察并不排除先天性肝纤维化的某些亚群可能是由Lhx2或Lhx2-相关通路的突变引起的，因为先天性肝纤维变性是一组遗传上不同的疾病(三).
阐明介导HSC活化的分子机制对于理解成纤维过程很重要。然而，大多数研究都集中在HSC激活后上调的基因上(40–43). 我们的发现可能代表了寻找介导HSC激活的基因的范式转变，因为这意味着HSC中Lhx2的下调导致激活。我们之前已经证明Lhx2在成年小鼠的HSC中表达(14)表明成人肝脏中Lhx2失活导致类似表型。虽然Lhx2在人类HSC中的假定功能尚待阐明，但转染Lhx2cDNA的人类HSC细胞系中纤维素酶相关基因的下调表明，Lhx2对人类的成纤维过程也有负调控作用。阐明Lhx2表达缺乏激活HSC从而促进纤维化形成的分子机制，可以为治疗和预防肝纤维化提供见解和线索。总之，发育中HSC缺乏Lhx2导致了一系列病理事件，这些事件与成人肝脏的创伤愈合反应具有许多特征。因此长x2–/–小鼠胚胎可以提供一个可重复的模型系统来研究导致肝纤维化的早期病理事件。
致谢
我们感谢Thomas Edlund博士对这份手稿的批评性阅读，感谢Nary Veal、Carlos Alvarez和Steven Yea的技术援助。这项工作得到了瑞典癌症协会、Västerbotten县拨款、乌梅大学生物技术基金、国立卫生研究院拨款DK56621（给S.L.F.）和费尔德纤维组织病研究基金（给S.F.）的支持。L.C.得到托拜厄斯基金会和欧洲联盟区域基金的赠款支持（目标1）。
笔记
本文直接（第二轨道）提交给PNAS办公室。
缩写：AFP，α-甲胎蛋白；α-平滑肌肌动蛋白；ECM、细胞外基质；电子n个，胚胎期n个; 肝星状细胞；基质金属蛋白酶；金属蛋白酶组织抑制剂。
工具书类
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