蛋白质组分析
在蛋白质组学分析中，共鉴定出96个蛋白质。与对照组和AIT组相比，B-ALL中富含亮氨酸的α-2-糖蛋白1（LRG1）、凝集素（CLU）、凝血酶（F2）、肝素辅因子II（SERPIND1）、α-2-巨球蛋白（A2M）、α2-抗原酶（SERPINF2）、α-1抗胰蛋白酶（SERPINA1）、补体因子B（CFB）和补体C3（C3）过表达，因此被确定为B-ALL早期诊断的候选生物标记物。AIT组与对照组相比，这些蛋白质的表达水平没有显著差异，这些蛋白质表达水平没有任何显著变化，这一事实进一步证实了这些潜在的生物标记物在疾病状态下的存在，所有患者在治疗后均获得完全缓解（图).
B-ALL候选蛋白质生物标志物小组。蓝色列表示诊断时B-ALL患者与对照组相关的蛋白质表达水平。绿色列表示诱导治疗后（第35天）B-ALL患者相对于对照组的蛋白质表达水平。(*) (对 < 0.05)
与对照组相比，B-ALL组的LRG1表达上调了2.16倍。LRG1参与细胞粘附和发育、蛋白质相互作用和信号转导。研究表明，它可能是卵巢癌、胰腺癌、口腔鳞癌的生物标志物[8,9]和非小细胞肺癌[10]。与对照组相比，B-ALL组的CLU（也称为载脂蛋白J）上调了2.64倍。CLU在多种组织中表达，具有普遍的表达模式。它对外界压力刺激有很高的敏感性。据报道，它具有抑制补体、清除细胞碎片、折叠变性蛋白（伴侣蛋白）和调节细胞死亡的功能[11,12]。一些研究表明，它在许多严重的生理条件下过度表达，包括退行性肾病和各种神经退行性疾病。CLU在许多人类癌症的发生和进展中也起着重要作用[13]。与正常组织相比，前列腺癌和肾癌的进展中观察到这种蛋白的水平更高[14,15]并且在间变性大细胞淋巴瘤中过度表达[16]，卵巢癌[17]，食管癌[18]和结直肠癌；它还与结直肠癌的预诊断有关[19]。CLU蛋白的积累与某些乳腺肿瘤的侵袭性相关[20].
我们的结果也证实了癌症与凝血相关现象之间的重要关系。一些研究报告称，大约50%的恶性疾病患者和90%以上的转移患者存在凝血和/或纤溶异常的证据[21–25]。本研究中确定的几种蛋白质，如F2、SERPINF2、SERPIND1、A2M，已知与凝血有关；在这里，它们被发现过表达2.12倍、2.20倍、2.56倍和3.10倍。癌细胞可以通过产生凝血酶直接激活凝血系统，也可以通过刺激单核细胞表达多种前凝血蛋白间接激活凝血系统[25]。这些前凝血因子在癌细胞中表达，导致凝血因子VII和X的激活[26,27]。癌细胞释放的细胞因子触发单核细胞、血小板和内皮细胞的凝血活性。纤维蛋白的形成可发生在多种癌症组织中，纤维蛋白基质的形成似乎有助于保护癌细胞免受免疫系统的影响[28]。虽然这项研究报告了凝血相关蛋白在B-ALL患者中的过度表达，B-ALL是循环细胞的恶性肿瘤，但纤维蛋白原可能不参与非粘附性癌症的免疫保护，但可能起到促进癌症生长和扩散的作用[26,29,30]。一些研究报告了止血异常与胃癌之间的关系[31,32]以及癌症与血栓事件的关系[33–38]。其他研究表明，血液中纤维蛋白原水平与胃癌的侵袭性相关[21,35]。Kwon等人[21]据报道，单次测定凝血标志物，尤其是凝血酶-抗凝血酶复合物（TAT）、纤维蛋白单体和D-二聚体，就足以确定癌症患者的预后和生存率。抗凝蛋白的过度表达可能是由于血液中过量凝血酶的刺激所致[21]。Braoudaki等人[39]报道了ALL患者骨髓血浆样本中A2M表达水平的差异性增加。在我们的研究中，B-ALL患者的血清中该蛋白上调了3.1倍，诱导治疗后其表达水平显著下降。然而，与对照组患者的血清样本相比，A2M的表达水平没有明显变化。这表明A2M实际上在B-ALL患者中上调，可以被视为疾病的候选生物标志物，也可以用于评估诱导治疗的反应。此外，血清分析比骨髓活检具有更小的侵入性[39].
与对照组相比，α-1抗胰蛋白酶（SERPINA1）上调了3.06倍。SERPINA1是一种血清糖蛋白，主要在人类肝脏和巨噬细胞中合成。它属于蛇毒蛋白家族，通过抑制中性粒细胞弹性蛋白酶和其他丝氨酸蛋白酶，包括胰蛋白酶、糜蛋白酶、组织蛋白酶G、纤溶酶、凝血酶、组织激肽释放酶和活化因子X（FXa），在控制组织降解中起着中心作用[40–42]。许多类型的癌细胞已被证明表达并分泌α-1抗胰蛋白酶[43–45]。此外，据报道，在许多炎症性疾病和各种恶性肿瘤中，如肝细胞癌、多发性骨髓瘤、胰腺癌、前列腺癌、原发性肺癌、宫颈癌、胃癌、喉癌、鼻咽癌、，乳腺癌和结直肠癌[45–52]。一些研究报告称，这种蛋白的水平与癌症分期相关[47,53–56]。此前对肺癌和前列腺癌的研究表明，血清SERPINA1高水平与癌症分期直接相关。也有人认为癌症患者血液中这种蛋白水平升高的主要原因是癌细胞的生长[47]。在最近的一项针对肺癌和前列腺癌的调查中，在治疗几周后观察到血清SERPINA1水平下降，这表明它可能是癌症治疗效果的一个重要指标[57].
发现与补体系统相关的补体因子B（CFB）和补体C3（C3）上调了3.06倍和6.36倍。补体系统是先天性免疫反应的重要组成部分，参与清除体内改变的细胞。由于与致癌相关的大量遗传和表观遗传改变，肿瘤转化可以提高恶性细胞激活该系统的能力[58]这可能解释了这些蛋白的过度表达，与其他报道肺细胞补体蛋白过度表达的研究一致[59,60]。虽然恶性细胞通常会形成对补体的保护和抵抗机制，但最近对补体活性调节机制的研究表明，过表达的蛋白质具有抑制活性[61–63]。因此，本研究中发现的上调蛋白可能是B-ALL的候选生物标记物，因为只有癌症患者才能观察到表达的改变。接受诱导治疗并经历完全缓解的患者以及对照组的健康个体的血清中这些蛋白的表达水平没有变化，证实了这一结果。
如STRING相互作用数据库生成的蛋白质相互作用网络所示，所有在B-All组中发现上调的九种蛋白质都显示出相互作用的证据(http://string-db.org/)（图). 一些研究表明，凝血酶表达的增加与白血病以及其他几种疾病有关[64,65]。同样，如前所述，癌症患者血液中SERPINA1水平的增加与癌细胞的生长成正比；化疗后数周观察到下降。由于这些蛋白在分离使用时缺乏诊断B-ALL的特异性，我们建议建立生物标记物小组。
STRING交互数据库生成的交互时间。所需置信度（分数）：中等置信度（0.400）
