美国国家科学院院刊。1991年6月1日；88(11): 4991–4995.
氨酰-tRNA在体内蛋白质合成的通道。
康涅狄格大学健康中心生物化学系，法明顿06030。
摘要
通道作用是代谢中间产物在途径中从一种酶直接转移到另一种酶，作为细胞过程高效性的一种解释，受到了越来越多的关注。蛋白质生物合成机制的已知结构组织，以及最近关于氨酰-tRNAs可能被传导的建议，使我们设计了一种直接测试这种可能性的方法。采用电穿孔技术，建立了将氨酰基tRNA导入中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的条件。我们通过自由[14C]氨基酸和[3H]氨酰-tRNAs的各种组合的共电穿孔表明，尽管自由氨基酸是蛋白质合成的有效前体，但外源性氨酰-tRNA的利用率很低。添加的氨酰-tRNAs不能并入蛋白质中，这并不是因为它们从细胞中泄漏、不稳定或在电穿孔过程中受损。此外，与完整细胞的研究结果相反，CHO细胞提取物将游离氨基酸和氨酰-tRNAs结合到蛋白质中，效率相似。基于这些观察结果，我们得出结论，外源性氨酰-tRNAs不能作为蛋白质合成的前体是由于完整细胞的结构组织导致了体内该底物的通道化。因此，我们提出，内生合成的氨酰基-tRNA直接从氨酰基-tRNA合成酶转移到延伸因子到核糖体，而不会分解到细胞液中，因此，排除了外源引入分子的使用。
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