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图4

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表达TD-IκBα的EpRas细胞不能进行EMT,而CA–IKK-2的表达在缺乏TGF-β的情况下驱动EMT(多孔支架分析)。表达空载体对照、TD-IκBα或CA–IKK-2的EpRas细胞在有(+)或无(-)TGF-β(5 ng/ml;第2-7天)的多孔支架上培养7天。(一个)显示培养细胞的照片;带有纺锤状间充质细胞的区域用红色虚线表示。原始放大倍数,×100。(B类)量化由间充质干细胞覆盖的多孔支架上的面积,作为相对于粘附细胞覆盖的总面积的百分比(培养物显示为一个; 第6天)。(C类)表达空载体、TD-IκBα或CA–IKK-2且未经TGF-β处理的EpRas细胞中的E-cadherin水平通过E-cadherin-特异性抗体的Western blot分析测定(E-Cad;上面板)。随后用p65/RelA特异性抗体(下面板)剥离和重制印迹,以证明负载量相等。(D类)如图所示,在有或无TGF-β(5 ng/ml;第2-7天)的情况下,将细胞培养在多孔支架上7天。如方法所述,用DAPI反染DNA(蓝色)对细胞进行E-cadherin或vimentin免疫染色(红色)。间充质细胞、E-钙粘蛋白阴性细胞和波形蛋白阳性细胞的区域用白色虚线勾勒出来,对应于一个(红色虚线)。原始放大倍数,×400。

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