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科学代表。2016; 6: 20201.
2016年2月1日在线发布。 数字对象标识：10.1038/srep20201
预防性维修识别码：项目经理4735332
PMID：26830657

谷氨酸能轴突源性BDNF控制小脑GABA能突触分化

阿尔伯特·I·陈,a、，1,2,三，4 科林藏,1 埃利泽·马西利亚,5和路易斯·赖查德1
作者信息 文章注释 版权和许可信息 PMC免责声明

摘要

为了研究抑制回路构建的调节机制，我们检测了脑源性神经营养因子（BDNF）在小鼠小脑皮层GABA能抑制性突触组装中的作用。我们发现，在小脑内，BDNF表达细胞局限于内颗粒层（IGL），但BDNF蛋白存在于来源于小脑外部细胞的苔藓纤维中。与删除TrkB公司，BDNF的同源受体，缺失Bdnf公司单独来自小脑细胞体并没有干扰由高尔基细胞轴突在IGL内的颗粒细胞树突上形成的GABA能突触的突触前或突触后成分的定位。相反，我们发现来源于兴奋性苔藓纤维末梢的BDNF控制着它们的分化。因此，我们的研究结果表明，小脑BDNF主要来源于兴奋性神经元-前脑核/脊髓神经元，这些神经元产生苔藓纤维，并通过轴突释放促进GABA能突触的形成。因此，在小脑内，BDNF优先定位于轴突增强了BDNF促进GABA能突触分化的特异性。

神经营养因子信号传导对神经系统的发育至关重要，神经营养素或其受体的缺失与发育和行为障碍有关，包括抑郁症、双相情感障碍、成瘾、焦虑、肥胖和许多神经变性疾病1特别是，脑源性神经营养因子（BDNF）、BDNF原激素（proBDNF2,三,4,5,6,7,8TrkB及其配体调节小脑发育的许多方面，包括颗粒细胞存活和迁移、攀爬纤维神经支配、抑制性突触形成/维持和突触可塑性9,10,11,12,13,14BDNF促进颗粒细胞从外部颗粒层向内部颗粒层迁移15BDNF增强Purkinje细胞对GABA的反应10,16并通过促进NMDA受体亚单位的转换来控制颗粒细胞突触的成熟17因此，BDNF和TrkB在小脑皮质内的细胞构筑和连接的组织中起着重要作用，是小脑功能的关键决定因素。

虽然TrkB可以被NT4激活，在某些情况下，也可以被NT3激活，但BDNF是大脑中TrkB最重要的配体7BDNF的转录、翻译、加工和分泌在一定程度上受到突触活动的控制4,5,18,19,20,21; TrkB的表面表达和BDNF结合后的信号传导通过膜转运过程控制，而膜转运过程也部分通过突触活动控制22,23缺乏CAPS2（一种促进活性依赖性BDNF释放的MUNC13同源物）的小鼠BDNF的释放和小脑发育均受损13,14,24表明BDNF是活动刺激小脑发育和回路成熟的重要效应器。在小脑内，BDNF和TrkB在出生后高水平表达，包括突触发生的主要时期12,25BDNF在小脑皮质内颗粒层和小脑深部核内高水平表达，而TrkB在浦肯野和颗粒细胞、中间神经元和胶质细胞中表达26,27.体内和在体外研究表明，外源性BDNF促进抑制性突触发生，而抑制BDNF结合导致小脑和海马抑制性突触体减少28,29我们之前证明，TrkB在GABA能中间神经元及其靶细胞内起作用，调节抑制性突触的形成和维持，以及与这些突触相关的蛋白质和细胞器的定位9,12然而，在这些研究中，参与控制小脑皮质内GABA能突触的BDNF的来源尚未确定。此外，BDNF在表达BDNF的细胞类型中的亚细胞定位以及BDNF是否通过轴突和/或树突发挥其活性仍存在争议14,18,19,30,31.

结果

Bdnf公司表达局限于内部颗粒层，蛋白定位于颗粒细胞轴突和苔藓纤维末端

为了评估BDNF信号在调节小脑GABA能突触中的作用，我们首先检测了Bdnf公司mRNA和BDNF蛋白。与其他人的研究一致，我们观察到Bdnf公司在小脑内颗粒层检测到lacZ敲除15,32(图1A). 在分子层、Purkinje细胞层或白质层未检测到LacZ表达(图1A). 我们使用了先前描述的针对BDNF成熟结构域的小鼠单克隆抗BDNF抗体（Mab#9）31表明BDNF蛋白分布更广，定位于小脑皮质的分子层、浦肯野细胞层和内颗粒层(图1B-C)与其他人最近的观察结果一致14为了确认BDNF抗体的特异性，我们使用传统的Bdnf公司敲除小鼠作为阴性对照。正如预期的那样，缺乏BDNF蛋白的小鼠小脑中似乎没有BDNF蛋白质Bdnf公司(图1C).

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Bdnf公司由内颗粒层的细胞表达，该蛋白定位于小脑皮层。

(A类)通过从三个P30获得的小脑矢状切面中的β-半乳糖苷酶活性评估BDNF的表达Bdnf公司拉奇老鼠32LacZ表达仅在小脑矢状面切片中的内部颗粒层（IGL）中检测到Bdnf公司lacZ公司老鼠。(B、 C类)使用抗成熟BDNF的单克隆小鼠抗体（Mab#9），我们检测了BDNF蛋白在三个P14中的定位Bdnf公司−/−小鼠与三只对照小鼠进行比较。(B类)用柠檬酸钠回收抗原后，BDNF蛋白定位于分子层、浦肯野细胞层和内颗粒层。(C类)缺乏BDNF的小鼠小脑皮层的所有层都丢失了BDNFBdnf公司. (D–F型)BDNF（红色，E）与GAD67（蓝色，F）进行比较，GAD67标记高尔基细胞终末，并且似乎没有与高尔基细胞轴突共定位（黄色，F）。(G–I型)当BDNF（红色，G）与vGluT1比较时+苔藓纤维末端（蓝色，H），BDNF与苔藓光纤末端（黄色，I）广泛共定位。(J–L型)将BDNF（红色，J）与YFP（蓝色，K）进行比较，YFP标记了胸腺1：：YFP小鼠。BDNF似乎不与颗粒细胞体或树突（黄色，L）共定位。(M（M）)细胞型特异性标记物上BDNF面积的定量显示GAD67的4.33±0.75%+高尔基细胞轴突含有BDNF，vGluT1的43.08±3.9%+苔藓纤维含有BDNF，占YFP的4.58±0.84%+颗粒细胞体/树突含有BDNF。四只P21野生型小鼠和四只P22小鼠的小脑您的1：：YFP小鼠用于D-M分析。比例尺=500μM（A），20μM（B-P）。*从这里开始，所有统计数据均采用Mann-Whitney U检验，误差表示为平均值的标准误差。

为了更详细地分析BDNF蛋白的表达，我们使用免疫组织化学方法比较了BDNF和细胞型特异性分子标记的表达。我们观察到在内部颗粒层中，很少或没有BDNF定位于高尔基细胞轴突(图1D–F). 相反，在vGluT1上发现大量BDNF+苔藓纤维端子（图G-I）。此外，在颗粒细胞的胞体或树突中发现相对较少的BDNF，但可检测到数量(图1J–L). BDNF在特定细胞隔室的面积覆盖率的量化表明，BDNF蛋白与高尔基细胞轴突或颗粒细胞树突/胞体的面积重叠不到5%。相反，BDNF蛋白与vGluT1所占面积的约43%重叠+内部颗粒层中的苔藓纤维末端(图1M). 考虑到这些研究所用切片的厚度为15–25μm，BDNF与高尔基细胞轴突或颗粒细胞树突/体的低重叠可能反映出这些结构外存在BDNF蛋白。

为了确认BDNF蛋白的定位，在用BDNF抗体标记并用二级抗体包被的金粒子进行可视化后，检查内部颗粒层超薄切片的电子显微照片。小脑肾小球和肾小球的主要成分是根据前面描述的典型形态学特征进行鉴定的9,33,34我们发现苔藓纤维末端的BDNF密度最高（9.41±1.1粒子/μm2)高尔基细胞轴突内密度较低（1.32±0.31粒子/μm2) (图2A–F). 只有低密度（4.08±0.73粒子/μm2)颗粒细胞树突中存在金颗粒(图2B，F). 这些结果与图1总之，数据表明BDNF主要定位于苔藓纤维终末，高尔基细胞轴突和颗粒细胞树突中的BDNF含量低得多。因为颗粒细胞和高尔基细胞都表达TrkB12，这也可能是受体结合和内吞作用的结果。我们的数据还表明，即使颗粒细胞表达Bdnf公司颗粒细胞内表达的BDNF基因主要指向轴突，而不是树突（另见参考文献。14). 这与BDNF优先定位于轴突相一致，而不是兴奋性海马和皮层神经元的树突6,30,31最后，IGL中BDNF蛋白的最重要来源似乎是苔藓纤维的轴突和末端。

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内颗粒层BDNF的免疫金颗粒主要位于苔藓纤维末端。

(A–E)我们在用BDNF-Mab#9抗体进行免疫金标记后，从四只P60野生型小鼠（放大11500倍，单个2μm切片）获得的20张电子显微照片中分析了单个肾小球。(A–B)典型肾小球的单个成分(A类)颜色编码（B，苔藓纤维=蓝色，颗粒细胞树突=红色，高尔基细胞末端=绿色）。(C–E类)区域对应于虚线框。大多数金颗粒聚集体存在于苔藓纤维末端（蓝色、B、C），而一些金颗粒存在于颗粒细胞树突（红色、B、D）。高尔基细胞轴突（绿色、B、E）上发现少量金簇。(F类)每微米金颗粒数量的量化2表明苔藓纤维中的金颗粒比颗粒细胞树突中的多2.3倍，高尔基细胞轴突中的金粒子多7.1倍（MF=9.41±1.1/μm2，颗粒细胞=4.08±0.73/μm2，高尔基细胞轴突=1.32±0.31/μm2). 比例尺=2μm。

BDNF缺失对小脑GABA能突触蛋白定位的影响

接下来，我们研究了BDNF缺失对小脑内颗粒层GABA能突触蛋白定位的影响。在P14常规Bdnf公司−/−我们观察到，在小鼠中，凝胶蛋白（一种GABA能突触的突触后标记物）的定位降低了约46%，但在发育中的IGL中GAD65或GAD67（GABA能神经元突触前标记物）定位没有受损(图3A-F; 数据未显示）。凝胶蛋白定位的减少导致IGL抑制性突触处GAD67和凝胶蛋白同位减少约3.5倍(图3A-F; 数据未显示）。在之前的工作中，我们证明了TrkB的缺失不会影响小脑内卟啉的总表达9因此，BDNF的缺失，类似于TrkB的缺失，可能控制了突触上的卟啉定位，但不控制其总表达水平。在这个发育阶段（P14），GAD67的定位在缺乏TrkB公司在小脑中9.按照常规Bdnf公司−/−小白鼠出生后2周左右死亡，我们还没有检查年龄较大的小脑。然而，我们已经删除了Bdnf公司更具体地说，在小脑前体中，使用重量1：：Cre35并惊讶地发现，这些小鼠在IGL的抑制性突触中GAD67和格氏蛋白定位正常(图3G–L). GAD67与卟啉的同位(图3M–R)与对照组相比，缺乏BDNF的小鼠也具有可比性。删除Bdnf公司特别是在颗粒细胞中使用mα6：：Cre（数据未显示）。这些观察结果表明，在IGL内，由于存在其他能够激活TrkB（例如NT3、NT4）的神经营养素，BDNF可以得到补偿，或者BDNF由位于小脑外的细胞提供。

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完全删除与特定删除的后果Bdnf公司GABA能突触蛋白的表达以及这些蛋白在内部颗粒层中的接触数量。

(A–F)我们分析了P14常规基因中突触前和突触后GABA能突触蛋白的定位Bdnf公司−/−老鼠。(A、 B类)vGluT1周围GAD67（绿色）的表达+苔藓纤维（蓝色）与Bdnf公司−/−老鼠(B类)与对照组相比(A类). (D、 E类)然而，卟啉（红色）的表达在Bdnf公司−/−老鼠(E类)与对照组相比(天). (C、 F类)GAD67:vGluT1和gephyrin:vGlu T1表达面积比的量化Bdnf公司−/−小鼠（GAD67:2.88±0.79；凝胶蛋白：1.07±0.37）与对照组（GAD67:2.95±0.48，第页 = 0.557; 卟啉：3.4±0.39，第页 < 0.001). (G–L)删除Bdnf公司在小脑中不影响GAD67（绿色）或gephylin（红色）在P21 IGL中的定位重量1：：Cre；Bdnf公司佛罗里达州/佛罗里达州老鼠(G、 J)与对照组相比(A、 D类). (一、 L（左）)GAD67覆盖范围的量化(我)和凝胶蛋白表达(L（左）)控制中（GAD67:25.1±0.9×104; 卟啉：8.2±0.5×104)和重量1：：Cre；Bdnf公司飞行/飞行小鼠（GAD67:26.2±0.8，第页 = 0.386; 卟啉：7.4±0.4×104,第页 = 0.297). (M–R（M–R）)同样，小脑中BDNF的丢失并不影响P21的IGL中GAD67点上发现的卟啉接触的数量重量1：：Cre；Bdnf公司飞行/飞行老鼠(N、 问)或与对照组相比，在格氏菌斑上发现的GAD67触点数量(M、 P（P）). (O、 R（右）)量化对照组中GAD67触点的数量（一个GAD67点上的卟啉点数量）和卟啉触点的数量2; 卟啉接触：14.1±0.7×102)和重量1：：Cre；Bdnf公司飞行/飞行小鼠（GAD67触点：2.77±0.02×102,第页 = 0.863; 卟啉接触：15.1±0.7×102,第页 = 0.340). 针对所描述的每个基因型，至少分析了四只小鼠。比例尺=10μm。*从这里，方框图包含下限和上限（“胡须”），1标准 和3第个 数据集的四分位（方框边缘）、中间值（白条）、平均值（白点）和离群值（黑点）。

苔藓纤维源性BDNF调节GABA能突触蛋白在内颗粒层的定位

除了颗粒细胞外，BDNF还由小脑外产生苔藓纤维的神经元表达36。为了探讨苔藓纤维是BDNF的来源的可能性，BDNF控制格夫林在高尔基细胞-颗粒细胞GABA能突触的定位，我们使用了从内源性Cre表达Cre的小鼠嘘基因座37它介导神经元的重组，从而产生小脑苔藓纤维末端的子集(图4A). 来自ROSA公司：：YFP报告基因用于从重组的神经元中鉴定苔藓纤维。IGL中只有26±3%的苔藓纤维被重组嘘：：Cre小鼠(图4A; 数据未显示）。苔藓纤维终末在小叶I-V中重组，但在小叶VI-IX中未重组(图4B-E). 正如预期的那样，使用抗BDNF抗体的免疫组织化学分析显示嘘：：Cre有效删除Bdnf公司以及苔藓纤维中的ROSA位点(图4F–I).

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嘘：：Cre小鼠在源自叛乱前核和/或脊髓神经元的苔藓纤维亚群中重组。

(A类)在第21页，嘘：：Cre小鼠选择性地促进产生苔藓纤维的神经元亚群中的重组，通过YFP表达评估，使用ROSA公司：：ΦYFP报告基因。Φ表示loxP-STOP-loxP盒。用YFP对vGluT1表达进行克隆化+P60中的苔藓纤维（绿色）嘘：：Cre；ROSA公司：：ΦYFP小鼠表明重组发生在苔藓纤维（黄色）的子集中。(B、 C类)钙调素（蓝色）在I小叶V小叶中大多不表达(B类)主要见于小叶VI-小叶X(C类). (D、 E类)与vGluT1共定位的YFP（绿色）的表达主要见于I小叶V小叶(天)，但不在小叶VI-小叶IX中(E类)在P60中嘘：：Cre；ROSA公司：：ΦYFP小鼠。比例尺=25μm(A类)，10微米(B–E类). (F–I型)嘘：：Cre小鼠有效地介导BDNF的缺失嘘：：Cre；ROSA公司：：ΦYFP；Bdnf公司飞行/飞行老鼠。BDNF（红色）存在于嘘：：Cre；ROSA公司：：ΦYFP小鼠(F、 G公司)，但在的苔藓纤维（蓝色）中不存在嘘：：克里；ROSA公司：：ΦYFP；Bdnf公司飞行/飞行老鼠(H、 我). 对每个基因型的三只小鼠进行了分析。比例尺=50μm(A类)，10微米(B–I类). Φ表示loxP-STOP-loxP盒。

结果表明，删除Bdnf公司来自YFP+苔藓纤维并没有减少GAD67在GABA能突触的定位，但确实减少了P21蛋白的突触定位嘘：：Cre；Bdnf公司飞行/飞行;ROSA公司：：YFP小鼠(图4A-F). GAD67:vGluT1表达的平均面积比在嘘：：Cre；Bdnf公司飞行/飞行;ROSA公司：：YFP小鼠和对照(图4C)，但格氏蛋白：vGluT1的平均面积比在嘘：：Cre；Bdnf公司飞行/飞行;ROSA公司：：YFP小鼠与对照组比较(图4F). BDNF的需求在空间上受到限制，因为凝胶蛋白定位在来自未重组神经元的苔藓纤维周围是正常的(图4G–L).

有趣的是，在缺乏BDNF的苔藓纤维中，囊泡谷氨酸转运体vGluT1的表达也降低(图5J–K)与对照组相比(图5G–H). 我们没有进一步进行这一观察，以确定这是否是一种细胞自主效应，或是否反映了脑桥和后脑中这些神经元的细胞体和树突的神经支配的改变。

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GABA能突触的突触后分化依赖于苔藓纤维衍生的BDNF信号。

为了探讨BDNF来源于小脑外的可能性，我们从苔藓纤维的一个子集中删除了BDNF，并分析了IGL中苔藓光纤末端周围的GABA能突触蛋白。(A–F)YFP的表达标志着来自重组神经元的苔藓纤维终末。YFP中BDNF的损失+苔藓纤维末端不影响P21 IGL中GAD67（绿色）的定位嘘：：Cre；Bdnf公司飞行/飞行;ROSA公司：：ΦYFP小鼠（Bi，Bii）与对照组（Ai，Aii）的比较。然而，YFP中BDNF的损失+苔藓纤维末端导致P21的IGL中的卟啉（红色）定位降低嘘：：克里；Bdnf公司飞行/飞行;ROSA公司：：与对照组（Di，Dii）相比，YFP小鼠（Ei，Eii）。(C、 F类)GAD67:YFP面积比的量化(C类)和格氏蛋白：YFP表达的面积比(F类)控制中（GAD67:0.89±0.09；卟啉：0.77±0.05）和嘘：：Cre；Bdnf公司飞行/飞行;ROSA公司：：ΦYFP小鼠（GAD67:0.97±0.06，第页 = 0.666; 卟啉：0.36±0.05，第页 < 0.001). (G–H（G–H）)vGluT1周围的卟啉（红色）在YFP之间的定位+苔藓纤维（茶色）和未重组YFP-苔藓纤维（绿色）在对照组小鼠中具有可比性。(我)P21中gephyrin:vGluT1表达面积比的量化嘘：：Cre；Bdnf公司fll（飞行高度层）+;ROSA公司：：ΦYFP小鼠（YFP-苔藓纤维=0.67±0.01；YFP公司+苔藓纤维=0.62±0.01，第页 = 0.222). (J、 K（K）)然而，重组YFP中围绕vGluT1的凝胶蛋白定位降低+苔藓纤维（蓝色/青色）与未重组YFP的比较-苔藓纤维亚群中缺乏BDNF的小鼠的苔藓光纤（绿色）。(L（左）)P21中gephyrin:vGluT1表达面积比的量化嘘：：Cre；Bdnf公司fllfl公司;ROSA公司：：ΦYFP小鼠（YFP-苔藓纤维=0.84±0.02；YFP公司+苔藓纤维=0.44±0.01，第页 < 0.001). 每个基因型分析了四只以上的小鼠。比例尺=10μm。

为了探讨苔藓纤维对IGL中GABA能突触形成的影响，我们检测了培养自P14-21的小脑片在体外并将其与5只小鼠急性制备的P21切片进行比较。毫不奇怪，失聪的小脑切片培养了7天在体外（DIV）显示vGluT1显著降低+与年龄匹配的对照组相比的表达(图6A–D，F–I）。GAD67周围颗粒细胞树突的定位在培养切片和对照切片之间具有可比性，但与P21对照切片相比，培养切片中格夫林的定位降低了~69%(图6A–J). 总之，这些发现表明，需要苔藓纤维的存在来直接定位突触后支架蛋白——凝胶蛋白，可能是因为苔藓光纤是传递BDNF所必需的。

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培养小脑片中苔藓纤维终末的丢失扰乱了突触后分化。

为了评估是否存在苔藓纤维或苔藓光纤衍生的因子调节GABA能突触分化，我们从P14小鼠制作了小脑切片并培养了切片在体外一周。(A–D、F–I)小脑片培养在体外与年龄匹配的对照切片（A、B、F、G、白色箭头）相比，一周内内颗粒层中vGluT1+苔藓纤维（蓝色）较少（C、D、H、I、白色箭头所示）。在“去分化”的小脑切片中，GAD67（红色）的定位在颗粒细胞树突周围保持正常(C、 D类)与对照组相比(A、 B类). 然而，与对照组相比，“失神经”小脑薄片（H，I）中卟啉（红色）的定位显著降低(F、 G公司). (E、 J型)量化“失神经”小脑片中GAD67:YFP和gephylin:YFP-表达的面积比（GAD67:2.88±0.79；凝胶蛋白：1.07±0.37）与对照切片（GAD67:2.95±0.48，第页 = 0.557; 卟啉：3.4±0.39，第页 < 0.001). 对三只小鼠的至少四片切片进行每种情况的分析。比例尺=20μm。

在初级小脑颗粒细胞中添加重组BDNF促进关键突触后GABA能蛋白的聚集

为了探索可能在突触后分化中介导BDNF活性的潜在效应蛋白，我们评估了在培养的小脑颗粒细胞中添加重组人BDNF的后果。我们之前的研究表明，小脑中细胞粘附分子Contactin-1的定位依赖于TrkB9和其他研究表明，BDNF控制着Contactin-1向海马神经元细胞表面的移位38我们首先检测了关键突触后GABA能蛋白的表达，即GABA的α6亚单位A类培养8天的P8幼崽小脑颗粒细胞中的受体在体外我们用20 ng重组BDNF处理培养的神经元5天，从3天开始在体外我们观察到GABA的表达增加了约2.1倍A类经BDNF处理的颗粒细胞中Rα6亚单位的蛋白表达强度增加8%(图7A–J). 接下来我们检测了Contactin-1的表达，并观察到MAP2上Contactin-1~1.5倍的增加+Tau的颗粒细胞部分和Contactin-1增加约2.4倍+BDNF处理的培养物中颗粒细胞的部分(图7K–T). 与这一发现相一致，我们之前的研究表明，Contactin-1的缺失导致内颗粒层中定位突触后GABA能蛋白的减少9总之，我们提供的证据表明，BDNF促进关键GABA能突触后蛋白的定位，并支持Contactin-1在小脑GABA能突触的组装和维持中的重要性 .

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外源性BDNF增加GABAα6亚单位的表达A类受体和接触蛋白-1。

(A–J)在原代小脑颗粒细胞培养中添加重组BDNF促进GABAα6亚单位的表达A类受体。(A、 F类)小脑颗粒细胞用vGluT1（蓝色）标记，GABA的表达A类Rα6亚单位显示为红色。添加BDNF后，vGluT1的表达没有明显差异(F、 G公司)与对照组相比(A、 B类). 然而，GABA的表达A类与对照组（C，Di，Dii）相比，培养物（H，Ii，Iii）中BDNF处理5天后，Rα6亚单位显著增加。(E类)GABA区域覆盖的量化A类在对照组（0.23±0.13）和BDNF治疗后培养组（0.49±0.17，第页 < 0.001). (J)GABA强度的量化A类BDNF治疗后对照组（155±13）和培养组（168±9.5，第页 < 0.01). (K–T公司)BDNF治疗后评估颗粒细胞树突（MAP2，green，K，P）和轴突（Tau，blue，K，P）上Contactin-1的表达。加入BDNF后，MAP2的表达没有明显差异(问)与对照组相比(L（左）)尽管添加BDNF后Tau的表达更具点状(R（右）)与对照组相比(M（M）). 然而，BDNF处理后，颗粒细胞树突和轴突上Contactin-1的表达显著增加(S公司)与对照组相比(N个). (O（运行）)BDNF治疗后，对照组（0.61±0.19）和培养组（0.91±0.23，第页 < 0.001). (T型)BDNF治疗后，对照组（0.39±0.15）和培养组（0.92±0.28，第页 < 0.001). 比例尺=50μm。

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BDNF缺失对GABA能突触蛋白定位的影响概述。

(A类)小脑肾小球由苔藓纤维终末、颗粒细胞树突和高尔基细胞轴突组成。GAD67（绿色）是一种定位于高尔基体细胞轴突末端的突触前GABA能蛋白，与定位于颗粒细胞树突的突触后GABA能蛋白质凝胶蛋白（红色）相邻。(B类)删除BDNF公司在小脑中，GAD67或凝胶蛋白在小脑肾小球中的定位没有任何变化。(C、 D类)然而，删除BDNF公司长满苔藓的纤维(C类)或常规删除BDNF公司(天)导致格氏蛋白的定位降低，而对GAD67的定位没有任何影响。

讨论

干扰BDNF表达导致GABA能突触的发育和功能缺陷23,39,40尽管有充分的证据表明颗粒细胞表达的BDNF在谷氨酸能平行纤维GABA能浦肯野细胞树突突触中对颗粒细胞前体迁移和突触小泡组织的作用15,41，我们发现Bdnf公司颗粒细胞或小脑内所有细胞的GABA能突触蛋白在颗粒层内的定位没有受到影响（总结如下图8). 有趣的是，我们发现，苔藓纤维亚群中BDNF的丢失导致了卟啉突触定位的减少，而不影响GAD65/67的定位(图8). 高尔基细胞支配多个肾小球33GAD65/67定位可能不受影响，因为高尔基细胞从苔藓纤维表达BDNF的邻近肾小球获得营养性BDNF支持。自Bdnf公司仅从26%的苔藓纤维终端中删除嘘：：本研究中使用的Cre，单个高尔基细胞似乎不太可能完全失去苔藓纤维来源的BDNF。因此，BDNF可能通过TrkB的局部激活来控制突触后分化，而BDNF通过更全面的机制来控制突触前分化。与先前的观察结果一致，我们的数据表明颗粒细胞是小脑皮质内表达BDNF的主要细胞类型，可能是唯一的细胞类型。此外，与最近的报告类似14我们发现BDNF优先定位于轴突，而不是颗粒细胞的树突。颗粒细胞轴突BDNF控制GABA能星状细胞和篮状细胞与分子层中浦肯野细胞树突形成的突触前和突触后特化的并置。这一观察结果与我们之前的工作一致，该工作证明TrkB在促进分子层GABA能突触形成中具有重要作用12.

一些机制可以解释颗粒细胞与苔藓纤维源性BDNF在组织小脑回路中的特异性。BDNF定位受mRNA转运、蛋白并入致密核小泡以及致密核小囊的转运和定位控制14,18,20它的分泌受sortilin、CAPS1/2和其他控制其并入致密核心囊泡的蛋白质、调节原BDNF处理的蛋白酶以及调节致密核心囊胞吐出的蛋白质（如联蛋白、CAPS2和突触凝集素）的调节5,14,19,20,24,40处理proBDNF使其成熟对于TrkB激活至关重要，因为proBDNF-只激活p75NTR，而不激活TrkB，从而导致明显的后果，如轴突修剪和LTD42,43特别有趣的是，最近的研究表明CAPS2优先定位于轴突，对轴突定位和BDNF的正常胞吐至关重要14CAPS2的p150粘附相互作用域中第3外显子的缺失阻止CAPS2和BDNF定位于轴突，导致BDNF分泌不足14在少数自闭症患者和表达缺乏外显子CAPS2的小鼠中，已发现CAPS2转录物缺失外显子3，提出一种有趣的可能性，即本文所述的BDNF组织中枢神经回路的特异性对于组织中枢神经系统其他部位的神经回路以及表达自闭症异常的人类认知和社会行为非常重要14,44.

BDNF通过促进大脑不同区域如皮层、海马和纹状体中树突状棘的形成，控制中枢神经系统兴奋性突触的突触后分化4,8,45由于BDNF是神经元活动的结果，BDNF的分泌是控制树突状棘对突触活动的反应的形态发生的重要机制46本研究中的数据表明，兴奋性神经元分泌的BDNF通过调节凝胶蛋白的定位来额外控制抑制性突触的形成。虽然我们没有检查BDNF缺乏对格氏蛋白总表达水平的影响，但在之前的工作中，我们证明了其受体TrkB的缺失不会导致格氏蛋白在小脑内的表达降低9因此，我们认为BDNF的主要作用是控制凝胶蛋白的定位，而不是小脑中的表达水平。在之前的工作中，我们已经证明BDNF受体TrkB的激活对于小脑中GABA能突触的突触前和突触后分化和维持都很重要9,12在IGL中，苔藓纤维分泌的TrkB配体BDNF调节颗粒细胞树突上卟啉的聚集；在分子层，颗粒细胞分泌的BDNF调节Purkinje细胞树突上的凝胶蛋白聚集。在每种情况下，一个神经元分泌的BDNF都会促进两个不同细胞群之间GABA能突触的形成。BDNF促进凝胶蛋白聚集的一个潜在分子机制可能是通过BDNF和Wnt信号的相互作用。最近在体外研究表明，BDNF促进Wnt2的表达，Wnt2反过来促进皮质树突状生长和脊柱形成47小脑颗粒细胞和浦肯野细胞均表达Wnt（重量）可能与BDNF协同工作以控制GABA能突触形成的家族成员24.

诸如卟啉和PSD-95等突触后支架蛋白组织神经递质受体来调节突触的稳定和稳态48,49先前的研究表明，BDNF通过通过TrkB、PI3Kinase-Akt、磷脂酶-Cγ和MAPK/ERK信号激活的几种途径调节兴奋性突触的PSD-9550控制PSD95棕榈酰化和磷酸化50在先前的研究中，我们获得的证据表明，TrkB上的PLC-γ结合位点是将卟啉募集到颗粒细胞树突上的GABA能突触后位点所必需的9，暗示钙依赖性途径是TrkB作用的效应物。与此相一致的是，最近最权威的研究表明钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶II参与了磷酸化依赖性地调节卟啉聚集51Gephyrin的定位也由collybistin控制，collybistatin是一种磷脂酰肌醇-3磷酸结合蛋白，具有Rho家族GEF活性，通过与神经鞘磷脂-2的结合以及单体Cdc42同源物CT-10/RhoQ激活52由于磷脂酰肌醇信号和Cdc42被BDNF激活53，除了PLC-γ和钙的下游途径外，BDNF-TrkB还可能通过其他途径控制抑制性突触的形成和维持52.

方法

小鼠应变

使用的小鼠菌株：重量1：：Cre35,mα6：：Cre9,嘘：：eGFP Cre37,Bdnf公司−/−54,Bdnf公司飞行/飞行,55,ROSA公司：：lacZ56,ROSA公司：：ΦYFP57,您的1：：YFP-H线58,Bdnf公司：：lacZ32所有动物均饲养在加州大学旧金山分校实验动物资源中心（LARC）啮齿动物屏障设施和科学、技术和研究机构（A*STAR）生物资源中心（BRC）。所有动物程序均由机构动物护理和使用委员会（IACUC）按照国家卫生研究院和A*STAR BRC动物护理指南批准。采用野生型性别和所有基因型进行分析。

免疫组织化学分析

如前所述，在15-20μm冰冻切片上进行免疫组织化学（Rico等人。2002年）使用荧光结合二级抗体（1:500至1:1000；Jackson Immunoresearch and Molecular Probes，Invitrogen）。将两种性别小鼠的对照组和实验组的组织放在同一张载玻片上，以确保所有组织的处理方式相同。本研究中使用的主要抗体：单克隆小鼠抗成熟BDNF（Mab#9）31，豚鼠抗vGluT1（1:20000；Chemicon）；小鼠抗卟啉（1:8000；Synaptic Systems/SySy）；兔抗卟啉（1:1000；SySy）；兔子抗vGluT1（1:10000）和兔子抗GAD65（1:8000）（来自T.Jessell的礼物；参见参考。39); 小鼠抗GAD67（1:10000；Chemicon）；羊抗GFP（1:500；生物发生）；兔抗GFP（1:1500；分子探针）；兔抗钙调蛋白（1:5000；Swant）；山羊抗β-半乳糖苷酶（1:1000；AbD Serotec）。我们发现，我们研究中使用的所有抗体的野生型和实验动物的染色模式在雄性和雌性之间没有差异。

用抗成熟BDNF（Mab#9）进行组织染色(图1和​和4），4)将脑组织浸泡在4°C的抗原回收溶液（10 mM柠檬酸钠缓冲液，pH 6.0）中过夜。然后将组织浸入煮沸的抗原回收溶液（200–500 ml）中，用热板搅拌3–5分钟。然后将组织置于PBS中30%的冷蔗糖中，并用标准免疫组织化学程序进行处理。

突触蛋白表达和突触蛋白接触的量化

确定小脑小叶I-IV内IGL内单个苔藓纤维末梢周围突触蛋白表达的面积和平均像素强度12，在蔡司LSM 5 Pascal共焦显微镜（63x和100x物镜，n.a.1.40，Plan Apochromat）上收集来自不同小鼠的IGL中固定区域的图像，将单个像素强度保持在对照图像的线性范围内。在低于饱和抗体浓度的冰冻切片上测定每个分析区域内单个肾小球周围感兴趣蛋白的平均面积（高于阈值的像素总和）和荧光像素强度，并使用NIH ImageJ（版本1.38x；美国NIH）中的直方图和颜色直方图函数进行计算。

对于中所示的分析图3和​和7，7，在21374μm的区域内测量阈值以上的像素总数2（63x目标值）用于每个感兴趣的蛋白质，并表示为前面描述的绝对数（Rico等人。2002). 对于所有其他分析，阈值以上的像素总和归一化为8600μm区域内vGluT1表达的像素总和2（100倍目标值），并用面积比表示。阈值是通过测量小脑皮层中不表达感兴趣蛋白质的区域的平均像素强度来确定的。用于BDNF的共定位表达分析(图1)，通过使用RG2B Colocalization公司ImageJ和BDNF表达中未定位于细胞类型特异性标记的宏被使用相同的宏省略(http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/rg2bcolocalization.html).

对于中所示的分析图3和​和7，7，使用前面描述的宏计算突触蛋白之间的接触次数59这个宏通过识别足够大小和信号强度的并置突触前和突触后点子来分析突触的各个方面，并用相同的设置客观地处理图像。

小脑切片培养

根据上述方法，从性别不同的P14小鼠获得器官型小脑切片并培养1周60在含有1 mM氯化钙、10 mM葡萄糖、4 mM氯化钾、5 mM氯化镁、26 mM碳酸氢钠、246 mM蔗糖和酚红溶液（1:1000）（ph7.3）的低钠人工脑脊液（ACSF）中进行脑解剖和切片制备。通过0.22μm过滤器过滤对溶液进行消毒，并将其储存在4°C下。小脑片培养在75%最小必需培养基鹰（MEM）、25%热灭活马血清、25 mM HEPES、1 mM谷氨酰胺、5 mg/ml葡萄糖、青霉素（100 U/ml）和链霉素（100 U/ml）中。在振动切片（徕卡）后，将小脑切片转移到含有30 mM培养板插入物的6孔板上，插入物的孔为0.4μm。每个孔添加1 ml培养基，通过在37°C和5%CO的细胞培养箱中培养至少2小时进行预处理2.

混合小脑神经元培养

在冷CMF-PBS中从P5小鼠（雌雄各半）上解剖小脑，然后机械地切成小块。在含有2.5 ml冷CMF-PBS的15 ml聚丙烯管中收集完整组织。加入250μl 10X胰蛋白酶和10X DNA酶，在37°C下消化小脑10–15分钟。细胞在4°C的800 x RCF下离心5分钟，以去除胰蛋白酶。将细胞重新悬浮在2 ml CMF-PBS中（含200μl 10X DNAse）。用P1000尖端研磨细胞，使总体积达到5 ml。将细胞过滤（70μm尼龙细胞过滤器）到50 ml猎鹰管中，并在4°C的900 x RCF下离心5分钟以去除碎片。然后将细胞重新悬浮在5 ml培养基（+血清）中。细胞被镀在用密度为1×10的聚-D-赖氨酸/聚-L-赖氨醇预处理的玻璃盖玻片上6第二天将培养基换成无血清培养基。每2-3天更换一半培养基。重组人BDNF由Amgen（加州千橡树）慷慨提供。

免疫金标记的电子显微镜分析与定量

对任一性别的P60野生型小鼠进行灌注并使用4%多聚甲醛后固定过夜。小脑组织按照前面描述的方式进行处理9,12我们分析了20张电子显微照片中的单个肾小球（11500倍放大，单个2μm切片）。由于含有一个以上苔藓纤维末端的大型复杂肾小球延伸至显微照片之外，因此只分析了简单肾小球。根据前面描述的标准确定每个肾小球的单个成分9使用他人发布的内容33,34.

其他信息

如何引用这篇文章：陈，A.I。等人。谷氨酸能轴突衍生的BDNF控制小脑GABA能突触分化。科学。代表。 6, 20201; doi:10.1038/srep20201（2016）。

致谢

我们感谢Sarah Ng的技术援助。我们感谢凯文·琼斯提供的样品Bdnf公司：lacZ小鼠和Yves Alain Barde作为抗BDNF杂交瘤系（Mab#9）的礼物。我们感谢Shawn Je、Martesa Tantra和Victoria Turner对手稿的评论。A.I.C.得到了桑德勒博士后研究基金会、沃里克-NTU神经科学项目和新加坡教育部学术研究基金二级（2013-T2-1-039）的支持。工作得到了NIH拨款（1P01 NS16033和1R01 NS081485）的支持。

脚注

作者贡献A.I.C.和L.F.R.设计了研究并准备了手稿，其中包含所有作者的评论。A.I.C.和K.Z.进行了实验并分析了数据。E.M.进行了电子显微镜实验和分析。

工具书类

  • Chao M.V.、Rajagopal R.和Lee F.S。健康和疾病中的神经营养素信号.临床科学 110, 167–173 (2006). [公共医学][谷歌学者]
  • Bloodgood B.L.公司。等人。 活性依赖性转录因子NPAS4调节区域特异性抑制.自然 503, 121–125 (2013).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Je H.S.（Je H.S.）。等人。 ProBDNF和成熟BDNF作为小鼠神经肌肉接头处突触消除的惩罚和奖励信号.神经科学 33, 9957–9962 (2013).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Kaneko M.、Xie Y.、An J.J.、Stryker M.P.和Xu B。树突状BDNF的合成是后期脊柱成熟和感觉剥夺后皮层反应恢复所必需的.神经科学 32, 4790–4802 (2012).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 纳加潘G。等人。 高频神经元活动对ProBDNF细胞外裂解的控制.《美国科学院院刊》 106, 1267–1272 (2009).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Park H.、Popescu A.和Poo M。突触前NMDA受体在活动依赖性BDNF分泌和皮质纹状体LTP中的重要作用.神经元 84, 1009–1022 (2014).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 赖夏特·L.F。神经营养素调节的信号通路.Philos Trans R Soc Lond B生物科学 361, 1545–1564 (2006).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 维格斯·A·J。等人。 维持树突棘和正常行为需要脑源性神经营养因子的持续表达.神经科学 212, 1–18 (2012).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 陈安一。等人。 TrkB（原肌球蛋白相关激酶B）控制小脑皮层GABA能突触的组装和维持.神经科学 31, 2769–2780 (2011).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 黄毅、王建杰、容伟华。。GABA-A受体与氯化物转运体的耦合是小脑浦肯野神经元离子可塑性的基础.小脑 12, 328–330 (2013). [公共医学][谷歌学者]
  • Minichiello L.和Klein R。TrkB和TrkC神经营养素受体协同促进海马和小脑颗粒神经元的存活.基因与发育 10, 2849–2858 (1996). [公共医学][谷歌学者]
  • Rico B.、Xu B.和Reichardt L.F。TrkB受体信号是小脑中GABA能突触建立所必需的.自然神经科学 5, 225–233 (2002).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Sadakata T。等人。 缺乏CAPS2（一种参与神经营养素释放的蛋白质）的小鼠小脑发育和功能受损.神经科学 27, 2472–2482 (2007).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 吉井A。等人。 TrkB和蛋白激酶Mzeta调节发育中皮层PSD-95的突触定位.神经科学 31, 11894–11904 (2011).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 周平（音）。等人。 极化信号内体协调BDNF诱导的小脑前体趋化性.神经元 55, 53–68 (2007).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Cheng Q.和Yeh，H.H。PLCgamma信号通路是BDNF增强Purkinje细胞对GABA反应的基础.神经科学研究杂志 79, 616–627 (2005). [公共医学][谷歌学者]
  • 铃木K.、佐藤M.、森岛Y.和中崎S。神经去极化通过钙调神经磷酸酶信号控制脑源性神经营养因子诱导的NR2C NMDA受体上调.神经科学 25, 9535–9543 (2005).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 安·J·J。等人。 长3′UTR BDNF mRNA在海马神经元脊柱形态和突触可塑性中的独特作用.单元格 134, 175–187 (2008).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 院长C。等人。 突触结合蛋白IV通过调节BDNF的释放调节突触功能和长期增强.自然神经科学 12, 767–776 (2009).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 伊根·M·F。等人。 BDNF val66met多态性影响BDNF活性依赖性分泌、人类记忆和海马功能.单元格 112, 257–269 (2003). [公共医学][谷歌学者]
  • Hong E.J.、McCord A.E.和Greenberg M.E。Bdnf转录中神经元活性依赖成分在皮层抑制发展中的生物学功能.神经元 60, 610–624 (2008).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 黄S.H。等人。 JIP3通过直接桥接TrkB和驱动蛋白-1介导TrkB轴突顺行运输并增强BDNF信号.神经科学 31, 10602–10614 (2011).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 欧阳Q。等人。 Christianson综合征蛋白NHE6调节神经回路发育所需的TrkB内体信号.神经元 80, 97–112 (2013).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 洛伦茨A。等人。 颗粒神经元前体Wnt信号组成型激活后小脑皮质发育的严重改变.分子细胞生物学 31, 3326–3338 (2011).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Lindholm D.、Hamner S.和Zirrgiebel U。神经营养素与小脑发育.展望发展神经生物学 5, 83–94 (1997). [公共医学][谷歌学者]
  • 克莱因·R。等人。 靶向性破坏trkB神经营养素受体基因导致神经系统损伤和新生儿死亡.单元格 75, 113–122 (1993). [公共医学][谷歌学者]
  • 严琦（Yan Q.）。等人。 TrkB在成年大鼠中枢神经系统的免疫细胞化学定位.《计算机神经学杂志》 378, 135–157 (1997). [公共医学][谷歌学者]
  • Bao S.、Chen L.、Qiao X.和Thompson R.F。转基因脑源性神经营养因子调节小脑抑制性突触的发育.学习记忆 6, 276–283 (1999).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 冈萨雷斯M.I。脑源性神经营养因子促进未成熟培养海马细胞中卟啉蛋白表达和GABAA受体聚集.神经化学国际 72, 14–21 (2014).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Andreska T.、Aufmkolk S.、Sauer M.和Blum R。培养海马神经元谷氨酸能突触前内BDNF的高丰度.前细胞神经科学 8, 107 (2014).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 迪尼S。等人。 BDNF及其前肽储存在脑神经元突触前致密核小泡中.J细胞生物学 196, 775–788 (2012).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 法里纳斯一世。等人。 时间调控神经营养素表达对耳蜗神经支配的空间塑造.神经科学杂志 21, 6170–6180 (2001).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Jakab R.L.和Hamori J。大鼠小脑肾小球的定量形态学和突触学.Anat Embryol（柏林） 179, 81–88 (1988). [公共医学][谷歌学者]
  • Palay S.L.和Chan-Palay V。小脑皮层：细胞学和组织学.142–179（施普林格1974）。[谷歌学者]
  • Danielian P.S.、Muccino D.、Rowitch D.H.、Michael S.K.和McMahon A.P。三苯氧胺诱导的Cre重组酶对小鼠子宫胚胎基因活性的修饰.当前生物 8, 1323–1326 (1998). [公共医学][谷歌学者]
  • Conner J.M.、Lauterborn J.C.、Yan Q.、Gall C.M.和Varon S。脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白和mRNA在正常成年大鼠中枢神经系统中的分布，轴突顺行运输的证据.神经科学 17, 2295–2313 (1997).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 哈夫·B.D。等人。 基于扩展的时间Shh梯度确定脊椎动物数字身份的证据.单元格 118, 517–528 (2004). [公共医学][谷歌学者]
  • 丸山E。等人。 脑源性神经营养因子诱导海马突触后短形tenascin R复合体的细胞表面表达.国际生物化学杂志-细胞生物学 39, 1930–1942 (2007). [公共医学][谷歌学者]
  • 贝特利·J·N。等人。 GABA能突触前抑制回路构建的严格特异性.单元格 139, 161–174 (2009).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 坂田K。等人。 启动子IV驱动的BDNF转录在前额叶皮层GABA能传递和突触可塑性中的关键作用.《美国科学院院刊》 106, 5942–5947 (2009).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Carter A.R.、Chen C.、Schwartz P.M.和Segal R.A。脑源性神经营养因子调节小脑可塑性和突触超微结构.神经科学 22, 1316–1327 (2002).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 辛格·K·K。等人。 BDNF-p75NTR依赖性轴突变性介导的发育性轴突修剪.自然神经科学 11, 649–658 (2008). [公共医学][谷歌学者]
  • 吴新海。等人。 proBDNF激活p75NTR促进海马长期抑郁.自然神经科学 8, 1069–1077 (2005). [公共医学][谷歌学者]
  • Sadakata T。等人。 Cadps2基因敲除小鼠的自闭症样表型和自闭症患者异常的Cadps2剪接.临床研究杂志 117, 931–943 (2007).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Rauskolb S.公司。等人。 中枢神经系统脑源性神经营养因子的全面剥夺揭示了树突生长的区域特异性需求.神经科学 30, 1739–1749 (2010).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 田中J。等人。 单个树突棘的蛋白质合成和神经营养素依赖性结构可塑性.科学类 319, 1683–1687 (2008).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Hiester B.G.、Galati D.F.、Salinas P.C.和Jones K.R。神经营养素和Wnt信号协同调节树突棘的形成.分子细胞神经科学 56, 115–127 (2013).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Luscher B.、Fuchs T.和Kilpatrick C.L。GABAA受体介导的抑制性突触可塑性.神经元 70, 385–409 (2011).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 徐伟（Xu W.）。类膜相关鸟苷酸激酶（PSD-MAGUKs）与突触可塑性.Curr Opin神经生理学 21, 306–312 (2011).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Yoshii A.和Constantine-Paton M。PSD-95的突触后定位受TrkB信号传导下游所有三种途径的调节.前突触神经科学 6, 6 (2014).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 弗洛雷斯·C.E。等人。 通过卟啉磷酸化激活依赖性抑制性突触重塑.美国国家科学院程序。 112，E65-72（2015）。[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Tyagarajan S.K.和Fritschy J.M。Gephyrin：神经元功能的主调节器？ 国家神经科学评论 15, 141–156 (2014). [公共医学][谷歌学者]
  • 元X.B。等人。 Rho-GTP酶在介导轴突导向中的信号传递和串扰.Nat细胞生物学 5, 38–45 (2003). [公共医学][谷歌学者]
  • Ernfors P.、Lee K.F.和Jaenisch R。缺乏脑源性神经营养因子的小鼠出现感觉缺陷.自然 368, 147–150 (1994). [公共医学][谷歌学者]
  • 里奥斯·M。等人。 出生后大脑中脑源性神经营养因子的条件性缺失导致肥胖和多动.分子内分泌学 15, 1748–1757 (2001). [公共医学][谷歌学者]
  • 索里亚诺·P·。用ROSA26 Cre报告菌株广义lacZ表达.自然遗传学 21, 70–71 (1999). [公共医学][谷歌学者]
  • 斯里尼瓦斯S。等人。 将EYFP和ECFP靶向插入ROSA26位点产生的Cre报告菌株.BMC开发生物 1, 4 (2001).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • 冯·G。等人。 表达GFP多光谱变异体转基因小鼠的成像神经元亚群.神经元 28, 41–51 (2000). [公共医学][谷歌学者]
  • Beaudoin G.M.，第三届等人。 Afadin是一种Ras/Rap效应器，控制钙粘蛋白功能，促进海马体的脊椎和兴奋性突触密度.神经科学 32, 99–110 (2012).[PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Stoppini L.、Buchs P.A.和Muller D。神经组织器官型培养的一种简单方法.神经科学方法杂志 37, 173–182 (1991). [公共医学][谷歌学者]
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